ಸೆಲ್ ಡೈರೆಕ್ಟ್ RT qPCR ಕಿಟ್-ತಕ್ಮನ್ ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಸೆಲ್ ಲಿಸಿಸ್ ಸೆಲ್ ರೆಡಿ ಒಂದು-ಹಂತದ qRT-PCR ಕಿಟ್ಗಳ ತನಿಖೆ
ವಿವರಣೆಗಳು
ಈ ಉತ್ಪನ್ನವು ಆರ್ಟಿ-ಕ್ಯೂಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗಾಗಿ ಕಲ್ಚರ್ಡ್ ಸೆಲ್ ಸ್ಯಾಂಪಲ್ಗಳಿಂದ ಆರ್ಎನ್ಎಯನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಬಿಡುಗಡೆ ಮಾಡಲು ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಸಮಯ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುವ ಮತ್ತು ಶ್ರಮದಾಯಕ ಆರ್ಎನ್ಎ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಆರ್ಎನ್ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಕೇವಲ 7 ನಿಮಿಷಗಳು, 5× ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಆರ್ಟಿ ಮಿಕ್ಸ್, 2× ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಕ್ಯೂಪಿಸಿಆರ್ ಮಿಕ್ಸ್-ಟಾಕ್ಮ್ಯಾನ್ ಮೂಲಕ ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಬಹುದು.
5× ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಆರ್ಟಿ ಮಿಕ್ಸ್ ಮತ್ತು 2× ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಕ್ಯೂಪಿಸಿಆರ್ ಮಿಕ್ಸ್-ತಕ್ಮನ್ ಪ್ರಬಲವಾದ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಸಹಿಷ್ಣುತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ ಮತ್ತು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ನಂತೆ ಅಳೆಯಲು ಮಾದರಿಯ ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಮರ್ಥ ರಿವರ್ಸಲ್ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಮಾಡಬಹುದು.ಕಾರಕವು ಫೋರ್ಜೀನ್ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್, ಹಾಟ್ ಡಿ-ಟಾಕ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್, ಡಿಎನ್ಟಿಪಿಗಳು, ಎಂಜಿಸಿಎಲ್ ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ2, ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಬಫರ್, PCR ಆಪ್ಟಿಮೈಜರ್ ಮತ್ತು ಸ್ಟೆಬಿಲೈಸರ್, ಇದು ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಮತ್ತು ಸುಲಭವಾಗಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್ನೊಂದಿಗೆ ಬಳಸಬಹುದಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆ, ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರತೆಯ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.
ವಿಶೇಷಣಗಳು
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
ಕಿಟ್ ಘಟಕಗಳು
ತ್ವರಿತ ಸುಲಭTMಸೆಲ್ ಡೈರೆಕ್ಟ್ RT-qPCR ಕಿಟ್-ತಕ್ಮನ್ | ||||
ಕಿಟ್ ಘಟಕಗಳು 20μl qPCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆ | DRT-01021 | DRT-01022 | ಸೂಚನೆ | |
200 ಟಿ | 1000 ಟಿ | |||
ಭಾಗ I | ಬಫರ್ CL | 4 ಮಿ.ಲೀ | 20 ಮಿ.ಲೀ | ಸೆಲ್ ಲಿಸಿಸ್ |
ಫೋರ್ಜೀನ್ ಪ್ರೋಟಿಯೇಸ್ ಪ್ಲಸ್ II | 80 μl | 400 μl | ||
ಬಫರ್ ST | 400 μl | 1 ಮಿಲಿ × 2 | ||
ಭಾಗ II | ಡಿಎನ್ಎ ಎರೇಸರ್ | 80 μl | 400 μl | |
5×ನೇರ ಆರ್ಟಿ ಮಿಕ್ಸ್* | 160 μl | 800 μl | RT | |
2× ನೇರ qPCR ಮಿಕ್ಸ್-ತಕ್ಮನ್ * | 1 ಮಿಲಿ × 2 | 1.7 ಮಿಲಿ × 6 | qPCR | |
20×ROX ರೆಫರೆನ್ಸ್ ಡೈ | 40 μl | 200 μl | ||
RNase-ಮುಕ್ತ ddH2O | 1.7 ಮಿ.ಲೀ | 10 ಮಿ.ಲೀ | ||
ಸೂಚನಾ ಕೈಪಿಡಿ | 1 ತುಣುಕು | 1 ತುಣುಕು |
*:ಸೆಲ್ ಲೈಸಿಸ್, 5×ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಆರ್ಟಿ ಮಿಕ್ಸ್, 2× ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಕ್ಯೂಪಿಸಿಆರ್ ಮಿಕ್ಸ್-ತಕ್ಮನ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ಖರೀದಿಸಬಹುದು
ವೈಶಿಷ್ಟ್ಯಗಳು ಮತ್ತು ಅನುಕೂಲಗಳು
■ಸರಳ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ : ಸೆಲ್ ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಆರ್ಟಿ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದೊಂದಿಗೆ, ಆರ್ಎನ್ಎ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಕೇವಲ 7 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಪಡೆಯಬಹುದು.
■ ಮಾದರಿ ಬೇಡಿಕೆಯು ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ, 10 ಸೆಲ್ಗಳಷ್ಟು ಕಡಿಮೆ ಪರೀಕ್ಷೆ ಮಾಡಬಹುದು.
■ ಹೆಚ್ಚಿನ ಥ್ರೋಪುಟ್: ಇದು 384, 96, 24, 12, 6-ವೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್ಗಳಲ್ಲಿ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಿದ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಆರ್ಎನ್ಎಯನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಪತ್ತೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
■ DNA ಎರೇಸರ್ ಬಿಡುಗಡೆಯಾದ ಜೀನೋಮ್ಗಳನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು, ನಂತರದ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ಮೇಲೆ ಪ್ರಭಾವವನ್ನು ಬಹಳವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
■ ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ RT ಮತ್ತು qPCR ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಎರಡು-ಹಂತದ RT-PCR ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಶನ್ ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು PCR ಹೆಚ್ಚು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು RT-qPCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳಿಗೆ ಹೆಚ್ಚು ನಿರೋಧಕವಾಗಿದೆ.
ಕಿಟ್ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್
ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ವ್ಯಾಪ್ತಿ: ಸುಸಂಸ್ಕೃತ ಜೀವಕೋಶಗಳು.
- ಮಾದರಿ ಲೈಸಿಸ್ನಿಂದ ಬಿಡುಗಡೆಯಾದ RNA: ಈ ಕಿಟ್ನ RT-qPCR ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ಗೆ ಮಾತ್ರ ಅನ್ವಯಿಸುತ್ತದೆ.
- ಕಿಟ್ ಅನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಉದ್ದೇಶಗಳಿಗಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು: ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ, siRNA-ಮಧ್ಯಸ್ಥ ಜೀನ್ ಸೈಲೆನ್ಸಿಂಗ್ ಪರಿಣಾಮದ ಪರಿಶೀಲನೆ, ಡ್ರಗ್ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್, ಇತ್ಯಾದಿ.
ಸಂಗ್ರಹಣೆ ಮತ್ತು ಶೆಲ್ಫ್ ಜೀವನ
ಈ ಕಿಟ್ನ ಭಾಗ I ಅನ್ನು 4 ರಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು℃;ಭಾಗ II ಅನ್ನು -20℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು.
ಫೋರ್ಜೀನ್ ಪ್ರೋಟಿಯೇಸ್ ಪ್ಲಸ್ II ಅನ್ನು 4 ರಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು℃, -20℃ ನಲ್ಲಿ ಫ್ರೀಜ್ ಮಾಡಬೇಡಿ.
ಕಾರಕ 2×ನೇರ qPCR ಮಿಕ್ಸ್-ತಕ್ಮನ್ ಅನ್ನು -20 ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು℃ಕತ್ತಲೆಯಲ್ಲಿ;ಆಗಾಗ್ಗೆ ಬಳಸಿದರೆ, ಅದನ್ನು 4 ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬಹುದುಅಲ್ಪಾವಧಿಯ ಸಂಗ್ರಹಣೆಗಾಗಿ ℃ (10 ದಿನಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸಿ).
ರಿಯಲ್ ಟೈಮ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸ ತತ್ವಗಳು
ಫಾರ್ವರ್ಡ್ ಪ್ರೈಮರ್ ಮತ್ತು ರಿವರ್ಸ್ ಪ್ರೈಮರ್
ರಿಯಲ್ ಟೈಮ್ PCR ಗಾಗಿ, ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸವು ಬಹಳ ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ.ಪ್ರೈಮರ್ಗಳು ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ದಕ್ಷತೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿವೆ ಮತ್ತು ಈ ಕೆಳಗಿನ ತತ್ವಗಳನ್ನು ಉಲ್ಲೇಖಿಸಿ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಬಹುದು:
- ಪ್ರೈಮರ್ ಉದ್ದ: 18-30bp.
- GC ವಿಷಯ: 40-60%.
- Tm ಮೌಲ್ಯ: ಪ್ರೈಮರ್ 5 ನಂತಹ ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸ ಸಾಫ್ಟ್ವೇರ್, ಪ್ರೈಮರ್ನ Tm ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ನೀಡಬಹುದು.ಅಪ್ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಮತ್ತು ಡೌನ್ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಪ್ರೈಮರ್ಗಳ Tm ಮೌಲ್ಯಗಳು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಹತ್ತಿರವಾಗಿರಬೇಕು.Tm ಲೆಕ್ಕಾಚಾರದ ಸೂತ್ರವನ್ನು ಸಹ ಬಳಸಬಹುದು: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR ಅನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವಾಗ, 5 °C ನ ಪ್ರೈಮರ್ Tm ಮೌಲ್ಯಕ್ಕಿಂತ ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವಾಗಿ ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ (ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿನ ಅನುಗುಣವಾದ ಹೆಚ್ಚಳವು PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ).
- ಪ್ರೈಮರ್ಗಳು ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು:
- ಡಿಸೈನ್ ಪ್ರೈಮರ್ PCR ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಉತ್ಪನ್ನದ ಉದ್ದವು 100-150bp ಆಗಿರುತ್ತದೆ.
- ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ನ ದ್ವಿತೀಯಕ ರಚನಾತ್ಮಕ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿ ವಿನ್ಯಾಸ ಪ್ರೈಮರ್ಗಳನ್ನು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ತಪ್ಪಿಸಬೇಕು.
- ಅಪ್ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಮತ್ತು ಡೌನ್ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಪ್ರೈಮರ್ಗಳ 3′ ತುದಿಗಳ ನಡುವೆ 2 ಅಥವಾ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪೂರಕ ಬೇಸ್ಗಳ ರಚನೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.
- ಪ್ರೈಮರ್ 3′ ಟರ್ಮಿನಲ್ ಬೇಸ್ 3 ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಸತತ G ಅಥವಾ C ನೊಂದಿಗೆ ಇರುವಂತಿಲ್ಲ.
- ಪ್ರೈಮರ್ಗಳು ಸ್ವತಃ ಪೂರಕ ರಚನೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ, ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೆ ಹೇರ್ಪಿನ್ ರಚನೆಯು ರಚನೆಯಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.
- ATCG ಅನ್ನು ಪ್ರೈಮರ್ ಅನುಕ್ರಮದಲ್ಲಿ ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಸಮವಾಗಿ ವಿತರಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು 3′ ಟರ್ಮಿನಲ್ ಬೇಸ್ ಅನ್ನು T ಎಂದು ತಪ್ಪಿಸಬೇಕು.
ಅನುಬಂಧ1: ಸಿಎಲ್ಲಾ ನೇರRT-qPCR ಕಿಟ್ ಕಾಂಪೊನೆನ್ಟಿ ಪೂರಕ ಪ್ಯಾಕ್
1.ಸೆಲ್ ಲಿಸಿಸ್ ಪರಿಹಾರ
ಸೆಲ್ ಲಿಸಿಸ್ ಪರಿಹಾರ | |||
ಕಿಟ್ ಘಟಕಗಳು (24-ವೆಲ್ ಲಿಸಿಸ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ / ಬಾವಿ) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
100 ಟಿ | 500 ಟಿ | ||
ಭಾಗI | ಬಫರ್ CL | 20 ಮಿ.ಲೀ | 100 ಮಿ.ಲೀ |
ಫೋರ್ಜೀನ್ ಪ್ರೋಟಿಯೇಸ್ ಪ್ಲಸ್ II | 400 μl | 1 ಮಿಲಿ × 2 | |
ಬಫರ್ ST | 1 ಮಿಲಿ × 2 | 10 ಮಿ.ಲೀ | |
ಭಾಗII | ಡಿಎನ್ಎ ಎರೇಸರ್ | 400 μl | 1 ಮಿಲಿ × 2 |
ಆರ್ಟಿ ಮಿಕ್ಸ್ | |
ಕಿಟ್ ಘಟಕಗಳು (20 μl ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆ) | DRT-01011-B1 |
200 ಟಿ | |
5× ನೇರ RT ಮಿಕ್ಸ್ | 800 μl |
RNase-ಮುಕ್ತ ddH2O | 1.7 ಮಿಲಿ × 2 |
qPCR ಮಿಶ್ರಣ | ||
ಕಿಟ್ ಘಟಕಗಳು (20 μl ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆ) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
200 ಟಿ | 1000 ಟಿ | |
2× ನೇರ qPCR ಮಿಕ್ಸ್-ತಕ್ಮನ್ | 1 ಮಿಲಿ × 2 | 1.7 ಮಿಲಿ × 6 |
20× ROX ರೆಫರೆನ್ಸ್ ಡೈ | 40 μl | 200 μl |
RNase-ಮುಕ್ತ ddH2O | 1.7 ಮಿ.ಲೀ | 10 ಮಿ.ಲೀ |
ಸೂಚನಾ ಕೈಪಿಡಿಗಳು: