ಆರ್ಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವುದಿಲ್ಲ ಅಥವಾ ಆರ್ಎನ್ಎ ಇಳುವರಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ

ಚೇತರಿಕೆಯ ದಕ್ಷತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ವಿವಿಧ ಅಂಶಗಳಿವೆ, ಅವುಗಳೆಂದರೆ: ಅಂಗಾಂಶ ಮಾದರಿ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ವಿಷಯ, ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ವಿಧಾನ, ಎಲುಷನ್ ಪರಿಮಾಣ, ಇತ್ಯಾದಿ.

1. ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಐಸ್ ಸ್ನಾನ ಅಥವಾ ಕ್ರಯೋಜೆನಿಕ್ (4 °C) ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.

ಶಿಫಾರಸು: ಇಡೀ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ (15-25 ° C) ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಿ, ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಐಸ್ ಸ್ನಾನ ಮತ್ತು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡಬೇಡಿ.

2. ಅಸಮರ್ಪಕ ಮಾದರಿ ಸಂರಕ್ಷಣೆ ಅಥವಾ ಅತಿಯಾದ ಮಾದರಿ ಸಂಗ್ರಹ ಸಮಯ.

ಶಿಫಾರಸು: -80 °C ನಲ್ಲಿ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ ಅಥವಾ ದ್ರವ ಸಾರಜನಕದಲ್ಲಿ ಫ್ರೀಜ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಫ್ರೀಜ್-ಲೇಪ ಬಳಕೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ;ಆರ್ಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯಲು ತಾಜಾ ಅಂಗಾಂಶ ಅಥವಾ ಕಲ್ಚರ್ಡ್ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಬಳಸಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿ.

3. ಸಾಕಷ್ಟಿಲ್ಲದ ಮಾದರಿ ಲೈಸಿಸ್.

ಶಿಫಾರಸು: ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ಏಕರೂಪಗೊಳಿಸುವಾಗ, ಅಂಗಾಂಶವು ಸಾಕಷ್ಟು ಏಕರೂಪವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಆರ್ಎನ್ಎ ಬಿಡುಗಡೆಯನ್ನು ವಿವರಿಸಲು ಅಂಗಾಂಶ ಕೋಶಗಳು ಸಾಕಷ್ಟು ವಿಭಜಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿವೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ.

4. ಎಲುವೆಂಟ್ ಅನ್ನು ಸರಿಯಾಗಿ ಸೇರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ.

ಶಿಫಾರಸು: RNase-Free ddH ಎಂದು ದೃಢೀಕರಿಸಿ₂O ಅನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್ ಮೆಂಬರೇನ್‌ನ ಮಧ್ಯಕ್ಕೆ ಡ್ರಾಪ್‌ವೈಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

5. ಸಂಪೂರ್ಣ ಎಥೆನಾಲ್ನ ಸರಿಯಾದ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಬಫರ್ RL2 ಅಥವಾ ಬಫರ್ RW2 ಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ.

ಶಿಫಾರಸು: ಸೂಚನೆಗಳನ್ನು ಅನುಸರಿಸಿ, ಬಫರ್ RL2 ಮತ್ತು ಬಫರ್ RW2 ಗೆ ಸಂಪೂರ್ಣ ಎಥೆನಾಲ್ನ ಸರಿಯಾದ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಕಿಟ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೊದಲು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ.

6. ಅಂಗಾಂಶ ಮಾದರಿ ಡೋಸೇಜ್ ಸೂಕ್ತವಲ್ಲ.

ಶಿಫಾರಸು: 10-20 ಮಿಗ್ರಾಂ ಅಂಗಾಂಶ ಅಥವಾ (1-5) × 10 ಬಳಸಿ⁶500 μl ಬಫರ್ RL1 ಪ್ರತಿ ಜೀವಕೋಶಗಳು, ಅತಿಯಾದ ಅಂಗಾಂಶದ ಬಳಕೆಯು ಕಡಿಮೆ RNA ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು.

7. ಅಸಮರ್ಪಕ ಎಲುಷನ್ ವಾಲ್ಯೂಮ್ ಅಥವಾ ಅಪೂರ್ಣ ಎಲುಷನ್.

ಶಿಫಾರಸು: ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್ನ ಎಲುಷನ್ ಪರಿಮಾಣವು 50-200 μl ಆಗಿದೆ;ಎಲುಷನ್ ಪರಿಣಾಮವು ತೃಪ್ತಿಕರವಾಗಿಲ್ಲದಿದ್ದರೆ, ಪೂರ್ವಭಾವಿಯಾಗಿ ಕಾಯಿಸಲ್ಪಟ್ಟ RNase-ಮುಕ್ತ ddH ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿದ ನಂತರ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದ ನಿಯೋಜನೆ ಸಮಯವನ್ನು ವಿಸ್ತರಿಸಲು ಸೂಚಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ₂O, ಉದಾ 5-10 ನಿಮಿಷಗಳವರೆಗೆ.

8.ಬಫರ್ RW2 ವಾಶ್ ನಂತರ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್ ಎಥೆನಾಲ್ ಶೇಷವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.

ಶಿಫಾರಸು: ಬಫರ್ RW2 ತೊಳೆಯುವ ನಂತರ ಎಥೆನಾಲ್ ಅವಶೇಷಗಳಿದ್ದರೆ, 1 ನಿಮಿಷಕ್ಕೆ ಖಾಲಿ ಟ್ಯೂಬ್ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ, ಖಾಲಿ ಟ್ಯೂಬ್ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ಸಮಯವನ್ನು 2 ನಿಮಿಷಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚಿಸಬಹುದು ಅಥವಾ ಉಳಿದಿರುವ ಎಥೆನಾಲ್ ಅನ್ನು ಸಮರ್ಪಕವಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಲು 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್ ಅನ್ನು ಇರಿಸಬಹುದು.

ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಆರ್ಎನ್ಎ ಕ್ಷೀಣಿಸುತ್ತದೆ

ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ RNA ಯ ಗುಣಮಟ್ಟವು ಮಾದರಿಯ ಸಂರಕ್ಷಣೆ, RNase ಮಾಲಿನ್ಯ ಮತ್ತು ಕುಶಲತೆಯಂತಹ ಅಂಶಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ.

1. ಅಂಗಾಂಶ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸಮಯಕ್ಕೆ ಇಡಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ.

ಶಿಫಾರಸು: ಸಂಗ್ರಹಣೆಯ ನಂತರ ಅಂಗಾಂಶ ಮಾದರಿಗಳು ಅಥವಾ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸಕಾಲಿಕವಾಗಿ ಬಳಸದಿದ್ದರೆ, ತಕ್ಷಣವೇ -80 °C ಅಥವಾ ದ್ರವ ಸಾರಜನಕದಲ್ಲಿ ಕ್ರಯೋಪ್ರೆಸರ್ವ್ ಮಾಡಿ.ಆರ್ಎನ್ಎಯನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲು, ಸಾಧ್ಯವಾದಾಗಲೆಲ್ಲಾ ಹೊಸದಾಗಿ ತೆಗೆದ ಅಂಗಾಂಶ ಅಥವಾ ಜೀವಕೋಶದ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಬಳಸಿ.

2. ಅಂಗಾಂಶ ಮಾದರಿಗಳ ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಫ್ರೀಜ್-ಕರಗಿಸುವಿಕೆ.

ಶಿಫಾರಸು: ಅಂಗಾಂಶ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸುವಾಗ, ಅವುಗಳನ್ನು ಸಂರಕ್ಷಣೆಗಾಗಿ ಸಣ್ಣ ತುಂಡುಗಳಾಗಿ ಕತ್ತರಿಸುವುದು ಉತ್ತಮ, ಮತ್ತು ಮಾದರಿಯ ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಫ್ರೀಜ್-ಕರಗುವಿಕೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಮತ್ತು ಆರ್ಎನ್ಎ ಅವನತಿಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಅವುಗಳನ್ನು ಬಳಸುವಾಗ ತುಂಡುಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುವುದು ಉತ್ತಮ.

3. ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ RNase ಅನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸಲಾಗಿದೆ ಅಥವಾ ಬಿಸಾಡಬಹುದಾದ ಕೈಗವಸುಗಳು, ಮುಖವಾಡಗಳು ಇತ್ಯಾದಿಗಳನ್ನು ಧರಿಸುವುದಿಲ್ಲ.

ಶಿಫಾರಸು: ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಕುಶಲ ಕೊಠಡಿಗಳಲ್ಲಿ ಉತ್ತಮವಾಗಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಗದ ಮೊದಲು ಟೇಬಲ್ ಅನ್ನು ತೆರವುಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

RNase ನ ಪರಿಚಯದಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ RNA ಅವನತಿಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಪ್ರಯೋಗದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಬಿಸಾಡಬಹುದಾದ ಕೈಗವಸುಗಳು ಮತ್ತು ಮುಖವಾಡಗಳನ್ನು ಧರಿಸಿ.

4. ಬಳಕೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ RNase ನೊಂದಿಗೆ ಕಾರಕಗಳು ಕಲುಷಿತಗೊಂಡಿವೆ.

ಶಿಫಾರಸು: ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗಾಗಿ ಹೊಸ ಅನಿಮಲ್ ಟೋಟಲ್ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಐಸೋಲೇಶನ್ ಕಿಟ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಬದಲಾಯಿಸಿ.

5. ಆರ್ಎನ್ಎ ಕುಶಲತೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಟ್ಯೂಬ್ಗಳು, ಸಲಹೆಗಳು, ಇತ್ಯಾದಿಗಳು RNase ನೊಂದಿಗೆ ಕಲುಷಿತಗೊಂಡಿವೆ.

ಶಿಫಾರಸು: ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾದ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳು, ಟಿಪ್ಸ್, ಪೈಪೆಟ್‌ಗಳು ಇತ್ಯಾದಿಗಳು ಎಲ್ಲಾ ಆರ್‌ನೇಸ್-ಫ್ರೀ ಎಂದು ದೃಢೀಕರಿಸಿ.

ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಆರ್ಎನ್ಎ ಕೆಳಮಟ್ಟದ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ

ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್‌ನಿಂದ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ, ಉಪ್ಪು ಅಯಾನುಗಳು ತುಂಬಾ ದೊಡ್ಡದಾಗಿದ್ದರೆ, ಪ್ರೊಟೀನ್ ಅಂಶವು ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಪ್ರಯೋಗದ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ: ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಶನ್, ನಾರ್ದರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟ್ ಮತ್ತು ಇತರರು.

1. ಎಲುಷನ್ಡ್ ಆರ್ಎನ್ಎ ಉಪ್ಪು ಅಯಾನು ಶೇಷಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.

ಶಿಫಾರಸು: ಎಥೆನಾಲ್ನ ಸರಿಯಾದ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಬಫರ್ RW2 ಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ದೃಢೀಕರಿಸಿ ಮತ್ತು ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಗೆ ಸೂಚಿಸಲಾದ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ವೇಗದಲ್ಲಿ 2 ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್ ತೊಳೆಯುವಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಿ;ಯಾವುದೇ ಉಪ್ಪು ಅಯಾನು ಶೇಷ ಇದ್ದರೆ, ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್ ಅನ್ನು ಬಫರ್ RW2 ಗೆ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಬಿಡಿ ಮತ್ತು ಉಪ್ಪಿನ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಗರಿಷ್ಠಗೊಳಿಸಲು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡಿ.

2. ಎಲುಷನ್ಡ್ ಆರ್ಎನ್ಎಯಲ್ಲಿ ಎಥೆನಾಲ್ ಶೇಷ.

ಶಿಫಾರಸು: ಬಫರ್ RW2 ತೊಳೆಯುವ ನಂತರ, ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಗೆ ಸೂಚಿಸಲಾದ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ವೇಗದಲ್ಲಿ ಖಾಲಿ ಟ್ಯೂಬ್ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಿ, ಇನ್ನೂ ಎಥೆನಾಲ್ ಅವಶೇಷಗಳಿದ್ದರೆ ಖಾಲಿ ಟ್ಯೂಬ್ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ಸಮಯವನ್ನು 2 ನಿಮಿಷಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚಿಸಿ ಅಥವಾ 5 ಮೀ ಕೊಠಡಿ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಬಿಡಿ