ಯಾವುದೇ ವರ್ಧನೆ ಸಂಕೇತಗಳಿಲ್ಲ

1. ಕಿಟ್‌ನಲ್ಲಿನ Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅಸಮರ್ಪಕ ಸಂಗ್ರಹಣೆ ಅಥವಾ ಕಿಟ್‌ನ ಮುಕ್ತಾಯದ ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿ ಅದರ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಕಳೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.
ಶಿಫಾರಸು: ಕಿಟ್ನ ಶೇಖರಣಾ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ದೃಢೀಕರಿಸಿ;PCR ವ್ಯವಸ್ಥೆಗೆ Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಸೂಕ್ತ ಮೊತ್ತವನ್ನು ಮರು-ಸೇರಿಸಿ ಅಥವಾ ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗಾಗಿ ಹೊಸ ರಿಯಲ್ ಟೈಮ್ PCR ಕಿಟ್ ಅನ್ನು ಖರೀದಿಸಿ.

2.DNA ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನಲ್ಲಿ Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಸಾಕಷ್ಟು ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳಿವೆ.
ಸಲಹೆ: ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಮರುಪರಿಶೀಲಿಸಿ ಅಥವಾ ಬಳಸಿದ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ.

3.Mg2+ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಸೂಕ್ತವಲ್ಲ.
ಶಿಫಾರಸು: ನಾವು ಒದಗಿಸುವ 2× ನೈಜ PCR ಮಿಶ್ರಣದ Mg2+ ಸಾಂದ್ರತೆಯು 3.5mM ಆಗಿದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಕೆಲವು ವಿಶೇಷ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಿಗೆ, Mg2+ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಹೆಚ್ಚಿರಬಹುದು.ಆದ್ದರಿಂದ, Mg2+ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾಗಿಸಲು ನೀವು ನೇರವಾಗಿ MgCl2 ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಬಹುದು.ಆಪ್ಟಿಮೈಸೇಶನ್‌ಗಾಗಿ ಪ್ರತಿ ಬಾರಿ Mg2+ 0.5mM ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.

4. PCR ವರ್ಧನೆಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು ಸೂಕ್ತವಲ್ಲ, ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್ ಅನುಕ್ರಮ ಅಥವಾ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಅಸಮರ್ಪಕವಾಗಿದೆ.
ಸಲಹೆ: ಪ್ರೈಮರ್ ಅನುಕ್ರಮದ ಸರಿಯಾದತೆಯನ್ನು ದೃಢೀಕರಿಸಿ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್ ಅನ್ನು ಕ್ಷೀಣಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ;ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಸಿಗ್ನಲ್ ಉತ್ತಮವಾಗಿಲ್ಲದಿದ್ದರೆ, ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಸೂಕ್ತವಾಗಿ ಹೊಂದಿಸಿ.

5.ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನ ಪ್ರಮಾಣವು ತುಂಬಾ ಕಡಿಮೆ ಅಥವಾ ತುಂಬಾ ಹೆಚ್ಚು.
ಶಿಫಾರಸು: ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಲೀನಿಯರೈಸೇಶನ್ ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ಡೈಲ್ಯೂಶನ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಿ ಮತ್ತು ನೈಜ ಸಮಯದ PCR ಪ್ರಯೋಗಕ್ಕಾಗಿ ಅತ್ಯುತ್ತಮ PCR ಪರಿಣಾಮದೊಂದಿಗೆ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿ.

NTC ತುಂಬಾ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ

1.ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಉಂಟಾಗುವ ಕಾರಕ ಮಾಲಿನ್ಯ.
ಶಿಫಾರಸು: ರಿಯಲ್ ಟೈಮ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗಾಗಿ ಹೊಸ ಕಾರಕಗಳೊಂದಿಗೆ ಬದಲಾಯಿಸಿ.

2. PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ತಯಾರಿಕೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಮಾಲಿನ್ಯ ಸಂಭವಿಸಿದೆ.
ಶಿಫಾರಸು: ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಅಗತ್ಯ ರಕ್ಷಣಾತ್ಮಕ ಕ್ರಮಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಿ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ: ಲ್ಯಾಟೆಕ್ಸ್ ಕೈಗವಸುಗಳನ್ನು ಧರಿಸುವುದು, ಫಿಲ್ಟರ್ನೊಂದಿಗೆ ಪೈಪೆಟ್ ತುದಿಯನ್ನು ಬಳಸುವುದು ಇತ್ಯಾದಿ.

3. ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಕ್ಷೀಣಗೊಳ್ಳುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ಅವನತಿಯು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ವರ್ಧನೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.
ಸಲಹೆ: ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಡಿಗ್ರೇಡ್ ಆಗಿವೆಯೇ ಎಂಬುದನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು SDS-PAGE ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿ ಮತ್ತು ನೈಜ ಸಮಯದ PCR ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗಾಗಿ ಅವುಗಳನ್ನು ಹೊಸ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಬದಲಾಯಿಸಿ.

ಪ್ರೈಮರ್ ಡೈಮರ್ ಅಥವಾ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ವರ್ಧನೆ

1.Mg2+ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಸೂಕ್ತವಲ್ಲ.
ಶಿಫಾರಸು: ನಾವು ಒದಗಿಸುವ 2× ರಿಯಲ್ PCR ಈಸಿ TM ಮಿಕ್ಸ್‌ನ Mg2+ ಸಾಂದ್ರತೆಯು 3.5 mM ಆಗಿದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಕೆಲವು ವಿಶೇಷ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಿಗೆ, Mg2+ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಹೆಚ್ಚಿರಬಹುದು.ಆದ್ದರಿಂದ, Mg2+ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾಗಿಸಲು ನೀವು ನೇರವಾಗಿ MgCl2 ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಬಹುದು.ಆಪ್ಟಿಮೈಸೇಶನ್‌ಗಾಗಿ ಪ್ರತಿ ಬಾರಿ Mg2+ 0.5mM ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.

2.PCR ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನ ತುಂಬಾ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ.
ಸಲಹೆ: PCR ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಪ್ರತಿ ಬಾರಿ 1℃ ಅಥವಾ 2℃ ಹೆಚ್ಚಿಸಿ.

3.PCR ಉತ್ಪನ್ನವು ತುಂಬಾ ಉದ್ದವಾಗಿದೆ.
ಶಿಫಾರಸು: ರಿಯಲ್ ಟೈಮ್ PCR ಉತ್ಪನ್ನದ ಉದ್ದವು 100-150bp ನಡುವೆ ಇರಬೇಕು, 500bp ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿರಬಾರದು.

4. ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಅವನತಿ ಹೊಂದುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ಅವನತಿಯು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ವರ್ಧನೆಯ ನೋಟಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.
ಸಲಹೆ: ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಡಿಗ್ರೇಡ್ ಆಗಿವೆಯೇ ಎಂಬುದನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು SDS-PAGE ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿ ಮತ್ತು ನೈಜ ಸಮಯದ PCR ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗಾಗಿ ಅವುಗಳನ್ನು ಹೊಸ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಬದಲಾಯಿಸಿ.

5.PCR ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಅಸಮರ್ಪಕವಾಗಿದೆ, ಅಥವಾ ಸಿಸ್ಟಮ್ ತುಂಬಾ ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ.
ಸಲಹೆ: PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ತುಂಬಾ ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ ಪತ್ತೆ ನಿಖರತೆ ಕಡಿಮೆಯಾಗಲು ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.ನೈಜ ಸಮಯದ PCR ಪ್ರಯೋಗವನ್ನು ಮರು-ರನ್ ಮಾಡಲು ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ಉಪಕರಣದಿಂದ ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸುವುದು ಉತ್ತಮವಾಗಿದೆ.

ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಮೌಲ್ಯಗಳ ಕಳಪೆ ಪುನರಾವರ್ತನೆ

1. ಉಪಕರಣವು ಅಸಮರ್ಪಕವಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತಿದೆ.
ಸಲಹೆ: ಉಪಕರಣದ ಪ್ರತಿ PCR ರಂಧ್ರದ ನಡುವೆ ದೋಷಗಳಿರಬಹುದು, ತಾಪಮಾನ ನಿರ್ವಹಣೆ ಅಥವಾ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವಿಕೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಕಳಪೆ ಪುನರುತ್ಪಾದನೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.ದಯವಿಟ್ಟು ಅನುಗುಣವಾದ ಉಪಕರಣದ ಸೂಚನೆಗಳ ಪ್ರಕಾರ ಪರಿಶೀಲಿಸಿ.

2. ಮಾದರಿ ಶುದ್ಧತೆ ಉತ್ತಮವಾಗಿಲ್ಲ.
ಶಿಫಾರಸು: ಅಶುದ್ಧ ಮಾದರಿಗಳು ಪ್ರಯೋಗದ ಕಳಪೆ ಪುನರುತ್ಪಾದನೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತವೆ, ಇದು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ಶುದ್ಧತೆಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ.ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಪುನರುಜ್ಜೀವನಗೊಳಿಸುವುದು ಉತ್ತಮವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು SDS-PAGE ಮೂಲಕ ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

3.PCR ಸಿಸ್ಟಂ ತಯಾರಿ ಮತ್ತು ಶೇಖರಣಾ ಸಮಯ ತುಂಬಾ ಉದ್ದವಾಗಿದೆ.
ಸಲಹೆ: ತಯಾರಿಕೆಯ ನಂತರ ತಕ್ಷಣವೇ PCR ಪ್ರಯೋಗಕ್ಕಾಗಿ ರಿಯಲ್ ಟೈಮ್ PCR ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸಿ ಮತ್ತು ಅದನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ಕಾಲ ಪಕ್ಕಕ್ಕೆ ಇಡಬೇಡಿ.

4. PCR ವರ್ಧನೆಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು ಸೂಕ್ತವಲ್ಲ, ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್ ಅನುಕ್ರಮ ಅಥವಾ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಅಸಮರ್ಪಕವಾಗಿದೆ.
ಸಲಹೆ: ಪ್ರೈಮರ್ ಅನುಕ್ರಮದ ಸರಿಯಾದತೆಯನ್ನು ದೃಢೀಕರಿಸಿ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್ ಅನ್ನು ಕ್ಷೀಣಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ;ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಸಿಗ್ನಲ್ ಉತ್ತಮವಾಗಿಲ್ಲದಿದ್ದರೆ, ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಸೂಕ್ತವಾಗಿ ಹೊಂದಿಸಿ.

5.PCR ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಅಸಮರ್ಪಕವಾಗಿದೆ, ಅಥವಾ ಸಿಸ್ಟಮ್ ತುಂಬಾ ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ.
ಸಲಹೆ: PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ತುಂಬಾ ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ ಪತ್ತೆ ನಿಖರತೆ ಕಡಿಮೆಯಾಗಲು ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.ನೈಜ ಸಮಯದ PCR ಪ್ರಯೋಗವನ್ನು ಮರು-ರನ್ ಮಾಡಲು ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ಉಪಕರಣದಿಂದ ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸುವುದು ಉತ್ತಮವಾಗಿದೆ.