• ಫೇಸ್ಬುಕ್
  • ಲಿಂಕ್ಡ್ಇನ್
  • YouTube

RNase ಒಂದು ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಪದವಾಗಿದ್ದು, ಆಗಾಗ್ಗೆ RNA ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ನಡೆಸುವ ಅನೇಕ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳು ಕೇಳಲು ಬಯಸುವುದಿಲ್ಲ.ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಶಸ್ತ್ರಸಜ್ಜಿತವಾದ, ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚು ವಿಷಕಾರಿ ಕಾರಕಗಳಾದ ಫೀನಾಲ್ ಮತ್ತು ಕ್ಲೋರೊಫಾರ್ಮ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಹೊರತೆಗೆಯಲಾದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಕ್ಷೀಣಿಸಿತು.ನಾನು ರಾಜಿಯಾಗಿಲ್ಲ!!!ಇಂದು, ಪ್ರಸಿದ್ಧ Rnase ಮೂಲವನ್ನು ನೋಡೋಣ.

ರೈಬೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ (RNase), ಅಥವಾ RNase, ಒಂದು ನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಆಗಿದ್ದು ಅದು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಸಣ್ಣ ಅಣುಗಳಾಗಿ ಹೈಡ್ರೊಲೈಜ್ ಮಾಡಬಹುದು.RNase, ಒಂದು ಸಣ್ಣ ಅಣುವಿನ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಆಗಿ, ಅಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುತ್ತದೆ .ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನ ಮತ್ತು ಅಧಿಕ ಒತ್ತಡದ ಉಗಿ ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳು ಅದನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ.RNase ನ ಸ್ಥಿರತೆಯು ಮುಖ್ಯವಾಗಿ ರಚನೆಯಲ್ಲಿನ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧಗಳಿಂದ ಬರುತ್ತದೆ.ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಗೋವಿನ ಮೇದೋಜ್ಜೀರಕ ಗ್ರಂಥಿಯ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ RNase ಕೇವಲ 124 ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಆದರೆ 4 ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ.ಸಲ್ಫರ್ ಬಂಧ ಮತ್ತು ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧವು ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಉಷ್ಣ ಸ್ಥಿರತೆಯೊಂದಿಗೆ RNase ಅನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ.ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, rnase ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಸಣ್ಣ ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು ಅನೇಕ ಸಂದರ್ಭಗಳಲ್ಲಿ ಅದರ ಮೂಲ ರಚನೆಯನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಮರುಸ್ಥಾಪಿಸಬಹುದು.

ಅತ್ಯಂತ ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುವುದರ ಜೊತೆಗೆ,RNases ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದಲ್ಲಿ ಸರ್ವತ್ರ .RNase ಒಂದು ಜೈವಿಕ ರಕ್ಷಣಾ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವಾಗಿದೆ.ಜೀವಕೋಶಕ್ಕೆ, ಬಾಹ್ಯ ಆರ್ಎನ್ಎ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಮಾರಕವಾಗಿದೆ.ಬಾಹ್ಯ DNA ಯೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಬಾಹ್ಯ RNA ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಅಪಾಯಕಾರಿ.ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಸಂತೋಷದಿಂದ ಲಿಪ್ಯಂತರಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಅನುವಾದಿಸಲಾಗಿದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಬಹುತೇಕ ಎಲ್ಲಾ ಜೀವಿಗಳು ಬಾಹ್ಯ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಆಕ್ರಮಣದ ವಿರುದ್ಧ ರಕ್ಷಿಸಲು ಆರ್‌ನೇಸ್‌ಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿವೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಿದ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಆರ್ಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ನೀವು RNase ನ ಪರಿಮಳವನ್ನು ಹೊರಹಾಕುತ್ತವೆ.ಮಾನವ ದೇಹದ ದ್ರವಗಳು (ಲಾಲಾರಸ, ಕಣ್ಣೀರು, ಇತ್ಯಾದಿ) ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದ RNase ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ, ಆದ್ದರಿಂದ RNA ಕ್ಷೀಣಿಸಿದಾಗ ಅಳಬೇಡಿ.ನೀವು ಹೆಚ್ಚು ಅಳುತ್ತೀರಿ, ಆರ್ಎನ್ಎ ಅವನತಿ ಕೆಟ್ಟದಾಗಿದೆ!!ಸಹೋದರಿ ದೈಯು ಆರ್ಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯಲು ಸೂಕ್ತವಲ್ಲ!

ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ನಿಮ್ಮ ಸೂಕ್ಷ್ಮವಾದ ಚರ್ಮವು ಬಹಳಷ್ಟು RNase ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಚರ್ಮದಿಂದ ಸ್ಪರ್ಶಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಮಾರ್ಕರ್‌ಗಳು, ಪೈಪೆಟ್‌ಗಳು, ರೆಫ್ರಿಜರೇಟರ್ ಬಾಗಿಲುಗಳು ಮತ್ತು ಬಾಗಿಲಿನ ಹಿಡಿಕೆಗಳು ಸಹ RNase ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ.

ತುಂಬಾ ಸುತ್ತಾಡುವುದರೊಂದಿಗೆ, RNases ಅನ್ನು ಹೇಗೆ ಎದುರಿಸಬೇಕೆಂದು ನೋಡೋಣ.

ಆರ್ಎನ್ಎ ತೆಗೆಯುವಾಗ ಎಲ್ಲರೂ ಯೋಚಿಸುವ ಮೊದಲ ವಿಷಯDEPC(ಡೈಥೈಲ್ ಪೈರೋಕಾರ್ಬೊನೇಟ್).DEPC ಮುಖ್ಯವಾಗಿ RNase ಸಕ್ರಿಯ ಗುಂಪಿನ ಹಿಸ್ಟಿಡಿನ್‌ನ ಇಮಿಡಾಜೋಲ್ ರಿಂಗ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ನಿರಾಕರಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಕಿಣ್ವದ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ.0.1% DEPC Rnase ಮೇಲೆ ಉತ್ತಮ ತೆಗೆಯುವ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ, ಆದರೆ DEPC ತಿಳಿದಿರುವ ಕಾರ್ಸಿನೋಜೆನ್ ಎಂದು ನಾವು ಗಮನ ಹರಿಸಬೇಕಾಗಿದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಅದನ್ನು ಬಳಸುವಾಗ ವಿಶೇಷ ಗಮನವನ್ನು ನೀಡಬೇಕು.

RNase ಗಾಗಿ, ನಾವು ಎರಡು ಅಂಶಗಳಿಂದ ಪ್ರಾರಂಭಿಸಬೇಕಾಗಿದೆ,ಮೊದಲನೆಯದು ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ RNase ನ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುವುದು

ಟ್ರೈಝೋಲ್‌ನಲ್ಲಿರುವ ಗ್ವಾನಿಡಿನ್ ಐಸೊಥಿಯೋಸೈನೇಟ್ ಮತ್ತು ಡಿಟಿಟಿಯಂತಹ ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಕಾರಕಗಳು ಆರ್‌ನೇಸ್‌ನ ಡೈಸಲ್ಫೈಡ್ ಬಂಧವನ್ನು ತೆರೆಯಬಹುದು, ಆದರೆ ಇನ್ನೂ ಕೆಲವು ಆರ್‌ನೇಸ್‌ಗಳಿವೆ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಅಂಗಾಂಶ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ, ಆದ್ದರಿಂದ ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನಕ್ಕೆ ಗಮನ ಕೊಡಿ.

1.ಅಂಗಾಂಶದ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಹೊರತೆಗೆದ ನಂತರ ದ್ರವ ಸಾರಜನಕದಲ್ಲಿ ಅಥವಾ ವಾಣಿಜ್ಯ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಸಂರಕ್ಷಣೆಯ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ತಕ್ಷಣವೇ ಮುಳುಗಿಸಿ.

2.ಜೀವಕೋಶದ ಮಾದರಿಯ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಹೊರತೆಗೆದ ನಂತರ, ಅದನ್ನು ಲೈಸಿಸ್ ದ್ರಾವಣಕ್ಕೆ ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಅದನ್ನು ಐಸ್ ಬಾಕ್ಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಲೈಸ್ ಮಾಡಿ

3. ಗ್ರೈಂಡಿಂಗ್ಗಾಗಿ ದ್ರವ ಸಾರಜನಕವನ್ನು ಬಳಸುವುದು ಉತ್ತಮ ಅಂಗಾಂಶ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಏಕರೂಪಗೊಳಿಸಿದಾಗ.ದ್ರವ ಸಾರಜನಕವಿಲ್ಲದೆಯೇ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಿಕ್ ಹೋಮೋಜೆನೈಜರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುವಾಗ, ಹೋಮೊಜೆನೇಟ್ ಅಡಾಪ್ಟರ್ ಅನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಪೂರ್ವ-ತಂಪಾಗಿಸಲು ಗಮನ ಕೊಡಿ.

sgre (2)

ಎರಡನೆಯದು ಬಾಹ್ಯ DNase

1.ಸಂಪೂರ್ಣ ಶಸ್ತ್ರಸಜ್ಜಿತರಾಗಿರಿ, ಲ್ಯಾಬ್ ಕೋಟ್ ಧರಿಸಿ, ಮಾಸ್ಕ್ ಧರಿಸಿ, ಮತ್ತು ಒಂದು ಜೊತೆ ಹೊಸ ಕೈಗವಸುಗಳನ್ನು ಧರಿಸಲು ಮರೆಯದಿರಿ (ಅಷ್ಟು ಮಿತವ್ಯಯ ಮಾಡಬೇಡಿ!! ಟ್ರೈಝೋಲ್ ಸೂಪರ್ ನಾಶಕಾರಿ ಎಂದು ಗಮನಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಇದು ಕೈಗವಸುಗಳ ಮೂಲಕವೂ ತುಂಬಾ ಪ್ರಬಲವಾಗಿದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ನಿಮ್ಮ ಕೈಗಳಿಗೆ ಹನಿ ಹಾಕಬೇಡಿ).

2.ಎಲ್ಲಾ ಬಳಸಿದ ಪೈಪೆಟ್ ಟಿಪ್ಸ್, ಇಪಿ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳು, ಪಿಸಿಆರ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಉಪಕರಣಗಳನ್ನು ಡಿ-ಆರ್‌ನೇಸ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಮಾಡಬೇಕು.ಇದನ್ನು 0.1% DEPC ಯಲ್ಲಿ ನೆನೆಸಿ ನಂತರ ಹೆಚ್ಚಿನ ಒತ್ತಡದಲ್ಲಿ ಒತ್ತಬಹುದು.ಫ್ಯೂಮ್ ಹುಡ್ನಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಗೆ ಗಮನ ಕೊಡಿ.ಸ್ಥಳೀಯ ನಿರಂಕುಶಾಧಿಕಾರಿಗಳು ಕಿಣ್ವಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಉಪಭೋಗ್ಯ ವಸ್ತುಗಳನ್ನು ನೇರವಾಗಿ ಖರೀದಿಸಬಹುದು.

PS: ನಾನು ನಿಮಗೆ ಒಂದು ಸೋಮಾರಿಯಾದ ವಿಧಾನವನ್ನು ಹೇಳುತ್ತೇನೆ.ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನ ಮತ್ತು ಅಧಿಕ ಒತ್ತಡವು RNase ಅನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲವಾದರೂ, ಅದು ಅದರ ಹೆಚ್ಚಿನ ಭಾಗವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುತ್ತದೆ.2 ಬಾರಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನ ಮತ್ತು ಅಧಿಕ ಒತ್ತಡವು ಉತ್ತಮ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬೀರುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ಆರ್ಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯು ಕಡಿಮೆ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬೀರುತ್ತದೆ.

3.ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳನ್ನು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಬಹುದು,ಆದ್ದರಿಂದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಟೇಬಲ್ ಅನ್ನು 75% ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್‌ನಿಂದ ಒರೆಸಬಹುದು , ಮತ್ತು ಕೈಗವಸುಗಳನ್ನು ಸಹ ಮದ್ಯದೊಂದಿಗೆ ಸಿಂಪಡಿಸಬಹುದಾಗಿದೆ.

4.ಅಂತಿಮ ಆರ್ಎನ್ಎ ಕರಗಿಸುವ ಪರಿಹಾರ ಮತ್ತು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್ ಅನ್ನು ಡಿ-ಆರ್ನೇಸ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಮಾಡಬೇಕು.DEPC ನೀರು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಕರಗಿಸುವ ಪರಿಹಾರವಾಗಿದೆ.DEPC ನೀರಿನ ಸರಿಯಾದ ತಯಾರಿಕೆಯ ವಿಧಾನದ ಬಗ್ಗೆ ಮಾತನಾಡೋಣ (ನೀವು ಅದನ್ನು ಖರೀದಿಸಿದಾಗ ವಾಣಿಜ್ಯ DEPC ಅನ್ನು ಮರುಪ್ಯಾಕೇಜ್ ಮಾಡಲು ಮರೆಯದಿರಿ)

1:1000 ಕ್ಕೆ ಅಲ್ಟ್ರಾಪ್ಯೂರ್ ನೀರಿಗೆ DEPC ಸೇರಿಸಿ, ಚೆನ್ನಾಗಿ ಅಲ್ಲಾಡಿಸಿ, ರಾತ್ರಿಯಲ್ಲಿ 37 ° C ನಲ್ಲಿ ನಿಲ್ಲಲು ಬಿಡಿ, ಮತ್ತು 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಒತ್ತಡದಲ್ಲಿ 121 ° C ನಲ್ಲಿ ಕ್ರಿಮಿನಾಶಗೊಳಿಸಿ.DEPC ನೀರನ್ನು 1ml ಆಲ್ಕೋಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ -20 ° C ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬಹುದು.

ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ: ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನವು ಪ್ರಮುಖವಾಗಿದೆ, ಉಪಭೋಗ್ಯವನ್ನು ಚೆನ್ನಾಗಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಸಂಪೂರ್ಣ ಶಸ್ತ್ರಸಜ್ಜಿತ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ಮಾತುಕತೆ!

ಸರಿ, ಇಂದಿನ ತಂತ್ರಕ್ಕೆ ಅದು ಇಲ್ಲಿದೆ.ನೀವು ಹೇಳಿದ ಎಲ್ಲಾ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಸಾಂದ್ರತೆ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧತೆಯನ್ನು ನಾನು ಬಯಸುತ್ತೇನೆ.A260/A280 ಎರಡೂ 2.0!!!

ಸಹಜವಾಗಿ, ನೀವು ಎ ಬಳಸಿದರೆಕೊಠಡಿ ತಾಪಮಾನ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆ ಆರ್ಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಕಿಟ್, ಮೇಲಿನ ತೊಂದರೆಗಳನ್ನು ನೀವು ಎದುರಿಸದೇ ಇರಬಹುದು.

ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆ, DNase ಅನ್ನು ಸೇರಿಸದೆಯೇ, 11 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಂದ ಒಟ್ಟು RNA ಅನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 30 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರಾಣಿಗಳ ಅಂಗಾಂಶಗಳು ಅಥವಾ ಸಸ್ಯಗಳಿಂದ ಒಟ್ಟು RNA ಅನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯುತ್ತದೆ.

ಪ್ರಯೋಗ ಮಾದರಿಗಳಿಗಾಗಿ, ದಯವಿಟ್ಟು ಸಂಪರ್ಕಿಸಿ:overseas@foregene.com

ಸಂಬಂಧಿತ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/

sgre (1)sgre (3)


ಪೋಸ್ಟ್ ಸಮಯ: ಆಗಸ್ಟ್-25-2022