ಪಿಸಿಆರ್ ಹೆಚ್ಚು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಅದರ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯಿಂದಾಗಿ ಇದನ್ನು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, PCR ಗೆ ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಥರ್ಮಲ್ ಡಿನಾಟರೇಶನ್ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಉಪಕರಣಗಳು ಮತ್ತು ಸಲಕರಣೆಗಳ ಮೇಲೆ ಅವಲಂಬಿತವಾಗಿರುವ ಮಿತಿಗಳನ್ನು ತೊಡೆದುಹಾಕಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ, ಇದು ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಕ್ಷೇತ್ರ ಪರೀಕ್ಷೆಯಲ್ಲಿ ಅದರ ಅನ್ವಯವನ್ನು ಮಿತಿಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ.

1990 ರ ದಶಕದ ಆರಂಭದಿಂದಲೂ, ಅನೇಕ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳು ಥರ್ಮಲ್ ಡಿನಾಟರೇಶನ್ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲದ ನಿರಂತರ ತಾಪಮಾನ ವರ್ಧನೆಯ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಿವೆ.ಈಗ ಅವರು ಲೂಪ್-ಮಧ್ಯಸ್ಥ ಐಸೊಥರ್ಮಲ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನ, ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ರಿಪ್ಲೇಸ್‌ಮೆಂಟ್ ಐಸೊಥರ್ಮಲ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನ, ರೋಲಿಂಗ್ ಸರ್ಕಲ್ ಐಸೋಥರ್ಮಲ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನ ಮತ್ತು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸ್ ಅವಲಂಬನೆಯನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದ್ದಾರೆ.ಐಸೊಥರ್ಮಲ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನ ಮತ್ತು ಇತರ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳು. 

Lಊಪ್-ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಯ ಐಸೊಥರ್ಮಲ್ ವರ್ಧನೆ

ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ತತ್ವವು ಡಿಎನ್‌ಎ ಸುಮಾರು 65 ಡಿಗ್ರಿ ಸೆಲ್ಸಿಯಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಡೈನಾಮಿಕ್ ಸಮತೋಲನ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿದೆ ಎಂಬ ಅಂಶವನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ.ಯಾವುದೇ ಪ್ರೈಮರ್ ಬೇಸ್-ಜೋಡಿಯಾದಾಗ ಮತ್ತು ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಯ ಪೂರಕ ಭಾಗಕ್ಕೆ ವಿಸ್ತರಿಸಿದಾಗ, ಇತರ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ವಿಘಟನೆಯಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸಿಂಗಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಆಗುತ್ತದೆ.

ಈ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ, ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್-ಡಿಸ್ಪ್ಲೇಸ್‌ಮೆಂಟ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಲು ಡಿಎನ್‌ಎ 4 ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ.

ಮೊದಲು ಗುರಿಯ ಜೀನ್‌ನಲ್ಲಿ 6 ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರದೇಶಗಳನ್ನು F3, F2, F1, B1, B2, B3 ನಿರ್ಧರಿಸಿ, ತದನಂತರ ಈ 6 ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರದೇಶಗಳ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ 4 ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಿ (ಕೆಳಗಿನ ಚಿತ್ರದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ):

ಫಾರ್ವರ್ಡ್ ಒಳಗಿನ ಪ್ರೈಮರ್ (FIP) F1c ಮತ್ತು F2 ನಿಂದ ಕೂಡಿದೆ.

ಹಿಂದುಳಿದ ಒಳಗಿನ ಪ್ರೈಮರ್ (BIP) B1c ಮತ್ತು B2 ಗಳಿಂದ ಕೂಡಿದೆ ಮತ್ತು TTTT ಅನ್ನು ಮಧ್ಯದಲ್ಲಿ ಸ್ಪೇಸರ್ ಆಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಹೊರಗಿನ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು F3 ಮತ್ತು B3 ಅನುಕ್ರಮವಾಗಿ ಗುರಿ ಜೀನ್‌ನಲ್ಲಿ F3 ಮತ್ತು B3 ಪ್ರದೇಶಗಳಿಂದ ಕೂಡಿದೆ.

LAMP ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ, ಒಳಗಿನ ಪ್ರೈಮರ್‌ನ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಹೊರಗಿನ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಿಂತ ಹಲವಾರು ಪಟ್ಟು ಹೆಚ್ಚು.ಡಿಎನ್ಎ ಡಬಲ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಅನ್ನು ರೂಪಿಸಲು ಪೂರಕ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಅನ್ನು ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲು ಒಳಗಿನ ಪ್ರೈಮರ್ ಅನ್ನು ಮೊದಲು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ತರುವಾಯ, ಡಿಎನ್ಎ ಡಬಲ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಅನ್ನು ರೂಪಿಸಲು ಹೊರಗಿನ ಪ್ರೈಮರ್ ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.BstDNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಕ್ರಿಯೆಯ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ, ಒಳಗಿನ ಪ್ರೈಮರ್‌ನಿಂದ ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಪೂರಕ ಎಳೆಯನ್ನು ಬಿಡುಗಡೆ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳ ಸರಣಿಯ ನಂತರ, ಕಾಂಪ್ಲಿಮೆಂಟರಿ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಡಂಬ್ಬೆಲ್ ರಚನೆಯೊಂದಿಗೆ ಒಂದೇ ಡಿಎನ್ಎ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಅನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ.

ಡಂಬ್ಬೆಲ್ ರಚನೆಯ ಡಿಎನ್ಎ ಸಿಂಗಲ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಅನ್ನು ನಿರಂತರವಾಗಿ ತೆರೆದ ಅಂತ್ಯದೊಂದಿಗೆ ಪರಿವರ್ತನೆಯ ಕಾಂಡ-ಲೂಪ್ ರಚನೆ ಡಿಎನ್ಎ ರೂಪಿಸಲು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಒಳ ಮತ್ತು ಹೊರ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಟ್ರಾನ್ಸಿಶನಲ್ ಸ್ಟೆಮ್-ಲೂಪ್ ಸ್ಟ್ರಕ್ಚರ್ ಡಿಎನ್‌ಎಗೆ ನಿರಂತರವಾಗಿ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಡಿಸ್ಪ್ಲೇಸ್‌ಮೆಂಟ್ ಮತ್ತು ಎಕ್ಸ್‌ಟೆನ್ಶನ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್‌ಗಳಿಗೆ ಒಳಗಾಗಲು ಮಾರ್ಗದರ್ಶನ ನೀಡುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಅಂತಿಮವಾಗಿ ವಿವಿಧ ಉದ್ದಗಳೊಂದಿಗೆ ಬಹು ಕಾಂಡ-ಲೂಪ್ ರಚನೆಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತವೆ.ಡಿಎನ್ಎ ಮಿಶ್ರಣ.

ಲೂಪ್-ಮಧ್ಯಸ್ಥ ಐಸೊಥರ್ಮಲ್ ವರ್ಧನೆಯ ಅನುಕೂಲಗಳು ಮತ್ತು ಅನಾನುಕೂಲಗಳು

LAMP ನ ಪ್ರಯೋಜನಗಳು:

(1) ಹೆಚ್ಚಿನ ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆ, ಇದು 1 ಗಂಟೆಯೊಳಗೆ ಗುರಿ ಜೀನ್‌ನ 1-10 ಪ್ರತಿಗಳನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ವರ್ಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆಯು ಸಾಮಾನ್ಯ PCR ಗಿಂತ 10-100 ಪಟ್ಟು ಹೆಚ್ಚು.

(2) ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಸಮಯ ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ, ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯು ಪ್ರಬಲವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಯಾವುದೇ ವಿಶೇಷ ಉಪಕರಣಗಳ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲ.

LAMP ನ ನ್ಯೂನತೆಗಳು:

(1) ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ಅವಶ್ಯಕತೆಗಳು ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿವೆ.

(2) ವರ್ಧಿತ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ಕ್ಲೋನಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಅನುಕ್ರಮಕ್ಕಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ, ಆದರೆ ತೀರ್ಪುಗಾಗಿ ಮಾತ್ರ ಬಳಸಬಹುದು.

(3) ಅದರ ಬಲವಾದ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯಿಂದಾಗಿ, ಏರೋಸಾಲ್‌ಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸುವುದು ಸುಲಭ, ಇದು ತಪ್ಪು ಧನಾತ್ಮಕತೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪರೀಕ್ಷಾ ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.

Sಟ್ರಾಂಡ್ ಸ್ಥಳಾಂತರದ ವರ್ಧನೆ

ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಡಿಸ್ಪ್ಲೇಸ್‌ಮೆಂಟ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ (ಎಸ್‌ಡಿಎ) ಎಂಬುದು 1992 ರಲ್ಲಿ ಅಮೇರಿಕನ್ ವಿದ್ವಾಂಸ ವಾಕರ್ ಪ್ರಸ್ತಾಪಿಸಿದ ಕಿಣ್ವಕ ಕ್ರಿಯೆಯ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ವಿಟ್ರೊ ಐಸೊಥರ್ಮಲ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ವರ್ಧನೆ ತಂತ್ರವಾಗಿದೆ.

SDA ಯ ಮೂಲ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ನಿರ್ಬಂಧಿತ ಎಂಡೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್, ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಡಿಸ್ಪ್ಲೇಸ್‌ಮೆಂಟ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್, ಎರಡು ಜೋಡಿ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು, dNTP ಗಳು ಮತ್ತು ಕ್ಯಾಲ್ಸಿಯಂ ಮತ್ತು ಮೆಗ್ನೀಸಿಯಮ್ ಅಯಾನುಗಳು ಮತ್ತು ಬಫರ್ ಸಿಸ್ಟಮ್‌ಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ.

ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಡಿಸ್ಪ್ಲೇಸ್ಮೆಂಟ್ ವರ್ಧನೆಯ ತತ್ವವು ಗುರಿಯ DNA ಯ ಎರಡೂ ತುದಿಗಳಲ್ಲಿ ರಾಸಾಯನಿಕವಾಗಿ ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ನಿರ್ಬಂಧದ ಎಂಡೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಗುರುತಿಸುವಿಕೆಯ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ.ಎಂಡೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ತನ್ನ ಗುರುತಿಸುವಿಕೆಯ ಸ್ಥಳದಲ್ಲಿ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಯಲ್ಲಿನ ಅಂತರವನ್ನು ತೆರೆಯುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅಂತರವನ್ನು 3′ ಎಂಡ್ ಅನ್ನು ವಿಸ್ತರಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಮುಂದಿನ ಡಿಎನ್‌ಎ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಅನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುತ್ತದೆ.

ಡಿಎನ್‌ಎಯ ಬದಲಿ ಏಕ ಎಳೆಗಳನ್ನು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನಿಂದ ಡಬಲ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್‌ಗಳಾಗಿ ವಿಸ್ತರಿಸಬಹುದು.ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ನಿರಂತರವಾಗಿ ಪುನರಾವರ್ತನೆಯಾಗುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಗುರಿ ಅನುಕ್ರಮವು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ವರ್ಧಿಸುತ್ತದೆ.

ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಡಿಸ್ಪ್ಲೇಸ್ಮೆಂಟ್ ವರ್ಧನೆ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದ ಅನುಕೂಲಗಳು ಮತ್ತು ಅನಾನುಕೂಲಗಳು

SDA ಯ ಪ್ರಯೋಜನಗಳು:

ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆಯು ಅಧಿಕವಾಗಿದೆ, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಸಮಯವು ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ, ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯು ಪ್ರಬಲವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಯಾವುದೇ ವಿಶೇಷ ಉಪಕರಣಗಳ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲ.

SDA ಯ ನ್ಯೂನತೆಗಳು:

ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಏಕರೂಪವಾಗಿರುವುದಿಲ್ಲ, ಮತ್ತು ಕೆಲವು ಸಿಂಗಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಮತ್ತು ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಯಾವಾಗಲೂ SDA ಚಕ್ರದಲ್ಲಿ ಉತ್ಪಾದಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್‌ನಿಂದ ಪತ್ತೆಯಾದಾಗ ಟೈಲಿಂಗ್ ಅನಿವಾರ್ಯವಾಗಿ ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ.

Rಓಲಿಂಗ್ ಸರ್ಕಲ್ ವರ್ಧನೆ

ರೋಲಿಂಗ್ ಸರ್ಕಲ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ (ಆರ್‌ಸಿಎ) ಅನ್ನು ರೋಲಿಂಗ್ ಸರ್ಕಲ್ ಮೂಲಕ ರೋಗಕಾರಕ ಜೀವಿಗಳಿಂದ ಡಿಎನ್‌ಎ ನಕಲಿಸುವ ವಿಧಾನವನ್ನು ಚಿತ್ರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರಸ್ತಾಪಿಸಲಾಗಿದೆ.ಇದು ಸ್ಥಿರ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನಂತೆ ಏಕ-ತಂತಿಯ ವೃತ್ತಾಕಾರದ ಡಿಎನ್‌ಎ ಬಳಕೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಗುರಿ ಜೀನ್‌ನ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ರೋಲಿಂಗ್ ಸರ್ಕಲ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಕ್ರಿಯೆಯ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ವಿಶೇಷ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ (ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಫಿ29) .

RCA ಅನ್ನು ರೇಖೀಯ ವರ್ಧನೆ ಮತ್ತು ಘಾತೀಯ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಎಂದು ವಿಂಗಡಿಸಬಹುದು.ರೇಖೀಯ RCA ದಕ್ಷತೆಯು 10 ತಲುಪಬಹುದು⁵ಬಾರಿ, ಮತ್ತು ಘಾತೀಯ RCA ದಕ್ಷತೆಯು 10 ತಲುಪಬಹುದು⁹ಬಾರಿ.

ಸರಳವಾದ ವ್ಯತ್ಯಾಸ, ಕೆಳಗಿನ ಚಿತ್ರದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ, ರೇಖೀಯ ವರ್ಧನೆಯು ಕೇವಲ 1 ಪ್ರೈಮರ್ ಅನ್ನು ಮಾತ್ರ ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಘಾತೀಯ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ b 2 ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.

ಲೀನಿಯರ್ RCA ಅನ್ನು ಸಿಂಗಲ್ ಪ್ರೈಮರ್ RCA ಎಂದೂ ಕರೆಯುತ್ತಾರೆ.ಪ್ರೈಮರ್ ವೃತ್ತಾಕಾರದ ಡಿಎನ್‌ಎಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಕ್ರಿಯೆಯಿಂದ ವಿಸ್ತರಿಸಲ್ಪಡುತ್ತದೆ.ಉತ್ಪನ್ನವು ಒಂದು ಲೂಪ್‌ನ ಉದ್ದಕ್ಕಿಂತ ಸಾವಿರಾರು ಪಟ್ಟು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಅನುಕ್ರಮಗಳೊಂದಿಗೆ ರೇಖೀಯ ಏಕ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಆಗಿದೆ.

ರೇಖೀಯ RCA ಯ ಉತ್ಪನ್ನವು ಯಾವಾಗಲೂ ಆರಂಭಿಕ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗೆ ಸಂಪರ್ಕಗೊಂಡಿರುವುದರಿಂದ, ಸಿಗ್ನಲ್‌ನ ಸುಲಭ ಸ್ಥಿರೀಕರಣವು ಪ್ರಮುಖ ಪ್ರಯೋಜನವಾಗಿದೆ.

ಘಾತೀಯ RCA, ಹೈಪರ್ ಬ್ರಾಂಚ್ಡ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ HRCA (ಹೈಪರ್ ಬ್ರಾಂಚ್ಡ್ RCA) ಎಂದೂ ಸಹ ಕರೆಯಲ್ಪಡುತ್ತದೆ, ಘಾತೀಯ RCA ಯಲ್ಲಿ, ಒಂದು ಪ್ರೈಮರ್ RCA ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ವರ್ಧಿಸುತ್ತದೆ, ಎರಡನೇ ಪ್ರೈಮರ್ RCA ಉತ್ಪನ್ನದೊಂದಿಗೆ ಹೈಬ್ರಿಡೈಸ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ವಿಸ್ತರಿಸುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ಬದಲಿಯು ಈಗಾಗಲೇ RCA ಉತ್ಪನ್ನಕ್ಕೆ ಬದ್ಧವಾಗಿದೆ ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಅನ್ನು ವಿಸ್ತರಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು RCA ವಿಸ್ತರಣೆಯನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಮತ್ತು ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ಪುನರಾವರ್ತಿಸಲು.

ರೋಲಿಂಗ್ ಸರ್ಕಲ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ವರ್ಧನೆಯ ಅನುಕೂಲಗಳು ಮತ್ತು ಅನಾನುಕೂಲಗಳು

RCA ಯ ಪ್ರಯೋಜನಗಳು:

ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂವೇದನೆ, ಉತ್ತಮ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ಸುಲಭ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆ.

ಆರ್ಸಿಎ ನ್ಯೂನತೆಗಳು:

ಸಿಗ್ನಲ್ ಪತ್ತೆ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹಿನ್ನೆಲೆ ಸಮಸ್ಯೆಗಳು.RCA ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಪರಿಚಲನೆಯಾಗದ ಪ್ಯಾಡ್‌ಲಾಕ್ ತನಿಖೆ ಮತ್ತು ಅನ್‌ಬೌಂಡ್ ಪ್ರೋಬ್‌ನ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ DNA ಅಥವಾ RNA ಕೆಲವು ಹಿನ್ನೆಲೆ ಸಂಕೇತಗಳನ್ನು ರಚಿಸಬಹುದು. 

Nಯುಕ್ಲಿಕಾಸಿಡ್ ಅನುಕ್ರಮ-ಆಧಾರಿತ ವರ್ಧನೆ

ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸ್-ಬೇಸ್ಡ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ (NASBA) ಪಿಸಿಆರ್ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾದ ಹೊಸ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವಾಗಿದೆ.ಇದು ನಿರಂತರ ಮತ್ತು ಐಸೊಥರ್ಮಲ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ವರ್ಧನೆಯಾಗಿದ್ದು, T7 ಪ್ರವರ್ತಕ ಅನುಕ್ರಮದೊಂದಿಗೆ ಜೋಡಿ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳಿಂದ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿಸಲ್ಪಡುತ್ತದೆ.ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವು ಸುಮಾರು 2 ಗಂಟೆಗಳಲ್ಲಿ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಸುಮಾರು 109 ಪಟ್ಟು ವರ್ಧಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಪಿಸಿಆರ್ ವಿಧಾನಕ್ಕಿಂತ 1000 ಪಟ್ಟು ಹೆಚ್ಚು ಮತ್ತು ವಿಶೇಷ ಉಪಕರಣಗಳ ಅಗತ್ಯವಿರುವುದಿಲ್ಲ.

ಈ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವು ಕಾಣಿಸಿಕೊಂಡ ತಕ್ಷಣ ರೋಗಗಳ ತ್ವರಿತ ರೋಗನಿರ್ಣಯಕ್ಕಾಗಿ ಬಳಸಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಸ್ತುತ ಅನೇಕ ಕಂಪನಿಗಳು ಈ ವಿಧಾನವನ್ನು ಆರ್ಎನ್ಎ ಪತ್ತೆ ಕಿಟ್ಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸುತ್ತವೆ.

ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ವರ್ಧನೆಯು ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಪಿಸಿಆರ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಸಹ ಬಳಸಬಹುದಾದರೂ, ಎನ್‌ಎಎಸ್‌ಬಿಎ ತನ್ನದೇ ಆದ ಪ್ರಯೋಜನಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ: ಇದನ್ನು ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಸ್ಥಿರವಾದ ತಾಪಮಾನದ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಕೈಗೊಳ್ಳಬಹುದು ಮತ್ತು ಇದು ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಪಿಸಿಆರ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಸ್ಥಿರ ಮತ್ತು ನಿಖರವಾಗಿದೆ.

ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯು 41 ಡಿಗ್ರಿ ಸೆಲ್ಸಿಯಸ್‌ನಲ್ಲಿದೆ ಮತ್ತು AMV (ಏವಿಯನ್ ಮೈಲೋಬ್ಲಾಸ್ಟೋಸಿಸ್ ವೈರಸ್) ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್, RNase H, T7 RNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಮತ್ತು ಪೂರ್ಣಗೊಳಿಸಲು ಒಂದು ಜೋಡಿ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ಅಗತ್ಯವಿದೆ.

ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ಮುಖ್ಯವಾಗಿ ಒಳಗೊಂಡಿದೆ:

ಫಾರ್ವರ್ಡ್ ಪ್ರೈಮರ್ T7 ಪ್ರವರ್ತಕನ ಪೂರಕ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ.ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಫಾರ್ವರ್ಡ್ ಪ್ರೈಮರ್ ಆರ್ಎನ್ಎ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಡಿಎನ್ಎ-ಆರ್ಎನ್ಎ ಡಬಲ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಅನ್ನು ರೂಪಿಸಲು AMV ಕಿಣ್ವದಿಂದ ವೇಗವರ್ಧನೆಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.

RNase H ಹೈಬ್ರಿಡ್ ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್‌ನಲ್ಲಿ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಜೀರ್ಣಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸಿಂಗಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.

ರಿವರ್ಸ್ ಪ್ರೈಮರ್ ಮತ್ತು AMV ಕಿಣ್ವದ ಕ್ರಿಯೆಯ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ, T7 ಪ್ರವರ್ತಕ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ DNA ಡಬಲ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ರಚನೆಯಾಗುತ್ತದೆ.

T7 RNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಕ್ರಿಯೆಯ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ, ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ಪೂರ್ಣಗೊಂಡಿದೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದ ಗುರಿ RNA ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುತ್ತದೆ.

NASBA ಯ ಪ್ರಯೋಜನಗಳು:

(1) ಇದರ ಪ್ರೈಮರ್ T7 ಪ್ರವರ್ತಕ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಆದರೆ ವಿದೇಶಿ ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ DNA T7 ಪ್ರವರ್ತಕ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಹೊಂದಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ವರ್ಧಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ, ಆದ್ದರಿಂದ ಈ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವು ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.

(2) NASBA ನೇರವಾಗಿ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ವರ್ಧನೆ ಕ್ರಿಯೆಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸುತ್ತದೆ, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಸಮಯವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

NASBA ನ ಅನಾನುಕೂಲಗಳು:

(1) ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಅಂಶಗಳು ಹೆಚ್ಚು ಜಟಿಲವಾಗಿವೆ.

(2) ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ವೆಚ್ಚವನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ಮಾಡಲು ಮೂರು ರೀತಿಯ ಕಿಣ್ವಗಳು ಅಗತ್ಯವಿದೆ.