ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದಲ್ಲಿ ಹೊಸದಾಗಿರುವಂತೆ, ಕಡಿಮೆ ಪರಿವರ್ತನೆ ದರವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಸಸ್ಯಗಳ ಗುಂಪಿನಿಂದ ಧನಾತ್ಮಕ ಸಸ್ಯಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸುವುದು ಉತ್ತಮ ಕೆಲಸವಲ್ಲ.ಮೊದಲನೆಯದಾಗಿ, ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಮಾದರಿಗಳಿಂದ ಒಂದೊಂದಾಗಿ ಹೊರತೆಗೆಯಬೇಕು ಮತ್ತು ನಂತರ ವಿದೇಶಿ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಪಿಸಿಆರ್ ಪತ್ತೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ ಕೆಲವು ಐಟಂಗಳೊಂದಿಗೆ ಖಾಲಿ ಮತ್ತು ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳಾಗಿರುತ್ತವೆ, ಆದರೆ ತಪ್ಪಿದ ಪತ್ತೆಗಳು ಅಥವಾ ತಪ್ಪು ಪತ್ತೆಗಳು ಇವೆಯೇ ಎಂಬುದನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಅಸಾಧ್ಯ..ಅಂತಹ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆ ಮತ್ತು ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಎದುರಿಸಲು ಇದು ತುಂಬಾ ಅಸಹಾಯಕವಾಗಿದೆಯೇ?ಚಿಂತಿಸಬೇಡಿ, ಟ್ರಾನ್ಸ್ಜೆನಿಕ್ ಧನಾತ್ಮಕ ಸಸ್ಯಗಳನ್ನು ಸುಲಭವಾಗಿ ಮತ್ತು ನಿಖರವಾಗಿ ಹೇಗೆ ಪರೀಕ್ಷಿಸಬೇಕೆಂದು ಸಹೋದರ ನಿಮಗೆ ಕಲಿಸುತ್ತಾನೆ.

ಹಂತ 1

ಡಿಸೈನ್ ಡಿಟೆಕ್ಷನ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು

ಪರೀಕ್ಷಿಸಬೇಕಾದ ಮಾದರಿಯ ಪ್ರಕಾರ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಜೀನ್ ಮತ್ತು ಬಾಹ್ಯ ಜೀನ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಿ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸಕ್ಕಾಗಿ ಜೀನ್‌ನಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿನಿಧಿ 100-500bp ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿ.ಉತ್ತಮ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಪತ್ತೆ ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ನಿಖರತೆಯನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಬಹುದು ಮತ್ತು ಪತ್ತೆ ಸಮಯವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದು (ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ ಪತ್ತೆ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳಿಗಾಗಿ ಅನುಬಂಧವನ್ನು ನೋಡಿ).

ಸೂಚನೆ:ಹೊಸದಾಗಿ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾದ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾಗಿಸಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ದೊಡ್ಡ-ಪ್ರಮಾಣದ ಪತ್ತೆಗೆ ಮೊದಲು ಪತ್ತೆಯ ನಿಖರತೆ, ನಿಖರತೆ ಮತ್ತು ಪತ್ತೆ ಮಿತಿಯನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಬೇಕು.

ಹಂತ 2

ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ವಿನ್ಯಾಸ

ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ: PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆ ಮತ್ತು ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿದೆಯೇ ಎಂಬುದನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನಂತೆ ಗುರಿಯ ತುಣುಕನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ DNA ಅನ್ನು ಬಳಸಿ.

ಋಣಾತ್ಮಕ/ಖಾಲಿ ನಿಯಂತ್ರಣ: PCR ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ ಮಾಲಿನ್ಯದ ಮೂಲವಿದೆಯೇ ಎಂಬುದನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನಂತೆ ಗುರಿಯ ತುಣುಕನ್ನು ಹೊಂದಿರದ DNA ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅಥವಾ ddH2O ಅನ್ನು ಬಳಸಿ.

ಆಂತರಿಕ ಉಲ್ಲೇಖ ನಿಯಂತ್ರಣ: PCR ಮೂಲಕ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದೇ ಎಂದು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ಮಾದರಿಯ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಜೀನ್‌ನ ಪ್ರೈಮರ್/ಪ್ರೋಬ್ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಬಳಸಿ.

ಸೂಚನೆ:

ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ಸಿಂಧುತ್ವವನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲು ಪ್ರತಿ ಪರೀಕ್ಷೆಗೆ ಧನಾತ್ಮಕ, ಋಣಾತ್ಮಕ/ಖಾಲಿ ನಿಯಂತ್ರಣಗಳು ಮತ್ತು ಆಂತರಿಕ ನಿಯಂತ್ರಣ ನಿಯಂತ್ರಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿಸಬೇಕು.

ಪ್ರಯೋಗ ತಯಾರಿ

ಬಳಕೆಗೆ ಮೊದಲು, ಪರಿಹಾರವು ಸಮವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣವಾಗಿದೆಯೇ ಎಂಬುದನ್ನು ಗಮನಿಸಿ.ಮಳೆಯು ಕಂಡುಬಂದರೆ, ಬಳಕೆಗೆ ಮೊದಲು ಸೂಚನೆಗಳ ಪ್ರಕಾರ ಅದನ್ನು ಕರಗಿಸಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ.ಅಸಮ ಅಯಾನು ವಿತರಣೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು 2×PCR ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಪೈಪೆಟ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಮೈಕ್ರೋಪಿಪೆಟ್ನೊಂದಿಗೆ ಪದೇ ಪದೇ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ.

ಸೂಚನೆ:

ಕೈಪಿಡಿಯನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಂಡು ಅದನ್ನು ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ಓದಿ, ಮತ್ತು ಕೈಪಿಡಿಯ ಅವಶ್ಯಕತೆಗಳಿಗೆ ಕಟ್ಟುನಿಟ್ಟಾದ ಅನುಸಾರವಾಗಿ ಪ್ರಯೋಗದ ಮೊದಲು ಸಿದ್ಧತೆಗಳನ್ನು ಮಾಡಿ.

ಹಂತ 4

ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ

ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ಪ್ರಕಾರ, ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು, H2O ಮತ್ತು 2×PCR ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಸಮವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ, ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮತ್ತು ಅವುಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ ವಿತರಿಸಿ.

ಸೂಚನೆ:

ದೊಡ್ಡ ಪ್ರಮಾಣದ ಅಥವಾ ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ಪರೀಕ್ಷೆಗಾಗಿ, ಯುಎನ್‌ಜಿ ಕಿಣ್ವವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಪಿಸಿಆರ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಏರೋಸಾಲ್ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ತಪ್ಪಿಸುತ್ತದೆ.

ಹಂತ 5

ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಸೇರಿಸಿ

ನೇರ ಪಿಸಿಆರ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, ಬೇಸರದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲ, ಮಾದರಿ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು 10 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ತಯಾರಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಅನುಗುಣವಾದ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಸೇರಿಸಬಹುದು.

ಸೂಚನೆ:

ಸೀಳು ವಿಧಾನವು ಉತ್ತಮ ಪತ್ತೆ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಮತ್ತು ಪಡೆದ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ಬಹು ಪತ್ತೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗೆ ಬಳಸಬಹುದು.

5.1: ಎಲೆಗಳ ನೇರ ವಿಸ್ತರಣೆ

ಕೈಪಿಡಿಯಲ್ಲಿನ ಚಿತ್ರದ ಗಾತ್ರದ ಪ್ರಕಾರ, ಎಲೆಯ ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು 2-3 ಮಿಮೀ ವ್ಯಾಸದೊಂದಿಗೆ ಕತ್ತರಿಸಿ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ.

ಗಮನಿಸಿ: ಎಲೆಯ ತುಣುಕುಗಳು ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಮುಳುಗಿರುವುದನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ ಮತ್ತು ಅತಿಯಾದ ಎಲೆ ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ಸೇರಿಸಬೇಡಿ.

5.2: ಲೀಫ್ ಸ್ಪ್ಲಿಟ್ ವಿಧಾನ

5-7 ಮಿಮೀ ವ್ಯಾಸದ ಎಲೆಯ ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ಕತ್ತರಿಸಿ ಅದನ್ನು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ.ನೀವು ಪ್ರೌಢ ಎಲೆಗಳನ್ನು ಆರಿಸಿದರೆ, ದಯವಿಟ್ಟು ಎಲೆಯ ಮುಖ್ಯ ರಕ್ತನಾಳದ ಅಂಗಾಂಶಗಳನ್ನು ಬಳಸುವುದನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.ಪಿಪೆಟ್ 50ul ಬಫರ್ P1 ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ ಲೈಸೇಟ್ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಎಲೆಯ ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ಮುಳುಗಿಸುತ್ತದೆ, ಅದನ್ನು ಥರ್ಮಲ್ ಸೈಕ್ಲರ್ ಅಥವಾ ಲೋಹದ ಸ್ನಾನದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ ಮತ್ತು 5-10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 95 ° C ನಲ್ಲಿ ಲೈಸ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

50ul ಬಫರ್ P2 ನ್ಯೂಟ್ರಾಲೈಸೇಶನ್ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ.ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಬಳಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗೆ ಸೇರಿಸಬಹುದು.

ಗಮನಿಸಿ: ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನ ಪ್ರಮಾಣವು PCR ಸಿಸ್ಟಂನ 5-10% ರ ನಡುವೆ ಇರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 20% ಮೀರಬಾರದು (ಉದಾಹರಣೆಗೆ, 20μl PCR ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ, 1-2μl ಲೈಸಿಸ್ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ, 4μl ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿಲ್ಲ).

ಹಂತ 6

ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ

ಪಿಸಿಆರ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಟ್ಯೂಬ್ ಅನ್ನು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿಗೊಳಿಸಿದ ನಂತರ, ಅದನ್ನು ವರ್ಧನೆಗಾಗಿ ಪಿಸಿಆರ್ ಉಪಕರಣದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಸೂಚನೆ:

ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯು ವರ್ಧನೆಗಾಗಿ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸದ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ವರ್ಧನೆಯ ಚಕ್ರಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ DNA ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುವಾಗ 5-10 ಹೆಚ್ಚು ಚಕ್ರಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.

ಹಂತ 7

ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಪತ್ತೆ ಮತ್ತು ಫಲಿತಾಂಶದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ

ಎಂ: 100ಬಿಪಿ ಡಿಎನ್ಎ ಲ್ಯಾಡರ್

1\4: ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ DNA ವಿಧಾನ

2\5: ನೇರ ಪಿಸಿಆರ್ ವಿಧಾನ

3\6: ಖಾಲಿ ನಿಯಂತ್ರಣ

QC:

ಪ್ರಯೋಗದಲ್ಲಿ ಹೊಂದಿಸಲಾದ ವಿವಿಧ ನಿಯಂತ್ರಣಗಳ ಪರೀಕ್ಷಾ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಷರತ್ತುಗಳನ್ನು ಪೂರೈಸಬೇಕು.ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೆ, ಸಮಸ್ಯೆಯ ಕಾರಣವನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು ತೊಡೆದುಹಾಕಿದ ನಂತರ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಮತ್ತೊಮ್ಮೆ ನಡೆಸಬೇಕು.

ಕೋಷ್ಟಕ 1. ವಿವಿಧ ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪುಗಳ ಸಾಮಾನ್ಯ ಪರೀಕ್ಷಾ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು

*ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಅನ್ನು ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ ಬಳಸಿದಾಗ, ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಜೀನ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯ ಫಲಿತಾಂಶವು ಋಣಾತ್ಮಕವಾಗಿರುತ್ತದೆ

ಫಲಿತಾಂಶದ ತೀರ್ಪು:

A. ಮಾದರಿಯ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಜೀನ್‌ನ ಪರೀಕ್ಷಾ ಫಲಿತಾಂಶವು ಋಣಾತ್ಮಕವಾಗಿದೆ, ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯ PCR ಪತ್ತೆಗೆ ಸೂಕ್ತವಾದ DNA ಅನ್ನು ಮಾದರಿಯಿಂದ ಹೊರತೆಗೆಯಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ ಅಥವಾ ಹೊರತೆಗೆಯಲಾದ DNA PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪ್ರತಿಬಂಧಕಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು DNA ಅನ್ನು ಮತ್ತೆ ಹೊರತೆಗೆಯಬೇಕು ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.

B. ಮಾದರಿಯ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಜೀನ್‌ನ ಪರೀಕ್ಷಾ ಫಲಿತಾಂಶವು ಧನಾತ್ಮಕವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಬಾಹ್ಯ ಜೀನ್‌ನ ಪರೀಕ್ಷಾ ಫಲಿತಾಂಶವು ಋಣಾತ್ಮಕವಾಗಿದೆ, ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯ PCR ಪತ್ತೆಗೆ ಸೂಕ್ತವಾದ DNA ಅನ್ನು ಮಾದರಿಯಿಂದ ಹೊರತೆಗೆಯಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು XXX ಜೀನ್ ಅನ್ನು ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲಾಗಿಲ್ಲ ಎಂದು ನಿರ್ಣಯಿಸಬಹುದು.

C. ಮಾದರಿಯ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಜೀನ್‌ನ ಪರೀಕ್ಷಾ ಫಲಿತಾಂಶವು ಧನಾತ್ಮಕವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಬಾಹ್ಯ ಜೀನ್‌ನ ಪರೀಕ್ಷಾ ಫಲಿತಾಂಶವು ಧನಾತ್ಮಕವಾಗಿದೆ, ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯ PCR ಪತ್ತೆಗೆ ಸೂಕ್ತವಾದ DNA ಅನ್ನು ಮಾದರಿಯಿಂದ ಹೊರತೆಗೆಯಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಮಾದರಿ DNA XXX ಜೀನ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ.ದೃಢೀಕರಣ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ಮತ್ತಷ್ಟು ನಡೆಸಬಹುದು.

ಹಂತ 8

ಡಿಸೈನ್ ಡಿಟೆಕ್ಷನ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು

ಪ್ರಯೋಗದ ನಂತರ, ಪರಿಸರ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತಡೆಗಟ್ಟಲು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪ್ರದೇಶವನ್ನು ಒರೆಸಲು 2% ಸೋಡಿಯಂ ಹೈಪೋಕ್ಲೋರೈಟ್ ದ್ರಾವಣ ಮತ್ತು 70% ಎಥೆನಾಲ್ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಬಳಸಿ.