ಅಂಟು ಚೇತರಿಕೆ ಸುಧಾರಿಸಲು ಸಲಹೆಗಳು

1. ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಮಾದರಿ ಲೋಡ್ ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿ.

2. ಹೊಸದಾಗಿ ತಯಾರಿಸಿದ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಬಫರ್ ಬಳಸಿ.

3. ಅಂಟು ಕತ್ತರಿಸುವಾಗ, ಅಂಟು ಕತ್ತರಿಸುವಿಕೆಯ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಪಟ್ಟಿಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಂಟು ಮಾತ್ರ ಕತ್ತರಿಸಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿ: ಕೆಲವು ಉದ್ದೇಶದ ತುಣುಕುಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಂಟು ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲ, ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೆ ಅದು ಚೇತರಿಕೆ ದರವನ್ನು ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.

4. ಎರಡು ಅಥವಾ ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಂಟು ತುಂಡುಗಳನ್ನು ಕರಗಿಸಿದ ನಂತರ, ಪರಿಮಾಣವು ಎಷ್ಟು ದೊಡ್ಡದಾಗಿದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಲೆಕ್ಕಿಸದೆ ಟ್ಯೂಬ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿ ಮತ್ತು ಅದನ್ನು ಅದೇ ಕಾಲಮ್ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ.

5. ಸೋಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಸೇರಿಸಲಾದ ದ್ರಾವಣವು ಸ್ವಲ್ಪ ಹೆಚ್ಚಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಪೊರೆಗೆ ಬಂಧಿಸಲು ಹೆಚ್ಚು ಅನುಕೂಲಕರವಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 750ul ಅನ್ನು ಮೀರುವುದಿಲ್ಲ.

6. ಜೆಲ್ ಚೇತರಿಕೆಯ ಕೀಲಿಯು ಕಾಲಮ್‌ನಲ್ಲಿನ ದ್ರಾವಣದ ಉಪ್ಪಿನ ಸಾಂದ್ರತೆ, ಆಮ್ಲೀಯತೆ (ಚಾರ್ಜ್) ಮತ್ತು ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಸಿಟಿಯ ಮೂಲಕ ಕಾಲಮ್‌ಗೆ ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನ್ನು ಬಂಧಿಸುವುದು.ಆದ್ದರಿಂದ, ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಬಫರ್‌ನ pH ತುಂಬಾ ಹೆಚ್ಚಿದ್ದರೆ, 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) ಅನ್ನು ಸೋಲ್‌ಗೆ ಸೇರಿಸಬಹುದು;ಪೊರೆಯ ಮೇಲೆ DNA ಅಣುಗಳನ್ನು ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಲು, ಅಂಟು ಕರಗಿದ ನಂತರ ದ್ರವಕ್ಕೆ ಬಿಸಿಮಾಡಲು 30% ಐಸೊಪ್ರೊಪನಾಲ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಬಹುದು.

7. ಎಲುವೆಂಟ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೊದಲು, ಎಥೆನಾಲ್ ಅನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಆವಿಯಾಗಿಸಲು ಕೆಲವು ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ (ಸುಮಾರು 10 ನಿಮಿಷಗಳು) ಕಾಲಮ್ ಅನ್ನು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಬಿಡಿ.

8. ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಚೇತರಿಕೆಯ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಕಡಿಮೆ ಲ್ಯುಯೆಂಟ್ ಸೇರಿಸಿ.ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, 30-50μl ಎಲ್ಯುಯೆಂಟ್ ಅನ್ನು ಎಲುಷನ್ಗಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ (ತುಂಬಾ ಕಡಿಮೆ ಅಲ್ಲ, ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೆ ಅದು ಪೊರೆಯನ್ನು ತೇವಗೊಳಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುವುದಿಲ್ಲ, ಇದು ಎಲುಷನ್ಗೆ ಅನುಕೂಲಕರವಾಗಿಲ್ಲ);ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆಯ ಹನಿಗಳು ಪೊರೆಯ ಮಧ್ಯಭಾಗದಲ್ಲಿದ್ದು, ಪೊರೆಗೆ ಬಂಧಿತವಾಗಿರುವ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಹೊರಹಾಕಲು.

9. ಎಲುವೆಂಟ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿದ ನಂತರ, ಅದನ್ನು 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 55 ಡಿಗ್ರಿಗಳ ನೀರಿನ ಸ್ನಾನದಲ್ಲಿ ಹೊರಹಾಕಬಹುದು ಅಥವಾ 50 ಡಿಗ್ರಿಗಳಷ್ಟು ನೀರಿನ ಸ್ನಾನದಲ್ಲಿ 10 ನಿಮಿಷಗಳಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಕಾಲ ಇರಿಸಬಹುದು, ಅಥವಾ ರಾತ್ರಿಯಲ್ಲಿ 4 ಡಿಗ್ರಿಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ಯಾರಾಫಿಲ್ಮ್ನಿಂದ ಮುಚ್ಚಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಮರುದಿನ ಚೇತರಿಕೆಗೆ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿಗೊಳಿಸಬಹುದು, ಪರಿಣಾಮವು ಉತ್ತಮವಾಗಿರುತ್ತದೆ.

10.ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಎಲುಯೇಟ್ ಅನ್ನು ಹೊರಹೀರುವಿಕೆ ಕಾಲಮ್‌ಗೆ ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಮತ್ತೆ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ.

ಪಿಸಿಆರ್ ಉತ್ಪನ್ನ ಮರುಪಡೆಯುವಿಕೆಗೆ ವಿವರವಾದ ವಿಧಾನಗಳು ಮತ್ತು ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳು

1. ಸಾಮಾನ್ಯ ರಬ್ಬರ್ ಮರುಬಳಕೆ

ನೀವು ಅಂಟು ಚೇತರಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಬಯಸಿದರೆ, ಕಿಟ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುವುದು ಉತ್ತಮ, ಇದು ಅನುಕೂಲಕರವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಸ್ವಲ್ಪ ಹೆಚ್ಚಿನ ಚೇತರಿಕೆ ದರವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.ನೀವು ನಿಜವಾಗಿಯೂ ಅದನ್ನು ಹಸ್ತಚಾಲಿತವಾಗಿ ಚೇತರಿಸಿಕೊಳ್ಳಬೇಕಾದರೆ, ಅಂಟು ಕತ್ತರಿಸಿದ ನಂತರ ನೀವು TE ಯ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು 3 ಪಟ್ಟು ಸೇರಿಸಬಹುದು.ನೀರಿನ ಸ್ನಾನದಲ್ಲಿ ಕರಗಿದ ನಂತರ, ಫೀನಾಲ್, ಫೀನಾಲ್ / ಕ್ಲೋರೊಫಾರ್ಮ್ ಅನ್ನು ಶುದ್ಧವಾಗಿ ಹೊರತೆಗೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಎಥೆನಾಲ್ ಅನ್ನು ಅವಕ್ಷೇಪಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಅಷ್ಟೇ.

2. ಕಡಿಮೆ ಕರಗುವ ಬಿಂದು ಜೆಲ್‌ಗಳಿಂದ ಡಿಎನ್‌ಎ ಚೇತರಿಕೆ

DNA ತುಣುಕುಗಳ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಜೆಲ್‌ನ ಪರಿಮಾಣಕ್ಕೆ ಸಮನಾದ TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಜೆಲ್ ಅನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಕರಗಿಸಲು 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 65 ° C ನೀರಿನ ಸ್ನಾನದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ.

ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶಕ್ಕೆ ತಂದ ನಂತರ, ಸಮಾನ ಪ್ರಮಾಣದ ಫೀನಾಲ್ ಅನ್ನು (ಟಿಇ, TE ನೊಂದಿಗೆ ಸ್ಯಾಚುರೇಟೆಡ್ ಮೇಲಿನ ಪದರದಲ್ಲಿ ಮುಚ್ಚಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಫೀನಾಲ್ನ ಕೆಳಗಿನ ಪದರವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಯಿತು) ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು, ಮತ್ತು ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಬೆರೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ (ಯಾವುದೇ ಮಿಶ್ರಣ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲ), ಮತ್ತು 3 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 12,000 rpm ನಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು.1-2 ಬಾರಿ ಪುನರಾವರ್ತಿಸಿ.

ಸೂಪರ್ನಾಟಂಟ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಿ, ಎಥೆನಾಲ್ ಅವಕ್ಷೇಪವನ್ನು ಕೈಗೊಳ್ಳಲು 0.1 ಪರಿಮಾಣದ 3mol/L ಸೋಡಿಯಂ ಅಸಿಟೇಟ್ (pH 5.2) ಮತ್ತು ಸಂಪೂರ್ಣ ಎಥೆನಾಲ್ನ 2.5 ಪಟ್ಟು ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಸೂಕ್ತ ಪ್ರಮಾಣದ ಟಿಇಯೊಂದಿಗೆ ಕರಗಿಸಿ, ವಿಷಯವನ್ನು ಅಳೆಯಿರಿ ಮತ್ತು ಬಳಕೆಗೆ ತಯಾರು ಮಾಡಿ (ಇದನ್ನು ಗುರಿ ಜೀನ್ ರಚನೆ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ, ತನಿಖೆ ತಯಾರಿಕೆ ಇತ್ಯಾದಿಗಳಿಗೆ ಬಳಸಬಹುದು).

3. ಉತ್ತಮ ವರ್ಧನೆ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯೊಂದಿಗೆ ಪಿಸಿಆರ್ ಚೇತರಿಕೆ

ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯು ಉತ್ತಮವಾಗಿದ್ದರೆ, ಇದು ಪಿಸಿಆರ್ ಉತ್ಪನ್ನದ ಸರಳ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಮತ್ತು ಚೇತರಿಕೆಯಾಗಿದೆ.ನೀವು PCR ಉತ್ಪನ್ನಕ್ಕೆ 50ug/ml ಪ್ರೋಟೀನೇಸ್ K ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಬಹುದು, 1ಗಂಟೆಗೆ 37 ಡಿಗ್ರಿ, ಫೀನಾಲ್/ಕ್ಲೋರೋಫಾರ್ಮ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಒಮ್ಮೆ ಹೊರತೆಗೆಯಬಹುದು, ಒಮ್ಮೆ ಕ್ಲೋರೋಫಾರ್ಮ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಹೊರತೆಗೆಯಬಹುದು ಮತ್ತು ಸೂಪರ್‌ನಾಟಂಟ್‌ನ 0.1 ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಬಹುದು.ಸೋಡಿಯಂ ಅಸಿಟೇಟ್ ಅನ್ನು 2.5 ಸಂಪುಟಗಳ ಸಂಪೂರ್ಣ ಎಥೆನಾಲ್ನೊಂದಿಗೆ ಮಳೆಯಿಂದ ಮರುಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ.

ಸಂಬಂಧಿತ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/