• ಫೇಸ್ಬುಕ್
  • ಲಿಂಕ್ಡ್ಇನ್
  • YouTube

ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್‌ಗಳು ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ತಡೆದುಕೊಳ್ಳುವುದಿಲ್ಲ (MMLV ಚಟುವಟಿಕೆಗೆ ಸೂಕ್ತವಾದ ತಾಪಮಾನವು 37-50 ° C, ಮತ್ತು AMV 42-60 ° C ಆಗಿದೆ).ಹೆಚ್ಚು ಸಂಕೀರ್ಣವಾದ ವೈರಲ್ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಸಿಡಿಎನ್‌ಎಗೆ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ರಿವರ್ಸ್ ಮಾಡಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಪತ್ತೆ ದಕ್ಷತೆ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ.ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ RT-qPCR ಗೆ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಎರಡು ಪ್ರಮುಖ ಕಿಣ್ವಗಳ (ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ ಮತ್ತು DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್) ಭಾಗವಹಿಸುವಿಕೆಯ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯನ್ನು ಸರಳೀಕರಿಸಲು ಮತ್ತು ವೆಚ್ಚವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಅಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸುತ್ತದೆ.ಇಲ್ಲಿ ನಾವು ಎರಡು ಉನ್ನತ-ತಾಪಮಾನ-ನಿರೋಧಕ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್‌ಗಳನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸುತ್ತೇವೆ, TtH ಮತ್ತು RevTaq.ಈ ಎರಡು ಕಿಣ್ವಗಳು ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ನ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಅವುಗಳನ್ನು ಬೈಫಂಕ್ಷನಲ್ ಕಿಣ್ವಗಳು ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಟಿಟಿಹೆಚ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್

ಥರ್ಮೋಫಿಲಿಕ್ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಂ ಥರ್ಮಸ್ ಥರ್ಮೋಫಿಲಸ್ HB8 ನಿಂದ ಪಡೆದ TtH ಬಗ್ಗೆ ನೀವು ಕೇಳಿರಬೇಕು.Mg2+ ನಂತಹ ಡೈವಲೆಂಟ್ ಕ್ಯಾಟಯಾನುಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ, ಇದು DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.ಇದು Taq ಕಿಣ್ವದಂತಹ PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲ್ಪಡುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಇದು Taq ಕಿಣ್ವಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಶಾಖ ಪ್ರತಿರೋಧವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಇದು ಹೆಚ್ಚಿನ GC ವಿಷಯ ಟೆಂಪ್ಲೆಟ್ಗಳೊಂದಿಗೆ PCR ಮೇಲೆ ಉತ್ತಮ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬೀರುತ್ತದೆ.

· ಈ ಕಿಣ್ವವು ಮೂಲಭೂತವಾಗಿ 3′→5′ ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು 5′→3′ ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿಲ್ಲ, ಆದ್ದರಿಂದ ಇದನ್ನು ಡಿಡೋಕ್ಸಿ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್‌ಗೆ ಸಹ ಬಳಸಬಹುದು.

· ಈ ಕಿಣ್ವವು RTase ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.Mn2+ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ, RTase ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ವರ್ಧಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಈ ವೈಶಿಷ್ಟ್ಯವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಅನ್ನು ಒಂದೇ ಟ್ಯೂಬ್‌ನಲ್ಲಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲು ಇದನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು, ಅಂದರೆ, ಒಂದು-ಹಂತದ ಆರ್‌ಟಿ-ಪಿಸಿಆರ್.ಆದಾಗ್ಯೂ, Mn2+ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ, RT-PCR ನ ನಿಖರತೆ ಹೆಚ್ಚಿಲ್ಲ.RT ಚಟುವಟಿಕೆಯು rnaase H ಚಟುವಟಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ ಯಾವುದೇ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ಹೊಂದಿಲ್ಲ.

· Tth-DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಹೆಚ್ಚಿದ ಚಟುವಟಿಕೆಯು (pH9, ಆಪ್ಟಿಮಮ್ +55℃~+70℃, ಗರಿಷ್ಠ +95℃) ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ದ್ವಿತೀಯ ರಚನೆಯಿಂದ ಉಂಟಾದ ಸಮಸ್ಯೆಗಳನ್ನು ನಿವಾರಿಸುತ್ತದೆ.Mg2+ ಅಯಾನುಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಅದೇ ಕಿಣ್ವದೊಂದಿಗೆ PCR ನಿಂದ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ cDNA ಅನ್ನು ವರ್ಧಿಸಬಹುದು.

· Tth-DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವು ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಮತ್ತು DNA ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲು ಈ ಕಿಣ್ವವನ್ನು ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ RT-PCR, ಕ್ಲೋನಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಮತ್ತು ವೈರಲ್ RNA ಯ ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗೆ ಉಪಯುಕ್ತವಾಗಿಸುತ್ತದೆ.
· 1kb ವರೆಗೆ RNA ವರ್ಧಿಸಲು RT-PCR ಗಾಗಿ Tth-DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಶೂನ್ಯ
 

ವೈಶಿಷ್ಟ್ಯಗಳು ಮತ್ತು ಅನುಕೂಲಗಳು

Tth DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್:

• ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಚೈನ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ (PCR) ಉತ್ಪನ್ನದ ಗಾತ್ರವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ, RT-PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಕನಿಷ್ಠ 1000 bp

• ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಡಿಯೋಕ್ಸಿರೈಬೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಸೈಡ್ ಟ್ರೈಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಅನ್ನು ತಲಾಧಾರವಾಗಿ ಸ್ವೀಕರಿಸಿ

• RNase H ಚಟುವಟಿಕೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿಲ್ಲ

• ಸಮಸ್ಯೆಗಳನ್ನು ನಿವಾರಿಸಲು ಹೆಚ್ಚಿನ ಉಷ್ಣ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯಲ್ಲಿರುವ ಉನ್ನತ ಮಾಧ್ಯಮಿಕ ರಚನೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ

RevTaq RT-PCR DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್

ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ ಶಾಖ-ನಿರೋಧಕ DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್

RevTaq-RT-PCR-DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಒಂದು ಇಂಜಿನಿಯರ್ಡ್, ಹೆಚ್ಚು ಶಾಖ-ನಿರೋಧಕ, ಡ್ಯುಯಲ್-ಫಂಕ್ಷನಲ್ ಕಿಣ್ವವಾಗಿದ್ದು, ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ ಮತ್ತು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಗಳನ್ನು ನಿರ್ದೇಶಿಸಿದ ಮತ್ತು ಕೃತಕ ವಿಕಾಸದ ಮೂಲಕ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ.

· 95 °C ನಲ್ಲಿ RevTaq RT-PCR DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಅರ್ಧ-ಜೀವಿತಾವಧಿಯು 40 ನಿಮಿಷಗಳಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಾಗಿರುತ್ತದೆ.

· RevTaq RT-PCR ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನಿಂದ ನೇರವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿನ-ತಾಪಮಾನದ ಹಿಮ್ಮುಖ ಪ್ರತಿಲೇಖನವನ್ನು ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಿಡಿಎನ್‌ಎ ಟೆಂಪ್ಲೆಟ್‌ಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಶನ್ ಹಂತವನ್ನು ಅನೇಕ ಬಾರಿ ಪುನರಾವರ್ತಿಸಬಹುದು.

· RevTaq RT-PCR DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ "ಶೂನ್ಯ-ಹಂತ" RT-PCR ಅನ್ನು ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ (ಯಾವುದೇ ಐಸೋಥರ್ಮಲ್ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಶನ್ ಹಂತ), ಏಕೆಂದರೆ ಸೈಕ್ಲಿಕ್ PCR ವಿಸ್ತರಣೆ ಹಂತದಲ್ಲಿ, ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಮತ್ತು DNA ವರ್ಧನೆಯು ಏಕಕಾಲದಲ್ಲಿ ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ.ಇದು ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯಲ್ಲಿನ ಬಲವಾದ ದ್ವಿತೀಯಕ ರಚನೆಯನ್ನು ಕರಗಿಸುವಲ್ಲಿ ಎದುರಾಗುವ ಸಮಸ್ಯೆಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

· ಆಪ್ಟಾಮರ್-ಆಧಾರಿತ ಹಾಟ್-ಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಫಾರ್ಮುಲಾದಿಂದಾಗಿ, ರೆವ್‌ಟಾಕ್ ಆರ್‌ಟಿ-ಪಿಸಿಆರ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅನೆಲಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಎಕ್ಸ್‌ಟೆನ್ಶನ್ ತಾಪಮಾನವು 57 ° C ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿರುವಾಗ ಉತ್ತಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ.

ಕಿಣ್ವವು ಶಾಖ-ನಿರೋಧಕವಾಗಿರುವುದರಿಂದ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಕರಗುವ ಬಿಂದುಗಳೊಂದಿಗೆ (>60 ° C) ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರೋಬ್‌ಗಳನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.

· ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಸೆಟಪ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ತಾಪಮಾನ ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ ಮೂಲಕ ಅನೆಲಿಂಗ್/ವಿಸ್ತರಣೆ ಹಂತದ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾಗಿಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.

· ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನ, PCR ನ ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ.ಹಿಮ್ಮುಖ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಚಕ್ರವನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಪಿಸಿಆರ್ ಚಕ್ರಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರೈಮರ್:ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಹೈಬ್ರಿಡೈಸೇಶನ್ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರೈಮರ್: ಸಿಡಿಎನ್‌ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಡ್ಯುಪ್ಲೆಕ್ಸ್‌ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಕರಗುವ ಬಿಂದುವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ.

· RevTaq RT-PCR DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅನ್ನು ತಳೀಯವಾಗಿ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್ ಗಾತ್ರವು 60-300 bp ನಡುವೆ ಇರುತ್ತದೆ.

RevTaq RT-PCR DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಪತ್ತೆ ಮಿತಿ 4 ಪ್ರತಿಗಳನ್ನು ತಲುಪುತ್ತದೆ/ಎರಡು (2)

ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ (ಹೆಚ್ಚಿನ ಕರಗುವ ಬಿಂದು ಪ್ರೈಮರ್ಗಳ ಸ್ಥಾಪನೆ) ಚಿತ್ರದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.RevTaq RT-PCR DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್-ಚಾಲಿತ RT-PCR TaqPath 1-ಹಂತದ RT-qPCR ಮಾಸ್ಟರ್ ಮಿಶ್ರಣಕ್ಕಿಂತ ಉತ್ತಮ ಸಂವೇದನೆಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ಪತ್ತೆ ಮಾದರಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆ ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್.

ಹೆಚ್ಚಿನ ಅನುಕೂಲಗಳು:

ಕ್ವಿಕ್ ಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಫಂಕ್ಷನ್ → ಆರಂಭಿಕ ಥರ್ಮಲ್ ಡಿನಾಟರೇಶನ್ ಹಂತವನ್ನು ಬಿಟ್ಟುಬಿಡಬಹುದು.

ಹಾಟ್-ಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಆಪ್ಟಾಮರ್ ಫಾರ್ಮುಲಾ → ತಕ್ಷಣವೇ 100% ಕಿಣ್ವದ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸಿ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ (<57°C) ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ತಡೆಯಿರಿ.

ಸೀಳುವಿಕೆಯ ಕಾರ್ಯ → RNA ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಹಂತವನ್ನು ಬಿಟ್ಟುಬಿಡಲಾಗಿದೆ, ಏಕೆಂದರೆ RevTaq RT-PCR DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಕಚ್ಚಾ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸಹ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ.ಇದು ಬಿಸಿ ಆರ್‌ಟಿ-ಪಿಸಿಆರ್ ಚಕ್ರದಲ್ಲಿ ಯುಕ್ಯಾರಿಯೋಟ್‌ಗಳು, ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ಮತ್ತು ವೈರಸ್‌ಗಳ ಜೀವಕೋಶ ಪೊರೆಗಳನ್ನು ತಕ್ಷಣವೇ ನಾಶಪಡಿಸುತ್ತದೆ.

IVD ಕಚ್ಚಾ ವಸ್ತುಗಳ ಮಟ್ಟ → ಉತ್ತಮ ಗುಣಮಟ್ಟದ ಮಾನದಂಡಗಳು ಮತ್ತು ಅತ್ಯಂತ ಸ್ಪರ್ಧಾತ್ಮಕ ಬೆಲೆಗಳು


ಪೋಸ್ಟ್ ಸಮಯ: ಆಗಸ್ಟ್-12-2021