ಸಮಸ್ಯೆ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿ

ನಿಮ್ಮ ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗೆ ಸಹಾಯಕವಾಗಲು ಆಶಿಸುತ್ತಾ, ವೈರಲ್ DNA/RNAಯ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಎದುರಾಗಬಹುದಾದ ಸಮಸ್ಯೆಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಈ ಕೆಳಗಿನಂತಿದೆ.ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ಸೂಚನೆಗಳು ಮತ್ತು ಸಮಸ್ಯೆ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಹೊರತುಪಡಿಸಿ ಇತರ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಅಥವಾ ತಾಂತ್ರಿಕ ಸಮಸ್ಯೆಗಳಿಗೆ, ನಿಮಗೆ ಸಹಾಯ ಮಾಡಲು ನಾವು ತಾಂತ್ರಿಕ ಬೆಂಬಲವನ್ನು ಮೀಸಲಿಟ್ಟಿದ್ದೇವೆ.ನೀವು ಯಾವುದೇ ಅಗತ್ಯಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದರೆ, ದಯವಿಟ್ಟು ನಮ್ಮನ್ನು ಸಂಪರ್ಕಿಸಿ: 028-83360257 ಅಥವಾ ಇ-ಮೇಲ್:

Tech@foregene.com.

ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ ಅಥವಾ ಕಡಿಮೆ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಇಳುವರಿ ಇಲ್ಲ

ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಚೇತರಿಕೆಯ ದಕ್ಷತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಹಲವು ಅಂಶಗಳಿವೆ, ಅವುಗಳೆಂದರೆ: ಮಾದರಿ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ವಿಷಯ, ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ವಿಧಾನ, ಎಲುಷನ್ ಪರಿಮಾಣ, ಇತ್ಯಾದಿ.

ಸಾಮಾನ್ಯ ಕಾರಣಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ:

1. ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಐಸ್ ಸ್ನಾನ ಅಥವಾ ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನ (4 ° C) ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.

ಸಲಹೆ: ಇಡೀ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ (15-25 ° C) ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಿ, ಐಸ್ ಸ್ನಾನ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನದ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡಬೇಡಿ.

2. ಮಾದರಿಯನ್ನು ಸರಿಯಾಗಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ ಅಥವಾ ಮಾದರಿಯನ್ನು ತುಂಬಾ ಸಮಯದವರೆಗೆ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗಿದೆ.

ಶಿಫಾರಸು: -80 ° C ನಲ್ಲಿ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ ಮತ್ತು ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಘನೀಕರಣ ಮತ್ತು ಕರಗುವಿಕೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ;ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯಲು ಹೊಸದಾಗಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿ.

3. ಸಾಕಷ್ಟಿಲ್ಲದ ಮಾದರಿ ಲೈಸಿಸ್.

ಶಿಫಾರಸು: ಮಾದರಿ ಮತ್ತು ಲೈಸಿಸ್ ಕೆಲಸದ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ (15-25 ° C) 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ.

4. ಎಲ್ಯುಯೆಂಟ್ನ ತಪ್ಪಾದ ಸೇರ್ಪಡೆ.

ಸಲಹೆ: RNase-Free ddH2O ಅನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್ ಮೆಂಬರೇನ್‌ನ ಮಧ್ಯಕ್ಕೆ ಡ್ರಾಪ್‌ವೈಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ ಮತ್ತು ಅದನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್ ರಿಂಗ್‌ನಲ್ಲಿ ಬಿಡಬೇಡಿ.

5. ಸಂಪೂರ್ಣ ಎಥೆನಾಲ್ನ ಸರಿಯಾದ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಬಫರ್ RW2 ಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ.

ಸಲಹೆ: ದಯವಿಟ್ಟು ಸೂಚನೆಗಳನ್ನು ಅನುಸರಿಸಿ, ಬಫರ್ RW2 ಗೆ ಸಂಪೂರ್ಣ ಎಥೆನಾಲ್ನ ಸರಿಯಾದ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಕಿಟ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೊದಲು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ.

6. ಸೂಕ್ತವಲ್ಲದ ಮಾದರಿ ಪರಿಮಾಣ.

ಸಲಹೆ: ಪ್ರತಿ 500µl ಬಫರ್ DRL ಗೆ 200µl ಮಾದರಿಯನ್ನು ಸಂಸ್ಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಅತಿಯಾದ ಮಾದರಿ ಸಂಸ್ಕರಣೆಯು ಕಡಿಮೆ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.

7. ಸೂಕ್ತವಲ್ಲದ ಎಲುಷನ್ ಪರಿಮಾಣ ಅಥವಾ ಅಪೂರ್ಣವಾದ ಎಲುಷನ್.

ಶಿಫಾರಸು: ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್ನ ಎಲುವೆಂಟ್ ಪರಿಮಾಣವು 30-50μl ಆಗಿದೆ;ಎಲುಷನ್ ಪರಿಣಾಮವು ತೃಪ್ತಿಕರವಾಗಿಲ್ಲದಿದ್ದರೆ, ಪೂರ್ವಭಾವಿಯಾಗಿ ಕಾಯಿಸಲ್ಪಟ್ಟ RNase-Free ddH2O ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿದ ನಂತರ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಸಮಯವನ್ನು ವಿಸ್ತರಿಸಲು ಸೂಚಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ 5-10 ನಿಮಿಷಗಳು.

8. ಬಫರ್ RW2 ನೊಂದಿಗೆ ತೊಳೆಯುವ ನಂತರ ಎಥೆನಾಲ್ ಕಾಲಮ್ನಲ್ಲಿ ಉಳಿದಿದೆ.

ಸಲಹೆ: ಬಫರ್ RW2 ನೊಂದಿಗೆ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿಯಾದ ನಂತರ 2 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಎಥೆನಾಲ್ ಉಳಿದಿದ್ದರೆ, ಉಳಿದಿರುವ ಎಥೆನಾಲ್ ಅನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಕಾಲಮ್ ಅನ್ನು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ನಂತರ 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಬಹುದು.

ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲವು ಕ್ಷೀಣಿಸುತ್ತದೆ

ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಗುಣಮಟ್ಟವು ಮಾದರಿಯ ಸಂರಕ್ಷಣೆ, RNase ಮಾಲಿನ್ಯ, ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆ ಮತ್ತು ಇತರ ಅಂಶಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ.ಸಾಮಾನ್ಯ ಕಾರಣಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ:

1. ಸಂಗ್ರಹಿಸಿದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸಮಯಕ್ಕೆ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ.

ಸಲಹೆ: ಸಂಗ್ರಹಣೆಯ ನಂತರ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಸಮಯಕ್ಕೆ ಬಳಸಲಾಗದಿದ್ದರೆ, ದಯವಿಟ್ಟು ಅದನ್ನು ತಕ್ಷಣವೇ ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ -80 ° C ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ.ಆರ್ಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಗಾಗಿ, ಹೊಸದಾಗಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿ.

2. ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ ಮತ್ತು ಫ್ರೀಜ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಪದೇ ಪದೇ ಕರಗಿಸಿ.

ಸಲಹೆ: ಮಾದರಿಗಳ ಸಂಗ್ರಹಣೆ ಮತ್ತು ಶೇಖರಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಘನೀಕರಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಕರಗುವಿಕೆಯನ್ನು (ಒಂದಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಬಾರಿ ಅಲ್ಲ) ತಪ್ಪಿಸಿ, ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೆ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಇಳುವರಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ.

3. ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆ ಕೊಠಡಿಯಲ್ಲಿ RNase ಅನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸಲಾಗಿದೆ ಅಥವಾ ಬಿಸಾಡಬಹುದಾದ ಕೈಗವಸುಗಳು, ಮುಖವಾಡಗಳು ಇತ್ಯಾದಿಗಳನ್ನು ಧರಿಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ.

ಶಿಫಾರಸು: ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆ ಕೊಠಡಿಯಲ್ಲಿ ಉತ್ತಮವಾಗಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಗದ ಮೊದಲು ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ಟೇಬಲ್ ಅನ್ನು ಸ್ವಚ್ಛಗೊಳಿಸಬೇಕು.

RNase ನ ಪರಿಚಯದಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ RNA ಅವನತಿಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ತಪ್ಪಿಸಲು ಪ್ರಯೋಗದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಬಿಸಾಡಬಹುದಾದ ಕೈಗವಸುಗಳು ಮತ್ತು ಮುಖವಾಡಗಳನ್ನು ಧರಿಸಿ.

4. ಬಳಕೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ RNase ನೊಂದಿಗೆ ಕಾರಕವು ಕಲುಷಿತಗೊಂಡಿದೆ.

ಶಿಫಾರಸು: ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗಾಗಿ ಹೊಸ ವೈರಲ್ ಡಿಎನ್‌ಎ/ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಐಸೋಲೇಶನ್ ಕಿಟ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಬದಲಾಯಿಸಿ.

5. ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಕುಶಲತೆಗೆ ಬಳಸಲಾಗುವ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಪೈಪೆಟ್ ಟಿಪ್‌ಗಳು ಆರ್‌ನೇಸ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಕಲುಷಿತಗೊಂಡಿವೆ.

ಸಲಹೆ: ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಹೊರತೆಗೆಯಲು ಬಳಸುವ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳು, ಪೈಪೆಟ್ ಟಿಪ್ಸ್, ಪೈಪೆಟ್‌ಗಳು ಇತ್ಯಾದಿಗಳು ಆರ್‌ನೇಸ್-ಫ್ರೀ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ.

ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲವು ಕೆಳಮಟ್ಟದ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ

ಡಿಎನ್‌ಎ ಮತ್ತು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್‌ನಿಂದ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ, ಉಪ್ಪು ಅಯಾನು ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅಂಶವು ತುಂಬಾ ಹೆಚ್ಚಿದ್ದರೆ, ಅದು ಕೆಳಮಟ್ಟದ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ: ಪಿಸಿಆರ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್, ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್, ಇತ್ಯಾದಿ.

1. ಎಲುಟೆಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಮತ್ತು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಉಳಿದ ಉಪ್ಪು ಅಯಾನುಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ.

ಸಲಹೆ: ಸಂಪೂರ್ಣ ಎಥೆನಾಲ್ನ ಸರಿಯಾದ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಬಫರ್ RW2 ಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆಯೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ ಮತ್ತು ಆಪರೇಟಿಂಗ್ ಸೂಚನೆಗಳಲ್ಲಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟಪಡಿಸಿದ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ವೇಗದಲ್ಲಿ ಎರಡು ಬಾರಿ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್ ಅನ್ನು ತೊಳೆಯಿರಿ;ಉಪ್ಪು ಅಯಾನು ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡಿ.

2. ಎಲುಟೆಡ್ ಡಿಎನ್ಎ ಮತ್ತು ಆರ್ಎನ್ಎ ಎಥೆನಾಲ್ ಅವಶೇಷಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ.

ಸಲಹೆ: ಬಫರ್ RW2 ನೊಂದಿಗೆ ತೊಳೆಯುವಿಕೆಯನ್ನು ದೃಢೀಕರಿಸಿದ ನಂತರ, ಆಪರೇಟಿಂಗ್ ಸೂಚನೆಗಳಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ವೇಗದಲ್ಲಿ ಖಾಲಿ ಟ್ಯೂಬ್ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿತ್ವವನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಿ;ಇನ್ನೂ ಎಥೆನಾಲ್ ಅವಶೇಷಗಳಿದ್ದರೆ, ನೀವು ಖಾಲಿ ಟ್ಯೂಬ್ ಅನ್ನು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡಬಹುದು ಮತ್ತು ನಂತರ ಎಥೆನಾಲ್ ಶೇಷವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಇರಿಸಬಹುದು.

ಸೂಚನಾ ಕೈಪಿಡಿಗಳು:

ವೈರಲ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಮತ್ತು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯ ಕಿಟ್ ಸೂಚನಾ ಕೈಪಿಡಿ