ಪಿಸಿಆರ್ (ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಚೈನ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್) 30 ವರ್ಷಗಳಿಗಿಂತಲೂ ಹೆಚ್ಚಿನ ಇತಿಹಾಸವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಇನ್-ವಿಟ್ರೊ ಡಿಎನ್‌ಎ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾಗಿದೆ.

ಪಿಸಿಆರ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು 1983 ರಲ್ಲಿ ಯುಎಸ್‌ಎಯ ಸೆಟಸ್‌ನ ಕ್ಯಾರಿ ಮುಲ್ಲಿಸ್ ಅವರು ಪ್ರವರ್ತಿಸಿದರು. ಮುಲ್ಲಿಸ್ 1985 ರಲ್ಲಿ ಪಿಸಿಆರ್ ಪೇಟೆಂಟ್‌ಗಾಗಿ ಅರ್ಜಿ ಸಲ್ಲಿಸಿದರು ಮತ್ತು ಅದೇ ವರ್ಷದಲ್ಲಿ ವಿಜ್ಞಾನದ ಮೊದಲ ಪಿಸಿಆರ್ ಶೈಕ್ಷಣಿಕ ಪ್ರಬಂಧವನ್ನು ಪ್ರಕಟಿಸಿದರು.ಮುಲ್ಲಿಸ್ ಅವರ ಕೆಲಸಕ್ಕಾಗಿ 1993 ರಲ್ಲಿ ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರದಲ್ಲಿ ನೊಬೆಲ್ ಪ್ರಶಸ್ತಿಯನ್ನು ನೀಡಲಾಯಿತು.

PCR ನ ಮೂಲ ತತ್ವಗಳು

PCR ಗುರಿಯ DNA ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಒಂದು ಮಿಲಿಯನ್‌ಗಿಂತಲೂ ಹೆಚ್ಚು ಬಾರಿ ವರ್ಧಿಸುತ್ತದೆ.ಈ ತತ್ವವು DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ವೇಗವರ್ಧನೆಯ ಅಡಿಯಲ್ಲಿದೆ, ಪೋಷಕ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ DNA ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನಂತೆ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರೈಮರ್ ಅನ್ನು ವಿಸ್ತರಣೆಯ ಆರಂಭಿಕ ಹಂತವಾಗಿ ಬಳಸುತ್ತದೆ.ಡಿನಾಟರೇಶನ್, ಅನೆಲಿಂಗ್ ಮತ್ತು ವಿಸ್ತರಣೆಯಂತಹ ಹಂತಗಳ ಮೂಲಕ ಇದನ್ನು ವಿಟ್ರೋದಲ್ಲಿ ಪುನರಾವರ್ತಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಮಗಳು ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ಪೋಷಕ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಡಿಎನ್‌ಎಗೆ ಪೂರಕವಾಗಿದೆ.

ಪ್ರಮಾಣಿತ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಮೂರು ಹಂತಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ:

1.Denaturation: DNA ಡಬಲ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಬಳಸಿ.DNA ಡಬಲ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್‌ಗಳ ನಡುವಿನ ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಬಂಧವು ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ (93-98℃) ಮುರಿದುಹೋಗುತ್ತದೆ.

2.ಅನೆಲಿಂಗ್: ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಬೇರ್ಪಟ್ಟ ನಂತರ, ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ ಇದರಿಂದ ಪ್ರೈಮರ್ ಏಕ-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ.

3.ವಿಸ್ತರಣೆ: ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಎಳೆಗಳ ಉದ್ದಕ್ಕೂ ಪೂರಕ ಎಳೆಗಳನ್ನು ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲು ಪ್ರಾರಂಭಿಸುತ್ತದೆ, ತಾಪಮಾನವು ಕಡಿಮೆಯಾದಾಗ ಬಂಧಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳಿಂದ.ವಿಸ್ತರಣೆಯು ಪೂರ್ಣಗೊಂಡಾಗ, ಒಂದು ಚಕ್ರವು ಪೂರ್ಣಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು DNA ತುಣುಕುಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯು ದ್ವಿಗುಣಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ

ಈ ಮೂರು ಹಂತಗಳನ್ನು 25-35 ಬಾರಿ ಪುನರಾವರ್ತಿಸಿದರೆ, ಡಿಎನ್ಎ ತುಣುಕುಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯು ಘಾತೀಯವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ.

ಪಿಸಿಆರ್‌ನ ಜಾಣ್ಮೆಯೆಂದರೆ ವಿಭಿನ್ನ ಗುರಿ ಜೀನ್‌ಗಳಿಗಾಗಿ ವಿಭಿನ್ನ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಬಹುದು, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಗುರಿ ಜೀನ್ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಅವಧಿಯಲ್ಲಿ ವರ್ಧಿಸಬಹುದು.

ಇಲ್ಲಿಯವರೆಗೆ, PCR ಅನ್ನು ಮೂರು ವರ್ಗಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಬಹುದು, ಅವುಗಳೆಂದರೆ ಸಾಮಾನ್ಯ PCR, ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ಮತ್ತು ಡಿಜಿಟಲ್ PCR.

ಮೊದಲ ತಲೆಮಾರಿನ ಸಾಮಾನ್ಯ PCR

ಗುರಿ ಜೀನ್ ಅನ್ನು ವರ್ಧಿಸಲು ಸಾಮಾನ್ಯ PCR ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಉಪಕರಣವನ್ನು ಬಳಸಿ, ತದನಂತರ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಅಗರೋಸ್ ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿ, ಗುಣಾತ್ಮಕ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಮಾತ್ರ ಮಾಡಬಹುದು.

ಮೊದಲ ತಲೆಮಾರಿನ PCR ನ ಮುಖ್ಯ ಅನಾನುಕೂಲಗಳು:

1.ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ವರ್ಧನೆ ಮತ್ತು ತಪ್ಪು ಧನಾತ್ಮಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳಿಗೆ ಒಲವು.

2. ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವಿಕೆ ಬಹಳ ಸಮಯ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯು ತೊಡಕಾಗಿದೆ.

3. ಗುಣಾತ್ಮಕ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಮಾತ್ರ ಮಾಡಬಹುದು

ಎರಡನೇ ತಲೆಮಾರಿನ ನೈಜ-ಸಮಯದ PCR

ನೈಜ-ಸಮಯದ ಪಿಸಿಆರ್ ಅನ್ನು qPCR ಎಂದೂ ಕರೆಯುತ್ತಾರೆ, ಇದು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಪ್ರಗತಿಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುವ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಶೋಧಕಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಂಕೇತಗಳ ಸಂಗ್ರಹಣೆಯ ಮೂಲಕ ವರ್ಧಿತ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಶೇಖರಣೆಯನ್ನು ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಕರ್ವ್ ಮೂಲಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸುತ್ತದೆ.ಇದನ್ನು Cq ಮೌಲ್ಯ ಮತ್ತು ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಕ್ರರೇಖೆಯ ಸಹಾಯದಿಂದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಬಹುದು.

qPCR ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಮುಚ್ಚಿದ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ ನಡೆಸುವುದರಿಂದ, ಮಾಲಿನ್ಯದ ಸಂಭವನೀಯತೆ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಪತ್ತೆಗಾಗಿ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಂಕೇತವನ್ನು ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡಬಹುದು, ಆದ್ದರಿಂದ ಇದು ವೈದ್ಯಕೀಯ ಅಭ್ಯಾಸದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲ್ಪಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು PCR ನಲ್ಲಿ ಪ್ರಬಲ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವಾಗಿದೆ.

ನೈಜ-ಸಮಯದ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ನಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪದಾರ್ಥಗಳನ್ನು ಹೀಗೆ ವಿಂಗಡಿಸಬಹುದು: TaqMan ಪ್ರತಿದೀಪಕ ತನಿಖೆ, ಆಣ್ವಿಕ ಬೀಕನ್ಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಬಣ್ಣ.

1) TaqMan ಪ್ರತಿದೀಪಕ ತನಿಖೆ:

ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಒಂದು ಜೋಡಿ ಪ್ರೈಮರ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸುವಾಗ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ತನಿಖೆಯನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ತನಿಖೆಯು ಆಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ಆಗಿದೆ, ಮತ್ತು ಎರಡೂ ತುದಿಗಳನ್ನು ವರದಿಗಾರ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಗುಂಪು ಮತ್ತು ಕ್ವೆಂಚರ್ ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಗುಂಪಿನೊಂದಿಗೆ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.

ತನಿಖೆಯು ಹಾಗೇ ಇದ್ದಾಗ, ವರದಿಗಾರ ಗುಂಪಿನಿಂದ ಹೊರಸೂಸಲ್ಪಟ್ಟ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಂಕೇತವನ್ನು ತಣಿಸುವ ಗುಂಪಿನಿಂದ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ;ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಟಕ್ ಕಿಣ್ವದ 5′-3′ ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯು ತನಿಖೆಯನ್ನು ಸೀಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕ್ಷೀಣಿಸುತ್ತದೆ, ವರದಿಗಾರನ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಗುಂಪು ಮತ್ತು ಕ್ವೆಂಚರ್ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಗುಂಪನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಮಾನಿಟರಿಂಗ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಂಕೇತವನ್ನು ಪಡೆಯಬಹುದು, ಅಂದರೆ, ಪ್ರತಿ ಬಾರಿಯೂ ಡಿಎನ್‌ಎ ಒಂದು ಫ್ಲೋರೆಸೆಂಟ್ ಸ್ಟ್ರಾಪ್ಲೇಸ್ ಆಗಿರುತ್ತದೆ. ಪಿಸಿಆರ್ ಉತ್ಪನ್ನದ ರಚನೆಯೊಂದಿಗೆ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಸಿಗ್ನಲ್ ಅನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಸಿಂಕ್ರೊನೈಸ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.

2) SYBR ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಡೈ:

PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ, SYBR ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.SYBR ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಡೈ ಅನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ DNA ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್‌ಗೆ ಸೇರಿಸಿಕೊಳ್ಳದ ನಂತರ, ಅದು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಂಕೇತವನ್ನು ಹೊರಸೂಸುತ್ತದೆ.ಸರಪಳಿಯಲ್ಲಿ ಅಳವಡಿಸದ SYBR ಡೈ ಅಣುವು ಯಾವುದೇ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಂಕೇತವನ್ನು ಹೊರಸೂಸುವುದಿಲ್ಲ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಂಕೇತವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸುತ್ತದೆ PCR ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಹೆಚ್ಚಳವು PCR ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಹೆಚ್ಚಳದೊಂದಿಗೆ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಸಿಂಕ್ರೊನೈಸ್ ಆಗಿದೆ.SYBR ಕೇವಲ ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ DNA ಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿದೆಯೇ ಎಂಬುದನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಕರಗುವ ಕರ್ವ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು.

3) ಆಣ್ವಿಕ ದೀಪಸ್ತಂಭ:

ಇದು 5 ಮತ್ತು 3 ತುದಿಗಳಲ್ಲಿ ಸುಮಾರು 8 ಬೇಸ್‌ಗಳ ಹೇರ್‌ಪಿನ್ ರಚನೆಯನ್ನು ರೂಪಿಸುವ ಸ್ಟೆಮ್-ಲೂಪ್ ಡಬಲ್-ಲೇಬಲ್ ಆಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ಪ್ರೋಬ್ ಆಗಿದೆ.ಎರಡೂ ತುದಿಗಳಲ್ಲಿ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಅನುಕ್ರಮಗಳು ಪೂರಕವಾಗಿ ಜೋಡಿಯಾಗಿರುತ್ತವೆ, ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಗುಂಪು ಮತ್ತು ಕ್ವೆನ್ಚಿಂಗ್ ಗುಂಪು ಬಿಗಿಯಾಗುವಂತೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ಮುಚ್ಚಿ, ಯಾವುದೇ ಪ್ರತಿದೀಪಕವನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ.

PCR ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಿದ ನಂತರ, ಅನೆಲಿಂಗ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ, ಆಣ್ವಿಕ ದೀಪದ ಮಧ್ಯ ಭಾಗವು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ DNA ಅನುಕ್ರಮದೊಂದಿಗೆ ಜೋಡಿಸಲ್ಪಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಜೀನ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ವಂಶವಾಹಿಯಿಂದ ಕ್ವೆಂಚರ್ ಜೀನ್‌ನಿಂದ ಬೇರ್ಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಎರಡನೇ ತಲೆಮಾರಿನ PCR ನ ಮುಖ್ಯ ಅನಾನುಕೂಲಗಳು:

ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯು ಇನ್ನೂ ಕೊರತೆಯಿದೆ, ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ-ನಕಲು ಮಾದರಿಗಳ ಪತ್ತೆಯು ನಿಖರವಾಗಿಲ್ಲ.

ಹಿನ್ನೆಲೆ ಮೌಲ್ಯದ ಪ್ರಭಾವವಿದೆ, ಮತ್ತು ಫಲಿತಾಂಶವು ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪಕ್ಕೆ ಒಳಗಾಗುತ್ತದೆ.

ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳು ಇದ್ದಾಗ, ಪತ್ತೆ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪಕ್ಕೆ ಒಳಗಾಗುತ್ತವೆ.

ಮೂರನೇ ತಲೆಮಾರಿನ ಡಿಜಿಟಲ್ PCR

ಡಿಜಿಟಲ್ ಪಿಸಿಆರ್ (ಡಿಜಿಟಲ್ ಪಿಸಿಆರ್, ಡಿಪಿಸಿಆರ್, ಡಿಗ್-ಪಿಸಿಆರ್) ಎಂಡ್-ಪಾಯಿಂಟ್ ಡಿಟೆಕ್ಷನ್ ಮೂಲಕ ಗುರಿಯ ಅನುಕ್ರಮದ ನಕಲು ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆಂತರಿಕ ನಿಯಂತ್ರಣಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಕ್ರಾಕೃತಿಗಳನ್ನು ಬಳಸದೆ ನಿಖರವಾದ ಸಂಪೂರ್ಣ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಪತ್ತೆಯನ್ನು ಮಾಡಬಹುದು.

ಡಿಜಿಟಲ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಎಂಡ್-ಪಾಯಿಂಟ್ ಡಿಟೆಕ್ಷನ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು Ct ಮೌಲ್ಯವನ್ನು (ಸೈಕಲ್ ಥ್ರೆಶೋಲ್ಡ್) ಅವಲಂಬಿಸಿಲ್ಲ, ಆದ್ದರಿಂದ ಡಿಜಿಟಲ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯು ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆಯಿಂದ ಕಡಿಮೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿಖರತೆ ಮತ್ತು ಪುನರುತ್ಪಾದನೆಯೊಂದಿಗೆ ಪಿಸಿಆರ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್‌ಗಳಿಗೆ ಸಹಿಷ್ಣುತೆ ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ.

ಹೆಚ್ಚಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿಖರತೆಯ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳಿಂದಾಗಿ, ಇದು ಪಿಸಿಆರ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್‌ಗಳಿಂದ ಸುಲಭವಾಗಿ ಮಧ್ಯಪ್ರವೇಶಿಸುವುದಿಲ್ಲ, ಮತ್ತು ಇದು ಪ್ರಮಾಣಿತ ಉತ್ಪನ್ನಗಳಿಲ್ಲದೆ ನಿಜವಾದ ಸಂಪೂರ್ಣ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಸಾಧಿಸಬಹುದು, ಇದು ಸಂಶೋಧನೆ ಮತ್ತು ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ಹಾಟ್‌ಸ್ಪಾಟ್ ಆಗಿ ಮಾರ್ಪಟ್ಟಿದೆ.

ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಘಟಕದ ವಿವಿಧ ರೂಪಗಳ ಪ್ರಕಾರ, ಇದನ್ನು ಮೂರು ಮುಖ್ಯ ವಿಧಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಬಹುದು: ಮೈಕ್ರೋಫ್ಲೂಯಿಡಿಕ್, ಚಿಪ್ ಮತ್ತು ಡ್ರಾಪ್ಲೆಟ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ಸ್.

1) ಮೈಕ್ರೋಫ್ಲೂಯಿಡಿಕ್ ಡಿಜಿಟಲ್ PCR, mdPCR:

ಮೈಕ್ರೋಫ್ಲೂಯಿಡಿಕ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ, ಡಿಎನ್ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಗಿದೆ.ಮೈಕ್ರೋಫ್ಲೂಯಿಡಿಕ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವು ಮಾದರಿ ನ್ಯಾನೊ-ಅಪ್‌ಗ್ರೇಡಿಂಗ್ ಅಥವಾ ಸಣ್ಣ ಹನಿಗಳ ಉತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಅರಿತುಕೊಳ್ಳಬಹುದು, ಆದರೆ ಹನಿಗಳಿಗೆ ವಿಶೇಷ ಹೊರಹೀರುವಿಕೆ ವಿಧಾನದ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.mdPCR ಅನ್ನು ಕ್ರಮೇಣವಾಗಿ ಇತರ ವಿಧಾನಗಳ ಬದಲಿಗೆ ಅಳವಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲಾಗಿದೆ.

2) ಹನಿ ಆಧಾರಿತ ಡಿಜಿಟಲ್ PCR, ddPCR:

ಮಾದರಿಯನ್ನು ಹನಿಗಳಾಗಿ ಸಂಸ್ಕರಿಸಲು ನೀರಿನಲ್ಲಿ-ತೈಲದ ಹನಿಗಳ ಉತ್ಪಾದನೆಯ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಬಳಸಿ ಮತ್ತು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಅಣುಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಸಾವಿರಾರು ನ್ಯಾನೊಸ್ಕೇಲ್ ಹನಿಗಳಾಗಿ ವಿಭಜಿಸಿ, ಪ್ರತಿಯೊಂದೂ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಗುರಿಯ ಅಣುವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದಿಲ್ಲ ಅಥವಾ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ಒಂದರಿಂದ ಹಲವಾರು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಗುರಿ ಅಣುಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ.

3) ಚಿಪ್ ಆಧಾರಿತ ಡಿಜಿಟಲ್ PCR, cdPCR:

ಸಿಲಿಕಾನ್ ವೇಫರ್‌ಗಳು ಅಥವಾ ಸ್ಫಟಿಕ ಶಿಲೆಯ ಗಾಜಿನ ಮೇಲೆ ಅನೇಕ ಮೈಕ್ರೋಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಮೈಕ್ರೋಕ್ಯಾವಿಟಿಗಳನ್ನು ಕೆತ್ತಲು ಮತ್ತು ವಿಭಿನ್ನ ನಿಯಂತ್ರಣ ಕವಾಟಗಳ ಮೂಲಕ ದ್ರಾವಣದ ಹರಿವನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸಲು ಮತ್ತು ಸಂಪೂರ್ಣ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಡಿಜಿಟಲ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಾಗಿ ಮಾದರಿ ದ್ರವವನ್ನು ಅದೇ ಗಾತ್ರದ ನ್ಯಾನೊಮೀಟರ್‌ಗಳಾಗಿ ನ್ಯಾನೊಮೀಟರ್‌ಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲು ಸಮಗ್ರ ದ್ರವ ಮಾರ್ಗ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಬಳಸಿ.

ಮೂರನೇ ತಲೆಮಾರಿನ ಪಿಸಿಆರ್‌ನ ಮುಖ್ಯ ಅನಾನುಕೂಲಗಳು:

ಉಪಕರಣಗಳು ಮತ್ತು ಕಾರಕಗಳು ದುಬಾರಿಯಾಗಿದೆ.

ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಗುಣಮಟ್ಟದ ಅವಶ್ಯಕತೆಗಳು ಹೆಚ್ಚು.ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಪ್ರಮಾಣವು ಮೈಕ್ರೋಸಿಸ್ಟಮ್ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಮೀರಿದರೆ, ಅದನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸುವುದು ಅಸಾಧ್ಯ, ಮತ್ತು ಅದು ತುಂಬಾ ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದ್ದರೆ, ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣದ ನಿಖರತೆ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ.

ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ವರ್ಧನೆಯು ಇದ್ದಾಗ ತಪ್ಪು ಧನಾತ್ಮಕಗಳನ್ನು ಸಹ ರಚಿಸಬಹುದು.