ಪರಿಚಯ:

ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ, ವೈಜ್ಞಾನಿಕ ಹೆಸರು ರೈಬೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ, ಇದರ ಸಂಕ್ಷೇಪಣವು ರೈಬೋ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದಿಂದ ಬಂದಿದೆ, ಇದು ಫಾಸ್ಫೋಡಿಸ್ಟರ್ ಬಂಧಗಳ ಮೂಲಕ ಕನಿಷ್ಠ ಡಜನ್‌ಗಟ್ಟಲೆ ರೈಬೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಸಂಪರ್ಕಿಸುವ ಮೂಲಕ ರೂಪುಗೊಂಡ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಒಂದು ವಿಧವಾಗಿದೆ.

ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಅನ್ವೇಷಿಸುವ ಪ್ರಮೇಯವು ಮಾಲಿನ್ಯ-ಮುಕ್ತ ಒಟ್ಟು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯುವುದಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯ ಮೂಲ ತತ್ವವನ್ನು ಸ್ಥೂಲವಾಗಿ ಈ ಕೆಳಗಿನಂತೆ ಸಂಕ್ಷೇಪಿಸಬಹುದು:

1. ಮೊದಲು ಕೋಶಗಳನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸಿ

2. ನಂತರ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಮಾಲಿಕ್ಯುಲರ್ ಕಲ್ಮಶಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ (ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು, ಲಿಪಿಡ್ಗಳು, ಡಿಎನ್ಎ, ಇತ್ಯಾದಿ)

3. ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಲವಣಗಳು ಮತ್ತು ಸಾವಯವ ದ್ರಾವಕಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುವಾಗ ಮತ್ತು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಮತ್ತಷ್ಟು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸುವಾಗ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಅವಕ್ಷೇಪಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ

ಹೊರತೆಗೆಯುವ ವಿಧಾನದ ಹಿಂದಿನ ಮತ್ತು ಪ್ರಸ್ತುತ

ಮೊದಲ ತಲೆಮಾರಿನ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ವಿಧಾನವೆಂದರೆ ಟ್ರಿಝೋಲ್ ಅವಕ್ಷೇಪನ ವಿಧಾನ (ಬಳಸಿದ ಕಾರಕಗಳಲ್ಲಿ ಗ್ವಾನಿಡಿನ್ ಐಸೊಥಿಯೋಸೈನೇಟ್, ಫೀನಾಲ್, ಕ್ಲೋರೊಫಾರ್ಮ್, ಇತ್ಯಾದಿ.) ಪಿಯೋಟರ್ ಚೊಮ್ಸಿನ್ಸ್ಕಿ ಎಂಬ ಅಜ್ಜ ಮತ್ತು ಅಜ್ಜಿ ನಿಕೊಲೆಟ್ಟಾ ಸಚ್ಚಿ ಕಂಡುಹಿಡಿದರು, ಏಕೆಂದರೆ ಈ ಆವಿಷ್ಕಾರವು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಹೊರತೆಗೆಯಲು ತ್ವರಿತ ಮತ್ತು ಸುಲಭವಾದ ಸಂಶೋಧನೆಗೆ ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ.

ನಂತರ, ಅಜ್ಜ ಈ ಪೇಟೆಂಟ್ ಅನ್ನು ಇನ್ವಿಟ್ರೊಜೆನ್‌ಗೆ ಮಾರಾಟ ಮಾಡಿದರು ಮತ್ತು ಇನ್ವಿಟ್ರೊಜೆನ್ ಈ ವಿಧಾನವನ್ನು ಜಗತ್ತಿಗೆ ಪ್ರಚಾರ ಮಾಡಿದರು ಮತ್ತು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸುವ ವಿಧಾನವಾಯಿತು.

ನಂತರ, ಇನ್ವಿಟ್ರೋಜನ್ ಅನ್ನು ಥರ್ಮೋ ಸ್ವಾಧೀನಪಡಿಸಿಕೊಂಡಿತು!

ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಉತ್ಪನ್ನ: ಇನ್ವಿಟ್ರೋಜೆನ್ನ TRIzol ಕಾರಕ

ಆದಾಗ್ಯೂ, TRIzol ಮಳೆಯ ವಿಧಾನಕ್ಕೆ ಬಹು ಅವಕ್ಷೇಪನ ಮತ್ತು RNA ಯ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಬಳಸಿದ ಕಾರಕಗಳು ವಿಷಕಾರಿ ಮತ್ತು ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಲು ಬಹಳ ಸಮಯ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.

ಆದ್ದರಿಂದ, ಎರಡನೇ ತಲೆಮಾರಿನ ಕಾಲಮ್-ಕಿಣ್ವ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ವಿಧಾನವು ಅಸ್ತಿತ್ವಕ್ಕೆ ಬಂದಿತು, ಸಿಲಿಕಾ ಜೆಲ್ ಮೆಂಬರೇನ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಹೊರಹೀರುವಿಕೆ ವಸ್ತುವಾಗಿ ಬಳಸಿ ಇತರ ಕಲ್ಮಶಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುವಾಗ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಚೇತರಿಕೆಯನ್ನು ಗರಿಷ್ಠಗೊಳಿಸಲು.

ಎರಡನೇ ತಲೆಮಾರಿನ ವಿಧಾನವು ಸ್ಥಿರ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯನ್ನು ಸರಳಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ, ಅಪಾಯಕಾರಿ ಅಂಶವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆರ್ಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ.

ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು: QIAGEN RNeasy ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ದೇಶೀಯ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು

ಆದಾಗ್ಯೂ, ಮೊದಲ ಮತ್ತು ಎರಡನೆಯ ತಲೆಮಾರಿನ ವಿಧಾನಗಳೆರಡೂ ಡಿಎನ್‌ಎ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು DNase ಅನ್ನು ಬಳಸಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ನಂತರದ ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗೆ ಕೆಲವು ಅನಾನುಕೂಲತೆಯನ್ನು ತರುತ್ತದೆ.ಉಳಿದ DNase ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್‌ನ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಮೊದಲ-ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ cDNA ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ನಿಖರತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.

ಆದ್ದರಿಂದ, ಮೂರನೇ ತಲೆಮಾರಿನ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ವಿಧಾನವನ್ನು ಎರಡನೇ ಪೀಳಿಗೆಯ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಹೊಂದುವಂತೆ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ಪ್ರಯೋಗವು ಯಾವುದೇ ಕಿಣ್ವಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲ, ಮತ್ತು ಆರ್ಎನ್ಎಯನ್ನು ಕೇವಲ ಎರಡು ಕಾಲಮ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಸುಲಭವಾಗಿ ಪಡೆಯಬಹುದು.

ಕಾಲಮ್ 1: ಡಿಎನ್ಎ ತೆರವುಗೊಳಿಸಲು ಡಿಎನ್ಎ-ಕ್ಲೀನಿಂಗ್ ಕಾಲಮ್

ಕಾಲಮ್ 2: ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ-ಮಾತ್ರ ಕಾಲಮ್ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಮರುಪಡೆಯುತ್ತದೆ

ಇಂತಹ ಸರಳ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯು ಸಮಯವನ್ನು ಉಳಿಸುವುದಲ್ಲದೆ, ಕೆಳಮಟ್ಟದ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯನ್ನು ಸಹ ಸುಗಮಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ!

ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು: QIAGEN RNeasy Plus ಮತ್ತುಪೂರ್ವಜನ್ಯಆರ್ಎನ್ಎ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಸರಣಿಯ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು

(RNeasy Plus)

(ಫೋರ್ಜೀನ್ ನಸಸ್ಯದ ಒಟ್ಟು ಆರ್ಎನ್ಎ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯ ಕಿಟ್)

ಸದ್ದಿಲ್ಲದೆ ಹೇಳು!Foregene ನ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಕಿಟ್ ಸಹ ಬಳಸಲು ಸುಲಭವಾದ RNase ಎರೇಸರ್ ಅನ್ನು ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಮಾನವ ದೇಹಕ್ಕೆ ಯಾವುದೇ ವಿಷಕಾರಿ ವಸ್ತುಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸದೆಯೇ 1 ನಿಮಿಷದಲ್ಲಿ ಘನ ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ 400μg RNase ಅನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು!

ಚಿತ್ರ1: ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆ ಹೋಲಿಕೆ ಚಾರ್ಟ್

Foregene ನ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಕೇವಲ ಎರಡು ಹಾಡುಗಳಲ್ಲಿ RNA ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯನ್ನು ಪೂರ್ಣಗೊಳಿಸಬಹುದು, ನಿಮ್ಮ ಪ್ರಯೋಗದ ಪ್ರಗತಿಯ ಬಗ್ಗೆ ಇತರರು ಅಸೂಯೆಪಡಬೇಡಿ!

ಚಿತ್ರ2:Eಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಹೋಲಿಕೆ ಚಾರ್ಟ್

ಮೊದಲ ತಲೆಮಾರಿನ (1: TRIzol)

ಎರಡನೇ ತಲೆಮಾರಿನ (2: QIAGEN ನ RNeasy)

ಮೂರನೇ ತಲೆಮಾರಿನ (3: QIAGEN ನ RNeasy ಜೊತೆಗೆ, 4: Foregene)

ಚಿತ್ರ3: qPCR ಗ್ರಾಫ್ (ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಕರ್ವ್ ಗ್ರಾಫ್)

ಮೊದಲ ತಲೆಮಾರಿನ (ಹಸಿರು ಎಂದರೆ TRIzol -, ಕೆಂಪು ಎಂದರೆ TRIzol +)

ಎರಡನೇ ತಲೆಮಾರಿನ (ಆಕಾಶ ನೀಲಿ ಎಂದರೆ QIAGEN RNeasy-, ಕೆಂಪು ಎಂದರೆ QIAGEN RNeasy +)

ಮೂರನೇ ತಲೆಮಾರಿನ (ನೀಲಿ ಎಂದರೆ QIAGEN RNeasy ಜೊತೆಗೆ, ಹಸಿರು ಎಂದರೆ Foregene)

(ಗಮನಿಸಿ: qPCR ಗ್ರಾಫ್ "-" DNase ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ ಮತ್ತು DNA ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗಿಲ್ಲ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, CT ಹೆಚ್ಚಾಗಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಫಲಿತಾಂಶವು ನಿಖರವಾಗಿಲ್ಲ; "+" DNase ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು DNA ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗಿದೆ, ಫಲಿತಾಂಶವು ನಿಖರವಾಗಿದೆ)

ಪ್ರತಿ ತಾಂತ್ರಿಕ ಅಪ್‌ಗ್ರೇಡ್ ಎಂದರೆ ಪ್ರಯೋಗದ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯು ಸರಳ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚು ಬಳಕೆದಾರ ಸ್ನೇಹಿ ದಿಕ್ಕಿನಲ್ಲಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಗೊಳ್ಳುತ್ತಿದೆ.

ಹೆಚ್ಚಿನ ವೈಜ್ಞಾನಿಕ ಸಂಶೋಧಕರು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಸಮಯ ಮತ್ತು ವೆಚ್ಚವನ್ನು ಉಳಿಸಲು, ಉತ್ತಮ ಗುಣಮಟ್ಟದ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಮತ್ತು ಜಂಟಿಯಾಗಿ ಹೆಚ್ಚು ಮೌಲ್ಯಯುತವಾದ ವೈಜ್ಞಾನಿಕ ಸಂಶೋಧನಾ ಸಾಧನೆಗಳನ್ನು ರಚಿಸಲು Foregene ಗುರಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.