ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಮಾಡುವಾಗ ಪ್ರತಿಯೊಬ್ಬರೂ ಯಾವಾಗಲೂ ಅಂತಹ ಅಥವಾ ಅಂತಹ ಸಮಸ್ಯೆಗಳನ್ನು ಎದುರಿಸುತ್ತಾರೆ ಎಂದು ನಾನು ನಂಬುತ್ತೇನೆ, ಆದರೆ ಅವುಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನವುಗಳನ್ನು ಎರಡು ಮುಖ್ಯ ಸಮಸ್ಯೆಗಳಾಗಿ ವರ್ಗೀಕರಿಸಬಹುದು:

ಜೀನ್ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನ ತುಂಬಾ ಕಡಿಮೆ ವರ್ಧನೆ (ವರ್ಧನೆ);
ತುಂಬಾ ಗುರಿಯಿಲ್ಲದ ಜೀನ್ ವರ್ಧನೆ.
ಈ ಸಮಸ್ಯೆಗಳನ್ನು ಪರಿಹರಿಸಲು ಸೇರ್ಪಡೆಗಳನ್ನು ಬಳಸುವುದು ಸಾಮಾನ್ಯ ತಂತ್ರಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾಗಿದೆ.ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಸೇರ್ಪಡೆಗಳ ಪಾತ್ರವು ಎರಡು ಅಂಶಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ:
ದ್ವಿತೀಯ ರಚನೆವಂಶವಾಹಿಗಳ (ದ್ವಿತೀಯ ರಚನೆ);
ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ಪ್ರೈಮಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ.
ಇಂದು, ಸಂಪಾದಕರು ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಕಾರ್ಯಗಳಲ್ಲಿನ ಸಾಮಾನ್ಯ ಸೇರ್ಪಡೆಗಳನ್ನು ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ ನಿಮಗೆ ಪರಿಚಯಿಸುತ್ತಾರೆ.
ದ್ವಿತೀಯ ರಚನೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಸೇರ್ಪಡೆಗಳು
ಸಲ್ಫಾಕ್ಸೈಡ್(DMSO)
ಜೀನ್ ಮಾದರಿಗಳುಹೆಚ್ಚಿನ GC ವಿಷಯದೊಂದಿಗೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, DMSO ಸಹ Taq ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಬಹಳವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಪ್ರತಿಯೊಬ್ಬರೂ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಪ್ರವೇಶ ಮತ್ತು ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಸಮತೋಲನಗೊಳಿಸಬೇಕು.ನಿಮ್ಮ ಪ್ರಯೋಗಕ್ಕೆ ಸರಿಹೊಂದುವ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲು ನೀವು 2% ರಿಂದ 10% ವರೆಗೆ DSMO ನ ವಿವಿಧ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳನ್ನು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಸಂಪಾದಕರು ಸೂಚಿಸುತ್ತಾರೆ.
ಅಯಾನಿಕ್ ಅಲ್ಲದ ಮಾರ್ಜಕಗಳು
0.1-1% ಟ್ರೈಟಾನ್ X-100, ಟ್ವೀನ್ 20 ಅಥವಾ NP-40 ನಂತಹ ಅಯಾನಿಕ್ ಅಲ್ಲದ ಮಾರ್ಜಕಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ DNA ದ್ವಿತೀಯ ರಚನೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ಇದು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಜೀನ್‌ನ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಬಹುದಾದರೂ, ಇದು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ವರ್ಧನೆಯ ತೊಂದರೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಈ ಸೇರ್ಪಡೆಗಳು ಕಡಿಮೆ-ಇಳುವರಿ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗೆ ಶಿಲಾಖಂಡರಾಶಿಗಳಿಲ್ಲದೆ ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತವೆ, ಆದರೆ ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಅಶುದ್ಧ PRC ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗೆ ಅಷ್ಟು ಚೆನ್ನಾಗಿಲ್ಲ.ಅಯಾನಿಕ್ ಅಲ್ಲದ ಮಾರ್ಜಕಗಳ ಮತ್ತೊಂದು ಪ್ರಯೋಜನವೆಂದರೆ SDS ಮಾಲಿನ್ಯದ ಕಡಿತ.ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ, ಎಸ್‌ಡಿಎಸ್ ಅನ್ನು ಪಿಸಿಆರ್ ಹಂತಕ್ಕೆ ತರಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗೆ 0.5% ಟ್ವೀನ್-20 ಅಥವಾ ಟ್ವೀನ್-40 ಅನ್ನು ಸೇರಿಸುವುದರಿಂದ SDS ನ ಋಣಾತ್ಮಕ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ತಟಸ್ಥಗೊಳಿಸಬಹುದು.
ಬೀಟೈನ್_
ದ್ವಿತೀಯ ರಚನೆಯ ರಚನೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಬೀಟೈನ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ವಾಣಿಜ್ಯ ಪಿಸಿಆರ್ ಕಿಟ್‌ಗಳಿಗೆ "ಮಿಸ್ಟರಿ" ಸೇರ್ಪಡೆಯಾಗಿದೆ.ನೀವು ಬೀಟೈನ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲು ಬಯಸಿದರೆ, ನೀವು ಬೀಟೈನ್ ಅಥವಾ ಬೀಟೈನ್ ಮೊನೊ-ಹೈಡ್ರೇಟ್ (ಬೀಟೈನ್ ಅಥವಾ ಬೀಟೈನ್ ಮೊನೊ-ಹೈಡ್ರೇಟ್) ಅನ್ನು ಹಾಕಬೇಕು, ಆದರೆ ಬೀಟೈನ್ ಹೈಡ್ರೋಕ್ಲೋರೈಡ್ (ಬೀಟೈನ್ ಎಚ್ಸಿಎಲ್) ಅಲ್ಲ, 1-1.7M ನ ಅಂತಿಮ ಸಾಂದ್ರತೆಗೆ ಹೊಂದಿಸಿ.ಬೀಟೈನ್ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಏಕೆಂದರೆ ಇದು ಡಿಎನ್‌ಎ ಕರಗುವಿಕೆ/ಡಿಎನ್‌ಎ ಡಿನಾಟರೇಶನ್‌ನ ಮೂಲ ಜೋಡಿ ಸಂಯೋಜನೆಯ ಅವಲಂಬನೆಯನ್ನು ನಿವಾರಿಸುತ್ತದೆ.
ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ಪ್ರೈಮಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಸೇರ್ಪಡೆಗಳು
ಫಾರ್ಮಾಮೈಡ್
ಫಾರ್ಮಾಮೈಡ್ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ ಸಾವಯವ ಪಿಸಿಆರ್ ಸಂಯೋಜಕವಾಗಿದೆ.ಇದು ಡಿಎನ್‌ಎಯಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ತೋಡು ಮತ್ತು ಮೈನರ್ ಗ್ರೂವ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಬಹುದು, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಮಾಸ್ಟರ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಡಬಲ್ ಹೆಲಿಕ್ಸ್‌ನ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಡಿಎನ್‌ಎ ಕರಗುವ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.PCR ಪ್ರಯೋಗಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ಫಾರ್ಮೈಡ್ನ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 1% -5% ಆಗಿದೆ.
ಟೆಟ್ರಾಮಿಥೈಲ್ಅಮೋನಿಯಂ ಕ್ಲೋರೈಡ್( TMAC)
ಟೆಟ್ರಾಮೆಥೈಲಾಮೋನಿಯಮ್ ಕ್ಲೋರೈಡ್ ಹೈಬ್ರಿಡೈಸೇಶನ್ (ಹೈಬ್ರಿಡೈಸೇಶನ್ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ) ಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಡಿಎನ್ಎ ಕರಗುವ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ.ಹೀಗಾಗಿ, TMAC ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ಪ್ರೈಮಿಂಗ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು ಮತ್ತು DNA ಮತ್ತು RNA ಯ ತಪ್ಪಾಗಿ ಬಂಧಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದು.ನೀವು ಬಳಸಿದರೆಕ್ಷೀಣಗೊಳ್ಳುವ ಪ್ರೈಮರ್ಗಳುPCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ, TMAC ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಲು ಮರೆಯದಿರಿ, ಇದನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 15-100mM ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಇತರ ಸಾಮಾನ್ಯ ಸೇರ್ಪಡೆಗಳು
ಮೇಲೆ ತಿಳಿಸಲಾದ ಎರಡು ವರ್ಗಗಳ ಸೇರ್ಪಡೆಗಳ ಜೊತೆಗೆ, ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಲ್ಲಿ ಅನೇಕ ಸಾಮಾನ್ಯ ಸೇರ್ಪಡೆಗಳಿವೆ, ಅವುಗಳು ವಿಭಿನ್ನ ಕಾರ್ಯಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದರೂ ಸಹ ಅವು ಬಹಳ ಮುಖ್ಯವಾಗಿವೆ.
ಮೆಗ್ನೀಸಿಯಮ್ ಅಯಾನು
ಮೆಗ್ನೀಸಿಯಮ್ ಅಯಾನು ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಅನಿವಾರ್ಯ ಕೊಫ್ಯಾಕ್ಟರ್ (ಕೋಫಾಕ್ಟರ್) ಆಗಿದೆ, ಅಂದರೆ ಮೆಗ್ನೀಸಿಯಮ್ ಅಯಾನು ಇಲ್ಲದೆ, ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯವಾಗಿರುತ್ತದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಮೆಗ್ನೀಸಿಯಮ್ ಅಯಾನುಗಳು ಪಾಲಿಮರೇಸ್ನ ದಕ್ಷತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಬಹುದು.ಪ್ರತಿ PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಮೆಗ್ನೀಸಿಯಮ್ ಅಯಾನುಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಬದಲಾಗುತ್ತದೆ.ಚೆಲೇಟಿಂಗ್ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳು (ಉದಾಹರಣೆಗೆ EDTA ಅಥವಾ ಸಿಟ್ರೇಟ್), dNTP ಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಮೆಗ್ನೀಸಿಯಮ್ ಅಯಾನುಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ನಿಮ್ಮ PCR ಪ್ರಯೋಗದಲ್ಲಿ ನಿಮಗೆ ಸಮಸ್ಯೆಗಳಿದ್ದರೆ, ನೀವು ವಿಭಿನ್ನ ಮೆಗ್ನೀಸಿಯಮ್ ಅಯಾನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಬಹುದು, ಉದಾಹರಣೆಗೆ, 1.0 ರಿಂದ 4.0mM ವರೆಗೆ, ಮಧ್ಯಂತರದಲ್ಲಿ 0.5-1mM.
ಬಹು ಫ್ರೀಜ್-ಲೇಪ ಚಕ್ರಗಳು ಮೆಗ್ನೀಸಿಯಮ್ ಕ್ಲೋರೈಡ್ ದ್ರಾವಣದ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಶ್ರೇಣೀಕರಣಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು ಎಂದು ಗಮನಿಸಬೇಕಾದ ಅಂಶವಾಗಿದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಪ್ರತಿ ಬಳಕೆಯ ಮೊದಲು ನೀವು ಅದನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಕರಗಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಅದನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೊದಲು ಅದನ್ನು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಬೇಕು.
ಗೋವಿನ ಸೀರಮ್ ಅಲ್ಬುಮಿನ್(ಬೋವಿನ್ ಅಲ್ಬುಮಿನ್, BSA)
ಆಣ್ವಿಕ ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರದ ಪ್ರಯೋಗಗಳಲ್ಲಿ, ಗೋವಿನ ಸೀರಮ್ ಅಲ್ಬುಮಿನ್ ಬಹಳ ಸಾಮಾನ್ಯವಾದ ಸಂಯೋಜಕವಾಗಿದೆ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ನಿರ್ಬಂಧಿತ ಕಿಣ್ವ ಜೀರ್ಣಕ್ರಿಯೆ ಮತ್ತು PCR ಪ್ರಯೋಗಗಳಲ್ಲಿ.PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಲ್ಲಿ, ಫೀನಾಲಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳಂತಹ ಮಾಲಿನ್ಯಕಾರಕಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು BSA ಸಹಾಯಕವಾಗಿದೆ.ಮತ್ತು ಇದು ಪರೀಕ್ಷಾ ಕೊಳವೆಯ ಗೋಡೆಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾಕಾರಿಗಳ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಎಂದು ಹೇಳಲಾಗುತ್ತದೆ.PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಸೇರಿಸಲಾದ BSA ಯ ಸಾಂದ್ರತೆಯು 0.8 mg/ml ತಲುಪಬಹುದು.
 
ಸಂಬಂಧಿತ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು:
ಪಿಸಿಆರ್ ಹೀರೋ(ವರ್ಣದೊಂದಿಗೆ)
ಪಿಸಿಆರ್ ಹೀರೋ