ನೇರ ಪಿಸಿಆರ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ ಇಲ್ಲದೆ ವರ್ಧನೆಗಾಗಿ ಪ್ರಾಣಿ ಅಥವಾ ಸಸ್ಯ ಅಂಗಾಂಶಗಳನ್ನು ನೇರವಾಗಿ ಬಳಸುವ ಒಂದು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಾಗಿದೆ.ಅನೇಕ ವಿಧಗಳಲ್ಲಿ, ನೇರ ಪಿಸಿಆರ್ ಸಾಮಾನ್ಯ ಪಿಸಿಆರ್ ನಂತೆ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ

ಮುಖ್ಯ ವ್ಯತ್ಯಾಸವೆಂದರೆ ನೇರ ಪಿಸಿಆರ್‌ನಲ್ಲಿ ಬಳಸುವ ಕಸ್ಟಮ್ ಬಫರ್, ಮಾದರಿಯನ್ನು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ ಇಲ್ಲದೆ ನೇರವಾಗಿ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗೆ ಒಳಪಡಿಸಬಹುದು, ಆದರೆ ಕಿಣ್ವಗಳ ಸಹಿಷ್ಣುತೆ ಮತ್ತು ನೇರ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಬಫರ್‌ನ ಹೊಂದಾಣಿಕೆಗೆ ಅನುಗುಣವಾದ ಅವಶ್ಯಕತೆಗಳಿವೆ.

ಸಾಮಾನ್ಯ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ಅಥವಾ ಕಡಿಮೆ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳು ಇದ್ದರೂ, ಕಿಣ್ವಗಳು ಮತ್ತು ಬಫರ್‌ಗಳ ಕ್ರಿಯೆಯ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ನೇರ ಪಿಸಿಆರ್ ಇನ್ನೂ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಸಾಧಿಸಬಹುದು.ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗೆ ಉತ್ತಮ-ಗುಣಮಟ್ಟದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲವು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಕಲ್ಮಶಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದರೆ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಸುಗಮ ಪ್ರಗತಿಯನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ.ನೇರ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರಸ್ತುತ ಆಣ್ವಿಕ ರೋಗನಿರ್ಣಯದ ಕ್ಷೇತ್ರದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ಜನಪ್ರಿಯ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾಗಿದೆ.

01 ನೇರ ಪಿಸಿಆರ್ ಅನ್ನು ಮೂಲತಃ ಪ್ರಾಣಿ ಮತ್ತು ಸಸ್ಯಗಳಿಗೆ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತಿತ್ತು

ನೇರ ಪಿಸಿಆರ್‌ನ ಆರಂಭಿಕ ಅನ್ವಯವು ಪ್ರಾಣಿಗಳು ಮತ್ತು ಸಸ್ಯಗಳ ಕ್ಷೇತ್ರವಾಗಿದೆ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಇಲಿ, ಬೆಕ್ಕು, ಕೋಳಿ, ಮೊಲ, ಕುರಿ, ದನ, ಇತ್ಯಾದಿಗಳ ರಕ್ತ, ಅಂಗಾಂಶ ಮತ್ತು ಕೂದಲು, ಸಸ್ಯ ಎಲೆಗಳು ಮತ್ತು ಬೀಜಗಳು ಇತ್ಯಾದಿ. ಜೀನೋಟೈಪಿಂಗ್, ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಜೆನಿಕ್, ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಪತ್ತೆ, ಜೀನ್ ನಾಕ್‌ಔಟ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ, ಡಿಎನ್‌ಎ ಮೂಲ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಮತ್ತು ಇತರ ಕ್ಷೇತ್ರಗಳ ಗುರುತಿಸುವಿಕೆ, ಜಾತಿಗಳ ಗುರುತಿಸುವಿಕೆ.

ಈ ಕ್ಷೇತ್ರಗಳು ಕೆಲವು ಸಾಮಾನ್ಯ ಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ, ಅಂದರೆ, ಗುರಿಯ ಜೀನ್ ಅಂಶವು ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಗಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ ತೊಂದರೆದಾಯಕವಾಗಿದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ನೇರ ಪಿಸಿಆರ್ ಸಮಯವನ್ನು ಉಳಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ಮೇಲೆ ಸಣ್ಣ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬೀರುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ವೆಚ್ಚವನ್ನು ಉಳಿಸುತ್ತದೆ.

ರೋಗಕಾರಕ ಪತ್ತೆಗೆ ಬಳಸುವ ನೇರ ಪಿಸಿಆರ್ ಇತ್ತೀಚಿನ ವರ್ಷಗಳ ವಿಷಯವಾಗಿದೆ, ಕೆಲವು ಪಿಸಿಆರ್ ಕಾರಕ ತಯಾರಕರು ನಾವೀನ್ಯತೆಯನ್ನು ಮಾಡುವಾಗ ಈ ದಿಕ್ಕಿನಲ್ಲಿ ಸಾಕಷ್ಟು ಪ್ರಯತ್ನಗಳನ್ನು ಮಾಡಿದ್ದಾರೆ.ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಈ COVID-19 ಸಾಂಕ್ರಾಮಿಕದಲ್ಲಿ, SARS-CoV-2 ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಡಿಟೆಕ್ಷನ್ ಕಿಟ್ (ಮಲ್ಟಿಪ್ಲೆಕ್ಸ್ PCR ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಪ್ರೋಬ್ ಮೆಥಡ್) ನಂತಹ ಅನೇಕ ಪತ್ತೆ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಮಾರುಕಟ್ಟೆಯಲ್ಲಿ ಕಾಣಿಸಿಕೊಂಡಿವೆ, ಇದು Foregene ನಿಂದ ಸಂಶೋಧಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ ಮತ್ತು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಮಾನವನ ಗುಣಾತ್ಮಕ ಆಸಿಡ್ ನ್ಯಾಶನಲ್ ಡಿಟೆಕ್ಷನ್-2 SARS ನ್ಯೂಕ್ಲಿಟಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ನ್ಯಾಸಿಕಲ್ವಿಯಲ್ಲಿ ನೈಜ-ಸಮಯದ RT PCR ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು (rRT-PCR) ಬಳಸುತ್ತದೆ. ಅಥವಾ ಓರೊಫಾರ್ಂಜಿಯಲ್ ಸ್ವ್ಯಾಬ್ ಮಾದರಿಗಳು.

ಸಾಮಾನ್ಯ ORF1ab, N, E, ಮತ್ತು ಪತ್ತೆಗಾಗಿ ನೇರ PCR ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಬಳಸುವ ಕಂಪನಿಗಳಲ್ಲಿ Foregene ಒಂದಾಗಿದೆಭಿನ್ನ SARS-CoV-2 B.1.1.7 ವಂಶಾವಳಿ (UK), B.1.351 ವಂಶಾವಳಿ (ZA), B.1.617 ವಂಶ (IND) ಮತ್ತು P.1 ವಂಶಾವಳಿ (BR) ನಂತಹ ಮಾನವ ನಾಸೊಫಾರ್ಂಜಿಯಲ್ ಅಥವಾ ಓರೊಫಾರ್ಂಜಿಯಲ್ ಸ್ವ್ಯಾಬ್ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿನ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳ ವಂಶಾವಳಿಗಳು.

02  ನೇರ ಪಿಸಿಆರ್‌ಗೆ ಕಾರಕಗಳು ಬೇಕಾಗುತ್ತವೆ

ಮಾದರಿ ಲೈಸೇಟ್

ಮಾದರಿ ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು ನೀವೇ ಕಾನ್ಫಿಗರ್ ಮಾಡಬಹುದು ಅಥವಾ ಖರೀದಿಸಬಹುದು.ಲೈಸೇಟ್‌ನ ವಿವಿಧ ಬ್ರಾಂಡ್‌ಗಳ ಸಂಯೋಜನೆಯಲ್ಲಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸವು ಲೈಸಿಂಗ್ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ ಲೈಸಿಂಗ್ ಸಮಯವು ಸ್ವಲ್ಪ ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿರುತ್ತದೆ.ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಪ್ರಾಣಿಗಳ ಅಂಗಾಂಶ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಲು, 30 ನಿಮಿಷಗಳು ಅಥವಾ ರಾತ್ರಿಯ ಲೈಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ವೈರಸ್‌ಗಳಿಗೆ ಲೈಸಿಸ್ ಪರಿಹಾರವು 3-10 ನಿಮಿಷಗಳವರೆಗೆ ಇರುತ್ತದೆ.

ಪಿಸಿಆರ್ ಮಾಸ್ಟರ್ ಮಿಶ್ರಣ

ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ವರ್ಧನೆ ಮತ್ತು ವರ್ಧನೆಯ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಹಾಟ್-ಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.ನೇರ ಪಿಸಿಆರ್‌ನ ತಿರುಳು ಹೆಚ್ಚು ಸಹಿಷ್ಣು ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಆಗಿದೆ.

DNA ವರ್ಧನೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿನ ಘಟಕಗಳನ್ನು ನಿವಾರಿಸಿ ಅಥವಾ ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಿ

ಮಾದರಿಯನ್ನು ಲೈಸೇಟ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ನಂತರ, ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು, ಲಿಪಿಡ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಜೀವಕೋಶದ ಅವಶೇಷಗಳು ಬಿಡುಗಡೆಯಾಗುತ್ತವೆ, ಈ ವಸ್ತುಗಳು ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ನೇರ ಪಿಸಿಆರ್ ಈ ಅಂಶಗಳ ಪ್ರಭಾವವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಅನುಗುಣವಾದ ತೆಗೆದುಹಾಕುವಿಕೆ ಅಥವಾ ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಅಗತ್ಯವಿದೆ.

03  ನೇರ ಪಿಸಿಆರ್‌ನ ಐದು ಜ್ಞಾನ ಬಿಂದುಗಳ ಸಂಗ್ರಹ

ಮೊದಲನೆಯದಾಗಿ, ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಪಿಸಿಆರ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವು ವಿವಿಧ ಜೈವಿಕ ಮಾದರಿಗಳಿಗೆ ನೇರ ಪಿಸಿಆರ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವಾಗಿದೆ.ಈ ತಾಂತ್ರಿಕ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ, ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲವನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸುವ ಮತ್ತು ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲ, ನೇರವಾಗಿ ಅಂಗಾಂಶದ ಮಾದರಿಯನ್ನು ವಸ್ತುವಾಗಿ ಬಳಸಿ, ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲು ಗುರಿ ಜೀನ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.

ಎರಡನೆಯದಾಗಿ, ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಪಿಸಿಆರ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವು ಕೇವಲ ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಡಿಎನ್‌ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವಲ್ಲ, ಆದರೆ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ.

ಮೂರನೆಯದಾಗಿ, ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಪಿಸಿಆರ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವು ಅಂಗಾಂಶ ಮಾದರಿಗಳ ಮೇಲೆ ದಿನನಿತ್ಯದ ಗುಣಾತ್ಮಕ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ನೇರವಾಗಿ ನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ನೈಜ-ಸಮಯದ qPCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ, ಇದಕ್ಕೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಬಲವಾದ ಹಿನ್ನೆಲೆ-ವಿರೋಧಿ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಲು ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಪ್ರತಿದೀಪಕವು ವಿರೋಧಿ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ತಣಿಸುತ್ತದೆ.

ನಾಲ್ಕನೆಯದಾಗಿ, ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಪಿಸಿಆರ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದಿಂದ ಗುರಿಪಡಿಸಲಾದ ಮಾದರಿಗಳಿಗೆ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳ ಬಿಡುಗಡೆಯ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗೆ ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುವ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು, ಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್‌ಗಳು, ಉಪ್ಪು ಅಯಾನುಗಳು ಇತ್ಯಾದಿಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಬೇಡಿ.ಸಂಕೀರ್ಣ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಕಿಣ್ವದ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು ಪುನರಾವರ್ತನೆಯ ನಿಖರತೆಯನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಪ್ರತಿರೋಧ ಮತ್ತು ಹೊಂದಾಣಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಲು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ಮಿಶ್ರಣದ ಅಗತ್ಯವಿದೆ.

ಐದನೆಯದಾಗಿ, ಯಾವುದೇ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಪುಷ್ಟೀಕರಣ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಮತ್ತು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನ ಪ್ರಮಾಣವಿಲ್ಲದೆ ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಪಿಸಿಆರ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದಿಂದ ಗುರಿಪಡಿಸಲಾದ ಅಂಗಾಂಶ ಮಾದರಿಯು ತುಂಬಾ ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ, ಇದಕ್ಕೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಅತ್ಯಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂವೇದನೆ ಮತ್ತು ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರಬೇಕು.