qPCR ಪ್ರಯೋಗಗಳಲ್ಲಿ, ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸವು ಬಹಳ ಮುಖ್ಯವಾದ ಲಿಂಕ್ ಆಗಿದೆ.ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಸೂಕ್ತವೋ ಇಲ್ಲವೋ ಎಂಬುದು ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆಯು ಗುಣಮಟ್ಟವನ್ನು ತಲುಪುತ್ತದೆಯೇ, ವರ್ಧಿತ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿವೆಯೇ ಮತ್ತು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಲಭ್ಯವಿವೆಯೇ ಎಂಬುದಕ್ಕೆ ನಿಕಟ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿದೆ.
ಆದ್ದರಿಂದ qPCR ಪ್ರೈಮರ್ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಉತ್ತಮಗೊಳಿಸುವುದು ಹೇಗೆ?ಹೆಚ್ಚಿನ ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆ?
ಇಂದು, qPCR ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಒಟ್ಟಿಗೆ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲು ನಾವು ನಿಮ್ಮನ್ನು ಕರೆದೊಯ್ಯುತ್ತೇವೆ ಮತ್ತು qPCR ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸವು ಪ್ರಯೋಗಗಳಲ್ಲಿ ಸಮರ್ಥವಾದ ಜ್ಞಾನ ಕೌಶಲ್ಯವಾಗಲಿ.
qPCR ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸುವಾಗ, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಈ ಕೆಳಗಿನ ಅಂಶಗಳಿಗೆ ಗಮನ ಕೊಡಿ: ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಇಂಟ್ರಾನ್‌ಗಳಾದ್ಯಂತ ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಬೇಕು, ಉತ್ಪನ್ನದ ಉದ್ದವು 100-300 bp ಆಗಿರಬೇಕು, Tm ಮೌಲ್ಯವು 60 ° C ಗೆ ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಹತ್ತಿರವಾಗಿರಬೇಕು ಮತ್ತು ಅಪ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಮತ್ತು ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಹತ್ತಿರವಾಗಿರಬೇಕು ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್‌ನ ಅಂತ್ಯವು G ಅಥವಾ C ಆಗಿರಬೇಕು, ಇತ್ಯಾದಿ.
1. ಇಂಟ್ರಾನ್‌ಗಳನ್ನು ವ್ಯಾಪಿಸಿರುವ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ವಿನ್ಯಾಸ
qPCR ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸುವಾಗ, ಇಂಟ್ರಾನ್‌ಗಳಾದ್ಯಂತ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾದ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಆರಿಸುವುದರಿಂದ gDNA ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ವರ್ಧಿಸುವುದನ್ನು ತಡೆಯಬಹುದು, ಮತ್ತು ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಎಲ್ಲಾ cDNA ಯ ವರ್ಧನೆಯಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ, ಹೀಗಾಗಿ gDNA ಮಾಲಿನ್ಯದ ಪ್ರಭಾವವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುತ್ತದೆ.
2. ಪ್ರೈಮರ್ ಉದ್ದ
ಪ್ರೈಮರ್ ಉದ್ದವು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 18-30 nt ನಡುವೆ ಇರುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಉತ್ಪನ್ನದ ಉದ್ದವನ್ನು 100-300 bp ನಡುವೆ ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ನಿಯಂತ್ರಿಸಬೇಕು.
ಪ್ರೈಮರ್ ತುಂಬಾ ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದ್ದರೆ, ಅದು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ವರ್ಧನೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ಅದು ತುಂಬಾ ಉದ್ದವಾಗಿದ್ದರೆ, ಅದು ಸುಲಭವಾಗಿ ದ್ವಿತೀಯ ರಚನೆಯನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ (ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಹೇರ್‌ಪಿನ್ ರಚನೆ).ವರ್ಧನೆಯ ಉತ್ಪನ್ನವು ತುಂಬಾ ಉದ್ದವಾಗಿದ್ದರೆ, ಪಾಲಿಮರೇಸ್ನ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗೆ ಇದು ಸೂಕ್ತವಲ್ಲ, ಇದು ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.
3. GC ವಿಷಯ ಮತ್ತು Tm ಮೌಲ್ಯ
ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ GC ವಿಷಯವನ್ನು 40% ಮತ್ತು 60% ನಡುವೆ ನಿಯಂತ್ರಿಸಬೇಕು.ಇದು ತುಂಬಾ ಹೆಚ್ಚು ಅಥವಾ ತುಂಬಾ ಕಡಿಮೆಯಿದ್ದರೆ, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಲು ಇದು ಅನುಕೂಲಕರವಾಗಿರುವುದಿಲ್ಲ.ಒಂದೇ Tm ಮೌಲ್ಯ ಮತ್ತು ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಫಾರ್ವರ್ಡ್ ಮತ್ತು ರಿವರ್ಸ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ GC ವಿಷಯವು ಒಂದೇ ಆಗಿರಬೇಕು.
Tm ಮೌಲ್ಯವು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು 55-65 ° C ನಡುವೆ ಇರಬೇಕು, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಸುಮಾರು 60 ° C, ಮತ್ತು ಅಪ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಮತ್ತು ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್‌ನ Tm ಮೌಲ್ಯವು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಹತ್ತಿರವಾಗಿರಬೇಕು, ಮೇಲಾಗಿ 4 ° C ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿರಬಾರದು.
4. ಪ್ರೈಮರ್‌ನ 3′ ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ A ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡುವುದನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ
ಪ್ರೈಮರ್‌ನ 3′ ಅಂತ್ಯವು ಹೊಂದಿಕೆಯಾಗದಿದ್ದಾಗ, ವಿಭಿನ್ನ ನೆಲೆಗಳ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ದಕ್ಷತೆಯಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳಿವೆ.ಕೊನೆಯ ಬೇಸ್ A ಆಗಿರುವಾಗ, ಇದು ಅಸಾಮರಸ್ಯದ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿಯೂ ಸಹ ಸರಣಿ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಕೊನೆಯ ಬೇಸ್ T ಯಾವಾಗ ಆಗಿದ್ದರೆ, ಅಸಾಮರಸ್ಯದ ಇಂಡಕ್ಷನ್‌ನ ದಕ್ಷತೆಯು ಬಹಳ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಪ್ರೈಮರ್‌ನ 3′ ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ A ಅನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡುವುದನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿ, ಮತ್ತು T ಅನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡುವುದು ಉತ್ತಮ.
ಇದು ಪ್ರೋಬ್ ಪ್ರೈಮರ್ ಆಗಿದ್ದರೆ, ಪ್ರೋಬ್‌ನ 5′ ಅಂತ್ಯವು G ಆಗಿರಬಾರದು, ಏಕೆಂದರೆ ಒಂದೇ G ಬೇಸ್ ಅನ್ನು FAM ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ವರದಿಗಾರ ಗುಂಪಿಗೆ ಸಂಪರ್ಕಿಸಿದಾಗಲೂ, G FAM ಗುಂಪಿನಿಂದ ಹೊರಸೂಸುವ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಂಕೇತವನ್ನು ತಣಿಸಬಹುದು, ಇದು ತಪ್ಪು ನಕಾರಾತ್ಮಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.ಕಾಣಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ.
5. ಮೂಲ ವಿತರಣೆ
ಪ್ರೈಮರ್‌ನಲ್ಲಿನ ನಾಲ್ಕು ಬೇಸ್‌ಗಳ ವಿತರಣೆಯು ಆದ್ಯತೆಯ ಯಾದೃಚ್ಛಿಕವಾಗಿರುತ್ತದೆ, 3 ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಸತತ G ಅಥವಾ C ಅನ್ನು 3′ ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ ಮತ್ತು 3 ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಅನುಕ್ರಮವಾಗಿ ತಪ್ಪಿಸುತ್ತದೆ.GC-ರಿಚ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸ್ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿ ಜೋಡಣೆಯನ್ನು ಸೃಷ್ಟಿಸಲು G ಅಥವಾ C ಸುಲಭವಾಗಿದೆ.
6. ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸ ಪ್ರದೇಶವು ಸಂಕೀರ್ಣ ದ್ವಿತೀಯಕ ರಚನೆಗಳನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಬೇಕು.
ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಉತ್ಪನ್ನದ ಏಕ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್‌ನಿಂದ ರೂಪುಗೊಂಡ ದ್ವಿತೀಯ ರಚನೆಯು ಪಿಸಿಆರ್‌ನ ಸುಗಮ ಪ್ರಗತಿಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.ಗುರಿಯ ಅನುಕ್ರಮದಲ್ಲಿ ದ್ವಿತೀಯಕ ರಚನೆಯು ಮುಂಚಿತವಾಗಿಯೇ ಇದೆಯೇ ಎಂದು ಊಹಿಸುವ ಮೂಲಕ, ಪ್ರೈಮರ್ಗಳ ವಿನ್ಯಾಸದಲ್ಲಿ ಈ ಪ್ರದೇಶವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿ.
7. ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಸ್ವತಃ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ನಡುವೆ ಸತತ ಪೂರಕ ನೆಲೆಗಳನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಬೇಕು.
ಪ್ರೈಮರ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್ ನಡುವೆ ಸತತ 4 ಬೇಸ್ ಕಾಂಪ್ಲಿಮೆಂಟರಿಟಿ ಇರುವಂತಿಲ್ಲ.ಪ್ರೈಮರ್ ಸ್ವತಃ ಪೂರಕ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಹೊಂದಿರಬಾರದು, ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೆ ಅದು ಹೇರ್‌ಪಿನ್ ರಚನೆಯನ್ನು ರೂಪಿಸಲು ಸ್ವತಃ ಮಡಚಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ, ಇದು ಪ್ರೈಮರ್ ಮತ್ತು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನ ಅನೆಲಿಂಗ್ ಸಂಯೋಜನೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.
ಅಪ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಮತ್ತು ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ನಡುವೆ ಪೂರಕ ಅನುಕ್ರಮಗಳು ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿರಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ.ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ನಡುವಿನ ಪೂರಕತೆಯು ಪ್ರೈಮರ್ ಡೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಪಿಸಿಆರ್ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ನಿಖರತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.ಪ್ರೈಮರ್-ಡೈಮರ್ ಮತ್ತು ಹೇರ್‌ಪಿನ್ ರಚನೆಗಳು ಅನಿವಾರ್ಯವಾಗಿದ್ದರೆ, △G ಮೌಲ್ಯವು ತುಂಬಾ ಹೆಚ್ಚಿರಬಾರದು (4.5 kcal/mol ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆಯಿರಬೇಕು).
8. ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಗುರಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ವರ್ಧಿಸುತ್ತದೆ.
qPCR ಪತ್ತೆಯ ಅಂತಿಮ ಗುರಿಯು ಗುರಿಯ ಜೀನ್‌ನ ಸಮೃದ್ಧಿಯನ್ನು ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳುವುದು.ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ವರ್ಧನೆಯು ಸಂಭವಿಸಿದಲ್ಲಿ, ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣವು ತಪ್ಪಾಗಿರುತ್ತದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಪ್ರೈಮರ್ಗಳನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಿದ ನಂತರ, ಅವುಗಳನ್ನು BLAST ಮೂಲಕ ಪರೀಕ್ಷಿಸಬೇಕಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಅನುಕ್ರಮ ಡೇಟಾಬೇಸ್ನಲ್ಲಿ ಹೋಲಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಮುಂದೆ, qPCR ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲು ನಾವು ಮಾನವ GAS6 (ಗ್ರೋತ್ ಅರೆಸ್ಟ್ ಸ್ಪೆಸಿಫಿಕ್ 6) ಜೀನ್ ಅನ್ನು ಉದಾಹರಣೆಯಾಗಿ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತೇವೆ.
01 ಪ್ರಶ್ನೆ ಜೀನ್
ಹೋಮೋ GAS6NCBI ಮೂಲಕ.ಇಲ್ಲಿ, ಜೀನ್ ಹೆಸರು ಮತ್ತು ಜಾತಿಗಳು ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುತ್ತವೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಅವುಗಳನ್ನು ಹೋಲಿಸಲು ನಾವು ಗಮನ ಹರಿಸಬೇಕು.
02 ಜೀನ್ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಿರಿ
(1) ಗುರಿ ಅನುಕ್ರಮವು ಜೀನೋಮಿಕ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಆಗಿದ್ದರೆ, ಮೊದಲನೆಯದನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿ, ಇದು ಜೀನ್‌ನ ಜೀನೋಮಿಕ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನುಕ್ರಮವಾಗಿದೆ.
(2) ಗುರಿಯ ಅನುಕ್ರಮವು mRNA ಆಗಿದ್ದರೆ, ಎರಡನೆಯದನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿ.ನಮೂದಿಸಿದ ನಂತರ, ಕೆಳಗಿನ ಕೋಷ್ಟಕದಲ್ಲಿ "CDS" ಕ್ಲಿಕ್ ಮಾಡಿ.ಕಂದು ಹಿನ್ನೆಲೆಯ ಅನುಕ್ರಮವು ಜೀನ್‌ನ ಕೋಡಿಂಗ್ ಅನುಕ್ರಮವಾಗಿದೆ.
03 ವಿನ್ಯಾಸ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು
ಪ್ರೈಮರ್-ಬ್ಲಾಸ್ಟ್ ಇಂಟರ್ಫೇಸ್ ಅನ್ನು ನಮೂದಿಸಿ
ಜೀನ್ ಅನುಕ್ರಮ ಸಂಖ್ಯೆ ಅಥವಾ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಫಾಸ್ಟಾ ಫಾರ್ಮ್ಯಾಟ್‌ನಲ್ಲಿ ಮೇಲಿನ ಎಡಭಾಗದಲ್ಲಿ ನಮೂದಿಸಿ ಮತ್ತು ಸಂಬಂಧಿತ ನಿಯತಾಂಕಗಳನ್ನು ಭರ್ತಿ ಮಾಡಿ.

"ಗೆಟ್ ಪ್ರೈಮರ್" ಅನ್ನು ಕ್ಲಿಕ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಅಂತಹ ಪ್ಯಾರಾಮೀಟರ್ ಆಯ್ಕೆಯನ್ನು ಇತರ ಸ್ಪ್ಲೈಸಿಂಗ್ ವೇರಿಯಂಟ್‌ಗಳಿಗೆ ವರ್ಧಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಿಮಗೆ ತಿಳಿಸಲು NCBI ಪಾಪ್ ಅಪ್ ಆಗುತ್ತದೆ.ನಾವು ವಿಭಿನ್ನ ಸ್ಪ್ಲೈಸಿಂಗ್ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಸೂಕ್ತವಾದ ಪ್ರೈಮರ್ ಜೋಡಿಯನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಅವುಗಳನ್ನು ಸಲ್ಲಿಸಬಹುದು (ಕೆಳಗಿನ ಚಿತ್ರದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ).ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ರನ್ ಆಗಲು ಹತ್ತಾರು ಸೆಕೆಂಡುಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಬಹುದು.
ಈ ಪ್ರೈಮರ್ ಜೋಡಿಗಳ ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವು ಸುಮಾರು 60 ° C ಆಗಿರುತ್ತದೆ.ಪ್ರಯೋಗದ ಉದ್ದೇಶದ ಪ್ರಕಾರ, ಪ್ರಯೋಗಕ್ಕಾಗಿ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ಮಧ್ಯಮ ಉದ್ದ, ಉತ್ತಮ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ಸ್ವಯಂ-ಪೂರಕತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿ, ಮತ್ತು ಯಶಸ್ಸಿನ ಪ್ರಮಾಣವು ಸಾಕಷ್ಟು ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ!
04 ಪ್ರೈಮರ್ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯ ಪರಿಶೀಲನೆ
ವಾಸ್ತವವಾಗಿ, ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸುವುದರ ಜೊತೆಗೆ, ಪ್ರೈಮರ್-ಬ್ಲಾಸ್ಟ್ ನಾವೇ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಿದ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಸಹ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಬಹುದು.ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸ ಪುಟಕ್ಕೆ ಹಿಂತಿರುಗಿ, ನಾವು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಿದ ಅಪ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಮತ್ತು ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ನಮೂದಿಸಿ ಮತ್ತು ಇತರ ನಿಯತಾಂಕಗಳನ್ನು ಸರಿಹೊಂದಿಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ.ಸಲ್ಲಿಸಿದ ನಂತರ, ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ಜೋಡಿಯು ಇತರ ಜೀನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿದೆಯೇ ಎಂದು ನೀವು ನೋಡಬಹುದು.ಇವೆಲ್ಲವನ್ನೂ ನಾವು ವರ್ಧಿಸಲು ಬಯಸುವ ಜೀನ್‌ನಲ್ಲಿ ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿದರೆ, ಈ ಜೋಡಿ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯು ಉತ್ತಮವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ!(ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಇದು ಪ್ರೈಮರ್ ಪ್ರಶ್ನೆಯ ಏಕೈಕ ಫಲಿತಾಂಶವಾಗಿದೆ!)

05 ಪ್ರೈಮರ್ ಗುಣಮಟ್ಟದ ತೀರ್ಪು
ಯಾವ ರೀತಿಯ ಪ್ರೈಮರ್ "ಪರ್ಫೆಕ್ಟ್" ಪ್ರೈಮರ್ ಆಗಿದೆ ಅದು "ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ವರೆಗೆ ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆ", "ವರ್ಧಿತ ಉತ್ಪನ್ನ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳು" ಮತ್ತು "ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು" ಸಂಯೋಜಿಸುತ್ತದೆ?
ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆ

ಕರಗುವ ವಕ್ರರೇಖೆ
ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆಯು 90% -110% ತಲುಪುತ್ತದೆ, ಅಂದರೆ ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆಯು ಉತ್ತಮವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಕರಗುವ ಕರ್ವ್ ಒಂದೇ ಗರಿಷ್ಠವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ Tm>80 ° C, ಅಂದರೆ ವರ್ಧನೆಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯು ಉತ್ತಮವಾಗಿದೆ.
 
ಸಂಬಂಧಿತ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು:
ರಿಯಲ್ ಟೈಮ್ PCR ಸುಲಭ-SYBR ಗ್ರೀನ್ I
ರಿಯಲ್ ಟೈಮ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಸುಲಭ-ತಕ್ಮನ್