ಪ್ರಯೋಗ ಸಿಬ್ಬಂದಿಯ ನಡವಳಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು PCR ಪ್ರಯೋಗ SOP ಅನ್ನು ಸ್ಥಾಪಿಸಿ.
ಪ್ರಯೋಗಕಾರರು ಕಾರ್ಯಾಚರಣಾ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಕಟ್ಟುನಿಟ್ಟಾಗಿ ಪಾಲಿಸುತ್ತಾರೆ ಮತ್ತು ಮಾನವ ಅಂಶಗಳಿಂದ ಉಂಟಾಗಬಹುದಾದ PCR ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತಾರೆ ಅಥವಾ ಮಾಲಿನ್ಯದ ಸಂಭವವನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತಾರೆ.ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ಪ್ರಯೋಗಕಾರರು ಅನುಗುಣವಾದ ವೃತ್ತಿಪರ ಜ್ಞಾನ ಮತ್ತು ಕೌಶಲ್ಯಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರಬೇಕು, ಸಂಬಂಧಿತ ಸಾಧನಗಳನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವಲ್ಲಿ ಪ್ರಾವೀಣ್ಯತೆ, ಸಂಪೂರ್ಣ ಕೆಲಸದ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟಪಡಿಸುವುದು, ಮಾಲಿನ್ಯದ ಚಿಕಿತ್ಸಾ ವಿಧಾನಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಮಾಸ್ಟರಿಂಗ್ ಮಾಡುವುದು ಮತ್ತು ಪರೀಕ್ಷಾ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಸರಿಯಾಗಿ ಅರ್ಥೈಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುತ್ತದೆ.
ಪ್ರಮಾಣಿತ PCR ಪ್ರಯೋಗಾಲಯವನ್ನು ಸ್ಥಾಪಿಸಿ.
PCR ಪ್ರಯೋಗಾಲಯವನ್ನು ತಾತ್ವಿಕವಾಗಿ ನಾಲ್ಕು ಕ್ಷೇತ್ರಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ, ಅವುಗಳೆಂದರೆ ಕಾರಕ ತಯಾರಿ ಪ್ರದೇಶ, ಮಾದರಿ ಸಂಸ್ಕರಣಾ ಪ್ರದೇಶ, ವರ್ಧನೆ ಪ್ರದೇಶ ಮತ್ತು ವರ್ಧನೆ ಉತ್ಪನ್ನ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಪ್ರದೇಶ.ಮೊದಲ ಎರಡು ಪ್ರದೇಶಗಳು ಪೂರ್ವ ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರದೇಶಗಳಾಗಿವೆ, ಮತ್ತು ಕೊನೆಯ ಎರಡು ಪ್ರದೇಶಗಳು ನಂತರದ ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರದೇಶಗಳಾಗಿವೆ.ಪೂರ್ವ ವರ್ಧನೆಯ ವಲಯ ಮತ್ತು ನಂತರದ ವರ್ಧನೆಯ ವಲಯವನ್ನು ಕಟ್ಟುನಿಟ್ಟಾಗಿ ಬೇರ್ಪಡಿಸಬೇಕು.ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ವಸ್ತುಗಳು, ಕಾರಕಗಳು, ರೆಕಾರ್ಡಿಂಗ್ ಪೇಪರ್, ಪೆನ್ನುಗಳು, ಶುಚಿಗೊಳಿಸುವ ವಸ್ತುಗಳು, ಇತ್ಯಾದಿ, ಪೂರ್ವ ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರದೇಶದಿಂದ ನಂತರದ ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರದೇಶಕ್ಕೆ ಮಾತ್ರ ಹರಿಯಬಹುದು, ಅಂದರೆ, ಕಾರಕ ತಯಾರಿಕೆಯ ಪ್ರದೇಶದಿಂದ → ಮಾದರಿ ಸಂಸ್ಕರಣಾ ಪ್ರದೇಶದಿಂದ → ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರದೇಶ → ವರ್ಧನೆಯ ಉತ್ಪನ್ನ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಪ್ರದೇಶ, ಮತ್ತು ಹಿಂದಕ್ಕೆ ಹರಿಯಬಾರದು .ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದಲ್ಲಿನ ಗಾಳಿಯ ಹರಿವು ಪೂರ್ವ ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರದೇಶದಿಂದ ನಂತರದ ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರದೇಶಕ್ಕೆ ಹರಿಯಬೇಕು ಮತ್ತು ಹಿಂದಕ್ಕೆ ಹರಿಯಬಾರದು.ಆದರ್ಶ PCR ಪ್ರಯೋಗಾಲಯ ವಿನ್ಯಾಸವನ್ನು ಕೆಳಗೆ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ:
ಚಿತ್ರ ಎ: ಬಫರ್ ಕೋಣೆಯಲ್ಲಿ ಋಣಾತ್ಮಕ ಒತ್ತಡದೊಂದಿಗೆ ಐಡಿಯಲ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಲ್ಯಾಬೋರೇಟರಿ ಸೆಟಪ್ ಮೋಡ್
ಚಿತ್ರ B: ಬಫರ್ ಕೋಣೆಯಲ್ಲಿ ಧನಾತ್ಮಕ ಒತ್ತಡದೊಂದಿಗೆ ಆದರ್ಶ PCR ಪ್ರಯೋಗಾಲಯ ಸೆಟಪ್ ಮೋಡ್
ಚಿತ್ರ A ಮತ್ತು ಚಿತ್ರ B ಯಲ್ಲಿ ನೀಡಲಾದ PCR ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ಸೆಟಪ್ ರೇಖಾಚಿತ್ರಗಳು ಹೆಚ್ಚು ಸೂಕ್ತವಾದ ಸೆಟಪ್ ಮೋಡ್ ಆಗಿರಬೇಕು ಮತ್ತು ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳೊಂದಿಗೆ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯವು ವಿನ್ಯಾಸಕ್ಕಾಗಿ ಈ ಮೋಡ್ ಅನ್ನು ಉಲ್ಲೇಖಿಸಬಹುದು.ಸಾಮಾನ್ಯ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳಿಗೆ, ಪಿಸಿಆರ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಪ್ರದೇಶ ಮತ್ತು ಉತ್ಪನ್ನ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಪ್ರದೇಶವನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಮಾದರಿ ತಯಾರಿಕೆಯ ಪ್ರದೇಶ ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿ ಕವರ್ ತೆರೆಯುವಿಕೆಯನ್ನು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬೇಕು.ನೆನಪಿಡಿ: ಉತ್ಪನ್ನ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿನ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಸರಬರಾಜುಗಳನ್ನು ಮಾದರಿ ತಯಾರಿಕೆಯ ಪ್ರದೇಶ ಮತ್ತು PCR ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರದೇಶಕ್ಕೆ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುವುದನ್ನು ಕಟ್ಟುನಿಟ್ಟಾಗಿ ನಿಷೇಧಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಪ್ರಯೋಗಾಲಯವು ಪಿಸಿಆರ್ ಪತ್ತೆ ಮತ್ತು ಗುರುತಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಮಾತ್ರ ನಿರ್ವಹಿಸಿದರೆ, ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಪಿಸಿಆರ್ ಬದಲಿಗೆ ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಪಿಸಿಆರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.
ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ಪತ್ತೆ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಂಕೇತಗಳ ಮೂಲಕ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಬಹುದು, ಆದ್ದರಿಂದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ನಂತರ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್‌ಗಾಗಿ ಮುಚ್ಚಳವನ್ನು ತೆರೆಯುವ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲ, ಇದು ಏರೋಸಾಲ್‌ಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸಲು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಸೋರಿಕೆಯಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ PCR ಉತ್ಪನ್ನದ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸುತ್ತದೆ.ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ನ ಲೋಡಿಂಗ್ ಹಂತದಲ್ಲಿ ನೀವು ಕ್ಯಾಪ್ ತೆರೆಯುವಿಕೆಯ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿದರೆ, ಏರೋಸಾಲ್ ಮಾಲಿನ್ಯವು ಸಂಭವಿಸುವ ಸಾಧ್ಯತೆಯಿದೆ.ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ನ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ಅನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸಲು ಮತ್ತು ಗುಣಾತ್ಮಕ PCR ಅನ್ನು ಕ್ರಮೇಣ ಬದಲಿಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.
ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಾಗಿ ಯುಎನ್‌ಜಿ ವಿರೋಧಿ ಪಿಸಿಆರ್ ಉತ್ಪನ್ನ ಮಾಲಿನ್ಯ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಸಿಸ್ಟಮ್ dTTP ಬದಲಿಗೆ dUTP ಅನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ.PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ನಂತರ, ಎಲ್ಲಾ PCR ಉತ್ಪನ್ನಗಳು (DNA ತುಣುಕುಗಳು) dUTP ಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿವೆ;PCR ಕ್ರಿಯೆಯ ಮುಂದಿನ ಸುತ್ತಿನಲ್ಲಿ, ಸಿಸ್ಟಮ್‌ಗೆ ಸೇರಿಸಲಾದ UNG ಕಿಣ್ವವನ್ನು PCR ಗಿಂತ 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 37 ° C ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ dUTP ಹೊಂದಿರುವ ಎಲ್ಲಾ DNA ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಕೆಡಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ನಂತರ PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಮಾಡಬಹುದು.ಇದು ಪಿಸಿಆರ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಏರೋಸಾಲ್ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು.ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಕೆಳಗಿನ ಚಿತ್ರದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ:
ಗಮನಿಸಿ: ನೇರ PCR ಸರಣಿಗಾಗಿ, ನೀವು Foregene ನ PCR ವಿರೋಧಿ ಉತ್ಪನ್ನ ಮಾಲಿನ್ಯ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಸರಣಿ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಬಹುದುಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ
ದೊಡ್ಡ ಪ್ರಮಾಣದ ಜೀನೋಟೈಪಿಂಗ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸುವ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳಿಗೆ, ಸಮಂಜಸವಾದ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳ ನಿರ್ಮಾಣದ ಜೊತೆಗೆ ಕಾರಕಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ಯುಎನ್‌ಜಿ ವಿರೋಧಿ ಪಿಸಿಆರ್ ಉತ್ಪನ್ನ ಮಾಲಿನ್ಯ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸಲು ಬಲವಾಗಿ ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.
ಜ್ಞಾಪನೆ: ಈ ಸಿಸ್ಟಂನ ಬಳಕೆಯು ಈಗಾಗಲೇ ಉಂಟಾಗಿರುವ PCR ಉತ್ಪನ್ನದ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಯುಎನ್‌ಜಿ ಸಿಸ್ಟಮ್ ಅನ್ನು ಸಂಬಂಧಿತ ಪರೀಕ್ಷೆಯ ಆರಂಭದಲ್ಲಿ ಬಳಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತಡೆಗಟ್ಟಲು ಯುಎನ್‌ಜಿ ಸಿಸ್ಟಮ್ ಅನ್ನು ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಗಾಗಿ ಬಳಸಬೇಕು.
ದೊಡ್ಡ ಪ್ರಮಾಣದ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸುವಾಗ ಫೋರ್ಜೀನ್‌ನ ನೇರ PCR-UNG ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ:
ಪ್ಲಾಂಟ್ ಲೀಫ್ ಡೈರೆಕ್ಟ್ PCR ಕಿಟ್-UNG
ಸಸ್ಯ ಬೀಜ ನೇರ PCR ಕಿಟ್-UNG
ಅನಿಮಲ್ ಟಿಶ್ಯೂ ಡೈರೆಕ್ಟ್ PCR ಕಿಟ್-UNG
ಮೌಸ್ ಟೈಲ್ ಡೈರೆಕ್ಟ್ PCR ಕಿಟ್-UNG
ಜೀಬ್ರಾ ಫಿಶ್ ಡೈರೆಕ್ಟ್ PCR ಕಿಟ್-UNG.
Foregene ನಿಂದ ಕಿಟ್‌ಗಳ ಈ ಸರಣಿಪಿಸಿಆರ್ ಪತ್ತೆಯನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಮತ್ತು ದೊಡ್ಡ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ನಿರ್ವಹಿಸುವುದು ಮಾತ್ರವಲ್ಲದೆ, ಪಿಸಿಆರ್ ಉತ್ಪನ್ನದ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ತಡೆಯುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ.
ಪೋಸ್ಟ್ ಸಮಯ: ಮಾರ್ಚ್-19-2021
