ಆಣ್ವಿಕ ರೋಗನಿರ್ಣಯ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವು ಮಾನವ ದೇಹ ಮತ್ತು ವಿವಿಧ ರೋಗಕಾರಕಗಳ ಆನುವಂಶಿಕ ವಸ್ತುಗಳ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮತ್ತು ರಚನೆಯನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಆಣ್ವಿಕ ಜೀವಶಾಸ್ತ್ರದ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ರೋಗಗಳನ್ನು ಊಹಿಸುವ ಮತ್ತು ರೋಗನಿರ್ಣಯ ಮಾಡುವ ಉದ್ದೇಶವನ್ನು ಸಾಧಿಸುತ್ತದೆ.

ಇತ್ತೀಚಿನ ವರ್ಷಗಳಲ್ಲಿ, ಆಣ್ವಿಕ ರೋಗನಿರ್ಣಯದ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದ ನವೀಕರಣ ಮತ್ತು ಪುನರಾವರ್ತನೆಯೊಂದಿಗೆ, ಆಣ್ವಿಕ ರೋಗನಿರ್ಣಯದ ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ಹೆಚ್ಚು ಹೆಚ್ಚು ವಿಸ್ತಾರವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಆಳವಾಗಿ ಮಾರ್ಪಟ್ಟಿದೆ ಮತ್ತು ಆಣ್ವಿಕ ರೋಗನಿರ್ಣಯದ ಮಾರುಕಟ್ಟೆಯು ತ್ವರಿತ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯ ಅವಧಿಯನ್ನು ಪ್ರವೇಶಿಸಿದೆ.

ಲೇಖಕರು ಮಾರುಕಟ್ಟೆಯಲ್ಲಿನ ಸಾಮಾನ್ಯ ಆಣ್ವಿಕ ರೋಗನಿರ್ಣಯದ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳನ್ನು ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತಗೊಳಿಸುತ್ತಾರೆ ಮತ್ತು ಮೂರು ಭಾಗಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ: ಮೊದಲ ಭಾಗವು ಪಿಸಿಆರ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸುತ್ತದೆ, ಎರಡನೇ ಭಾಗವು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಐಸೊಥರ್ಮಲ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಎರಡನೇ ಭಾಗವು ಅನುಕ್ರಮ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸುತ್ತದೆ.

01

ಭಾಗ I: PCR ತಂತ್ರಜ್ಞಾನ

ಪಿಸಿಆರ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನ

ಪಿಸಿಆರ್ (ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಚೈನ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್) ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಡಿಎನ್‌ಎ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾಗಿದೆ, ಇದು 30 ವರ್ಷಗಳಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಇತಿಹಾಸವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.

ಪಿಸಿಆರ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು 1983 ರಲ್ಲಿ ಯುಎಸ್ಎಯ ಸೆಟಸ್‌ನ ಕ್ಯಾರಿ ಮುಲ್ಲಿಸ್ ಅವರು ಪ್ರವರ್ತಿಸಿದರು.ಮುಲ್ಲಿಸ್ 1985 ರಲ್ಲಿ PCR ಪೇಟೆಂಟ್‌ಗಾಗಿ ಅರ್ಜಿ ಸಲ್ಲಿಸಿದರು ಮತ್ತು ಅದೇ ವರ್ಷದಲ್ಲಿ ವಿಜ್ಞಾನದ ಮೊದಲ PCR ಶೈಕ್ಷಣಿಕ ಪ್ರಬಂಧವನ್ನು ಪ್ರಕಟಿಸಿದರು.ಮುಲ್ಲಿಸ್ 1993 ರಲ್ಲಿ ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರದಲ್ಲಿ ನೊಬೆಲ್ ಪ್ರಶಸ್ತಿಯನ್ನು ಗೆದ್ದರು.

PCR ನ ಮೂಲ ತತ್ವಗಳು

PCR ಗುರಿಯ DNA ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಒಂದು ಮಿಲಿಯನ್‌ಗಿಂತಲೂ ಹೆಚ್ಚು ಬಾರಿ ವರ್ಧಿಸುತ್ತದೆ.ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ವೇಗವರ್ಧನೆಯ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ, ಮೂಲ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನಂತೆ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರೈಮರ್ ಅನ್ನು ವಿಸ್ತರಣೆಗೆ ಆರಂಭಿಕ ಹಂತವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಎಂಬುದು ತತ್ವ.ಡಿನಾಟರೇಶನ್, ಅನೆಲಿಂಗ್ ಮತ್ತು ವಿಸ್ತರಣೆಯಂತಹ ಹಂತಗಳ ಮೂಲಕ ಇದನ್ನು ವಿಟ್ರೋದಲ್ಲಿ ಪುನರಾವರ್ತಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಮಗಳು ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ಪೋಷಕ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಡಿಎನ್‌ಎಗೆ ಪೂರಕವಾಗಿದೆ.

ಪ್ರಮಾಣಿತ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಮೂರು ಹಂತಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ:

1. ಡಿನಾಟರೇಶನ್: ಡಿಎನ್ಎ ಡಬಲ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಬಳಸಿ.DNA ಡಬಲ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್‌ಗಳ ನಡುವಿನ ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಬಂಧಗಳು ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ (93-98 ° C) ಒಡೆಯುತ್ತವೆ.

2. ಅನೆಲಿಂಗ್: ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಬೇರ್ಪಡಿಸಿದ ನಂತರ, ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಇದರಿಂದ ಪ್ರೈಮರ್ ಏಕ-ಎಳೆಯ ಡಿಎನ್‌ಎಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ.

3. ವಿಸ್ತರಣೆ: ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಎಳೆಗಳ ಉದ್ದಕ್ಕೂ ಪೂರಕ ಎಳೆಗಳನ್ನು ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲು ಪ್ರಾರಂಭಿಸುತ್ತದೆ, ತಾಪಮಾನವು ಕಡಿಮೆಯಾದಾಗ ಬಂಧಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳಿಂದ.ವಿಸ್ತರಣೆಯು ಪೂರ್ಣಗೊಂಡಾಗ, ಒಂದು ಚಕ್ರವು ಪೂರ್ಣಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು DNA ತುಣುಕುಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯು ದ್ವಿಗುಣಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.

ಈ ಮೂರು ಹಂತಗಳನ್ನು 25-35 ಬಾರಿ ಪುನರಾವರ್ತಿಸಿದರೆ, ಡಿಎನ್ಎ ತುಣುಕುಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯು ಘಾತೀಯವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ.

ಪಿಸಿಆರ್‌ನ ಜಾಣ್ಮೆಯೆಂದರೆ, ವಿಭಿನ್ನ ಗುರಿ ಜೀನ್‌ಗಳಿಗಾಗಿ ವಿಭಿನ್ನ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಬಹುದು, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಗುರಿ ಜೀನ್ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಅವಧಿಯಲ್ಲಿ ವರ್ಧಿಸಬಹುದು.

ಇಲ್ಲಿಯವರೆಗೆ, PCR ಅನ್ನು ಮೂರು ವರ್ಗಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಬಹುದು, ಅವುಗಳೆಂದರೆ ಸಾಮಾನ್ಯ PCR, ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ಮತ್ತು ಡಿಜಿಟಲ್ PCR.

ಮೊದಲ ತಲೆಮಾರಿನ ಸಾಮಾನ್ಯ PCR

ಗುರಿ ಜೀನ್ ಅನ್ನು ವರ್ಧಿಸಲು ಸಾಮಾನ್ಯ PCR ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಉಪಕರಣವನ್ನು ಬಳಸಿ, ತದನಂತರ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಅಗರೋಸ್ ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿ, ಗುಣಾತ್ಮಕ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಮಾತ್ರ ಮಾಡಬಹುದು.

ಮೊದಲ ತಲೆಮಾರಿನ PCR ನ ಮುಖ್ಯ ಅನಾನುಕೂಲಗಳು:

-ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ವರ್ಧನೆ ಮತ್ತು ತಪ್ಪು ಧನಾತ್ಮಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳಿಗೆ ಗುರಿಯಾಗುತ್ತದೆ.

- ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವಿಕೆ ಬಹಳ ಸಮಯ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯು ತೊಡಕಾಗಿರುತ್ತದೆ.

- ಗುಣಾತ್ಮಕ ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ಮಾತ್ರ ಮಾಡಬಹುದು.

ಎರಡನೇ ತಲೆಮಾರಿನ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR

ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಪಿಸಿಆರ್ (ರಿಯಲ್-ಟೈಮ್ ಪಿಸಿಆರ್), qPCR ಎಂದೂ ಕರೆಯಲ್ಪಡುತ್ತದೆ, ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಿಗ್ನಲ್‌ಗಳ ಸಂಗ್ರಹಣೆಯ ಮೂಲಕ ವರ್ಧಿತ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಶೇಖರಣೆಯನ್ನು ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡಲು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಶೋಧಕಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಪ್ರಗತಿಯನ್ನು ಸೂಚಿಸಲು ಮತ್ತು ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

qPCR ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಮುಚ್ಚಿದ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ ನಡೆಸುವುದರಿಂದ, ಮಾಲಿನ್ಯದ ಸಂಭವನೀಯತೆ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಪತ್ತೆಗಾಗಿ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಂಕೇತವನ್ನು ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡಬಹುದು, ಆದ್ದರಿಂದ ಇದು ವೈದ್ಯಕೀಯ ಅಭ್ಯಾಸದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲ್ಪಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು PCR ನಲ್ಲಿ ಪ್ರಬಲ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವಾಗಿದೆ.

ನೈಜ-ಸಮಯದ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ನಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪದಾರ್ಥಗಳನ್ನು ಹೀಗೆ ವಿಂಗಡಿಸಬಹುದು: TaqMan ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಶೋಧಕಗಳು, ಆಣ್ವಿಕ ಬೀಕನ್ಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಬಣ್ಣಗಳು.

1) TaqMan ಪ್ರತಿದೀಪಕ ತನಿಖೆ:

ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಒಂದು ಜೋಡಿ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವಾಗ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ತನಿಖೆಯನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ತನಿಖೆಯು ಆಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್ ಆಗಿದೆ, ಮತ್ತು ಎರಡು ತುದಿಗಳನ್ನು ಕ್ರಮವಾಗಿ ವರದಿಗಾರ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಗುಂಪು ಮತ್ತು ಕ್ವೆಂಚರ್ ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಗುಂಪಿನೊಂದಿಗೆ ಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.

ತನಿಖೆಯು ಹಾಗೇ ಇದ್ದಾಗ, ವರದಿಗಾರ ಗುಂಪಿನಿಂದ ಹೊರಸೂಸಲ್ಪಟ್ಟ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಂಕೇತವನ್ನು ತಣಿಸುವ ಗುಂಪಿನಿಂದ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ;ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಟಕ್ ಕಿಣ್ವದ 5′-3′ ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯು ತನಿಖೆಯನ್ನು ಸೀಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕ್ಷೀಣಿಸುತ್ತದೆ, ವರದಿಗಾರನ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಗುಂಪು ಮತ್ತು ಕ್ವೆಂಚರ್ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಗುಂಪನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಮಾನಿಟರಿಂಗ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಂಕೇತವನ್ನು ಪಡೆಯಬಹುದು, ಅಂದರೆ, ಪ್ರತಿ ಬಾರಿಯೂ ಡಿಎನ್‌ಎ ಒಂದು ಫ್ಲೋರೆಸೆಂಟ್ ಸ್ಟ್ರಾಪ್ಲೇಸ್ ಆಗಿರುತ್ತದೆ. ಪಿಸಿಆರ್ ಉತ್ಪನ್ನದ ರಚನೆಯೊಂದಿಗೆ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಸಿಗ್ನಲ್ ಅನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಸಿಂಕ್ರೊನೈಸ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.

2) SYBR ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಡೈಗಳು:

PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ, SYBR ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.SYBR ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಡೈ ಅನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ DNA ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್‌ಗೆ ಸೇರಿಸಿಕೊಳ್ಳದ ನಂತರ, ಅದು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಂಕೇತವನ್ನು ಹೊರಸೂಸುತ್ತದೆ.ಸರಪಳಿಯಲ್ಲಿ ಅಳವಡಿಸದ SYBR ಡೈ ಅಣುವು ಯಾವುದೇ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಂಕೇತವನ್ನು ಹೊರಸೂಸುವುದಿಲ್ಲ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಂಕೇತವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸುತ್ತದೆ PCR ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಹೆಚ್ಚಳವು PCR ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಹೆಚ್ಚಳದೊಂದಿಗೆ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಸಿಂಕ್ರೊನೈಸ್ ಆಗಿದೆ.SYBR ಕೇವಲ ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ DNA ಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿದೆಯೇ ಎಂಬುದನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಕರಗುವ ಕರ್ವ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು.

3) ಆಣ್ವಿಕ ಬೀಕನ್ಗಳು

ಇದು 5 ಮತ್ತು 3 ತುದಿಗಳಲ್ಲಿ ಸುಮಾರು 8 ಬೇಸ್‌ಗಳ ಹೇರ್‌ಪಿನ್ ರಚನೆಯನ್ನು ರೂಪಿಸುವ ಸ್ಟೆಮ್-ಲೂಪ್ ಡಬಲ್-ಲೇಬಲ್ ಆಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ಪ್ರೋಬ್ ಆಗಿದೆ.ಎರಡೂ ತುದಿಗಳಲ್ಲಿ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಅನುಕ್ರಮಗಳು ಪೂರಕವಾಗಿ ಜೋಡಿಯಾಗಿರುತ್ತವೆ, ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಗುಂಪು ಮತ್ತು ಕ್ವೆನ್ಚಿಂಗ್ ಗುಂಪು ಬಿಗಿಯಾಗುವಂತೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ಮುಚ್ಚಿ, ಇದು ಪ್ರತಿದೀಪಕವನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುವುದಿಲ್ಲ.

PCR ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಿದ ನಂತರ, ಅನೆಲಿಂಗ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ, ಆಣ್ವಿಕ ದೀಪದ ಮಧ್ಯ ಭಾಗವು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ DNA ಅನುಕ್ರಮದೊಂದಿಗೆ ಜೋಡಿಸಲ್ಪಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಜೀನ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ವಂಶವಾಹಿಯಿಂದ ಕ್ವೆಂಚರ್ ಜೀನ್‌ನಿಂದ ಬೇರ್ಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಎರಡನೇ ತಲೆಮಾರಿನ PCR ನ ಮುಖ್ಯ ಅನಾನುಕೂಲಗಳು:

ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯು ಇನ್ನೂ ಕೊರತೆಯಿದೆ, ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ-ನಕಲು ಮಾದರಿಗಳ ಪತ್ತೆಯು ನಿಖರವಾಗಿಲ್ಲ.

ಹಿನ್ನೆಲೆ ಮೌಲ್ಯದ ಪ್ರಭಾವವಿದೆ, ಮತ್ತು ಫಲಿತಾಂಶವು ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪಕ್ಕೆ ಒಳಗಾಗುತ್ತದೆ.

ಮೂರನೇ ತಲೆಮಾರಿನ ಡಿಜಿಟಲ್ PCR

ಡಿಜಿಟಲ್ ಪಿಸಿಆರ್ (ಡಿಜಿಟಲ್ ಪಿಸಿಆರ್, ಡಿಪಿಸಿಆರ್, ಡಿಗ್-ಪಿಸಿಆರ್) ಎಂಡ್-ಪಾಯಿಂಟ್ ಡಿಟೆಕ್ಷನ್ ಮೂಲಕ ಗುರಿಯ ಅನುಕ್ರಮದ ನಕಲು ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆಂತರಿಕ ನಿಯಂತ್ರಣಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಕ್ರಾಕೃತಿಗಳನ್ನು ಬಳಸದೆ ನಿಖರವಾದ ಸಂಪೂರ್ಣ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಪತ್ತೆಯನ್ನು ಮಾಡಬಹುದು.

ಡಿಜಿಟಲ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಎಂಡ್‌ಪಾಯಿಂಟ್ ಡಿಟೆಕ್ಷನ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು Ct ಮೌಲ್ಯವನ್ನು (ಸೈಕಲ್ ಥ್ರೆಶೋಲ್ಡ್) ಅವಲಂಬಿಸಿಲ್ಲ, ಆದ್ದರಿಂದ ಡಿಜಿಟಲ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯು ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆಯಿಂದ ಕಡಿಮೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳಿಗೆ ಸಹಿಷ್ಣುತೆ ಉತ್ತಮವಾಗಿದೆ, ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿಖರತೆ ಮತ್ತು ಪುನರುತ್ಪಾದನೆಯೊಂದಿಗೆ.

ಹೆಚ್ಚಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿಖರತೆಯ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳಿಂದಾಗಿ, ಇದು ಪಿಸಿಆರ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್‌ಗಳಿಂದ ಸುಲಭವಾಗಿ ಮಧ್ಯಪ್ರವೇಶಿಸುವುದಿಲ್ಲ, ಮತ್ತು ಇದು ಪ್ರಮಾಣಿತ ಉತ್ಪನ್ನಗಳಿಲ್ಲದೆ ನಿಜವಾದ ಸಂಪೂರ್ಣ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಸಾಧಿಸಬಹುದು, ಇದು ಸಂಶೋಧನೆ ಮತ್ತು ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ಹಾಟ್‌ಸ್ಪಾಟ್ ಆಗಿ ಮಾರ್ಪಟ್ಟಿದೆ.

ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಘಟಕದ ವಿವಿಧ ರೂಪಗಳ ಪ್ರಕಾರ, ಇದನ್ನು ಮೂರು ವಿಧಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಬಹುದು: ಮೈಕ್ರೋಫ್ಲೂಯಿಡಿಕ್, ಚಿಪ್ ಮತ್ತು ಡ್ರಾಪ್ಲೆಟ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ಸ್.