ಮುನ್ನಡೆ

ಲಾಂಗ್ ಕೋಡಿಂಗ್ ಅಲ್ಲದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ, ಎಲ್‌ಎನ್‌ಸಿಆರ್‌ಎನ್‌ಎ 200 ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಉದ್ದವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಕೋಡಿಂಗ್ ಅಲ್ಲದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಆಗಿದೆ, ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 200-100000 ಎನ್‌ಟಿ ನಡುವೆ.lncRNA ಎಪಿಜೆನೆಟಿಕ್, ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಮತ್ತು ನಂತರದ ಪ್ರತಿಲೇಖನದ ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು X ಕ್ರೋಮೋಸೋಮ್ ಸೈಲೆನ್ಸಿಂಗ್, ಜೀನೋಮ್ ಇಂಪ್ರಿಂಟಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಕ್ರೊಮಾಟಿನ್ ಮಾರ್ಪಾಡು, ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆ, ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪ, ಪರಮಾಣು ಸಾಗಣೆ, ಕೋಶ ಚಕ್ರ ನಿಯಂತ್ರಣ, ಕೋಶ ವ್ಯತ್ಯಾಸದ ನಿಯಂತ್ರಣಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಪ್ರಮುಖ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳು ಮಾನವ ರೋಗಗಳ ಅಭಿವೃದ್ಧಿ ಮತ್ತು ತಡೆಗಟ್ಟುವಿಕೆ, ಮತ್ತು ಪ್ರಸ್ತುತ ಬಯೋಮೆಡಿಸಿನ್ ಕ್ಷೇತ್ರದಲ್ಲಿ ಹಾಟ್ ಸ್ಪಾಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾಗಿದೆ.

01  LncRNA ಯ ವಿಧಗಳು ಮತ್ತು ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳು

ಮೇಲಿನ ಚಿತ್ರದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ ಅದರ ರಚನೆಯ ವಿವಿಧ ಮೂಲಗಳ ಪ್ರಕಾರ lncRNA ಅನ್ನು ಹಲವು ವಿಧಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ.ಕೆಳಗಿನ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ:

1. ಎಲ್‌ಎನ್‌ಸಿಆರ್‌ಎನ್‌ಎಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಉದ್ದವಾಗಿರುತ್ತವೆ, ಡೈನಾಮಿಕ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮತ್ತು ವಿಭಿನ್ನತೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ವಿಭಿನ್ನ ವಿಭಜಿಸುವ ವಿಧಾನಗಳು
2. ಕೋಡಿಂಗ್ ಜೀನ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, lncRNA ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ
3. ಹೆಚ್ಚಿನ lncRNA ಗಳು ಅಂಗಾಂಶದ ವ್ಯತ್ಯಾಸ ಮತ್ತು ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಸ್ಪಷ್ಟವಾದ ತಾತ್ಕಾಲಿಕ ಮತ್ತು ಪ್ರಾದೇಶಿಕ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ
4. ಗೆಡ್ಡೆಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಕಾಯಿಲೆಗಳಲ್ಲಿ ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಗಳಿವೆ
5. lncRNA ಯ ಉಪಕೋಶೀಯ ಸ್ಥಳಗಳು ವೈವಿಧ್ಯಮಯವಾಗಿವೆ
6. ಸಂರಕ್ಷಣೆಯಲ್ಲಿ ಅನುಕ್ರಮವು ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ, ಆದರೆ ಕಾರ್ಯವು ಒಂದು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಮಟ್ಟದ ಸಂರಕ್ಷಣೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಇತ್ಯಾದಿ.

02 LncRNA ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಬಗ್ಗೆ ಪದೇ ಪದೇ ಕೇಳಲಾಗುವ ಪ್ರಶ್ನೆಗಳು

ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಎಲ್‌ಎನ್‌ಸಿಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯ ಕಡಿಮೆ ಅಂಶ, ಉದ್ದದ ಉದ್ದ ಮತ್ತು ಉನ್ನತ-ಮಟ್ಟದ ರಚನೆಯಿಂದಾಗಿ, ಅಂತಹ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಕಾಂಡದ ಕುಣಿಕೆಗಳು ಅಥವಾ ಹೇರ್‌ಪಿನ್‌ಗಳಂತಹ ಸಂಕೀರ್ಣ ರಚನೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆರ್‌ಟಿ-ಕ್ಯೂಪಿಸಿಆರ್ ವಿಫಲವಾದ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಅಥವಾ ಕಡಿಮೆ ದಕ್ಷತೆಯ ಸಮಸ್ಯೆಗಳಿಗೆ ಗುರಿಯಾಗುತ್ತದೆ.

03 LncRNA ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಪರಿಹಾರ

ಕೇಂದ್ರ ನಿಯಮದಲ್ಲಿ, ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ವೈರಸ್‌ಗಳು ತಮ್ಮದೇ ಆದ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನ್ನು ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲು ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.ವಿಟ್ರೊದಲ್ಲಿ cDNA ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲು ಆರ್ಎನ್ಎ ವೈರಸ್ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುವ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಸಿಸ್ಟಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಮುಖ್ಯ ಅಂಶಗಳು: ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್, ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್, ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಘಟಕಗಳು.

1.RNA ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್

ರಿವರ್ಸ್ ಪ್ರತಿಲೇಖನದ ಮೇಲೆ RNA ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನ ಪ್ರಭಾವವು ಅದರ ರಚನೆ, ಶುದ್ಧತೆ ಮತ್ತು ಸಮಗ್ರತೆಯಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿಫಲಿಸುತ್ತದೆ.ಹೊರತೆಗೆಯಲಾದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯ ಹೆಚ್ಚಿನ ಶುದ್ಧತೆ ಮತ್ತು ಸಮಗ್ರತೆ, ಹಿಮ್ಮುಖ ಪ್ರತಿಲೇಖನದ ಹೆಚ್ಚಿನ ದಕ್ಷತೆ ಮತ್ತು ನಂತರದ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಹೆಚ್ಚು ನಿಖರವಾಗಿರುತ್ತದೆ.ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಕಾರಕಗಳಿಂದ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್ ಮತ್ತು ಗ್ವಾನಿಡಿನ್ ಲವಣಗಳ ಶೇಷಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ಹೆಚ್ಚಿನ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಬಲವಾದ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ.

2.ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್

ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ ಸಂಪೂರ್ಣ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಸಿಸ್ಟಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಪ್ರಮುಖ ಪ್ರಭಾವವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್‌ಗೆ ಸೂಕ್ತವಾದ ತಾಪಮಾನವು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 42 ° C ಆಗಿದೆ.ವಾಸ್ತವವಾಗಿ, ಉನ್ನತ ಮಟ್ಟದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ರಚನೆಯ ತೆರೆಯುವಿಕೆಗೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನದ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್‌ಗೆ ಅಗತ್ಯತೆಗಳು ಹೆಚ್ಚಿರುತ್ತವೆ.

3.ಪ್ರೈಮರ್

ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಜೀನ್-ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು, ಯಾದೃಚ್ಛಿಕ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಒಲಿಗೊ ಡಿಟಿ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿವೆ.ಹೆಚ್ಚಿನ ಎಲ್‌ಎನ್‌ಸಿಆರ್‌ಎನ್‌ಎಗಳು ಪಾಲಿಎ ಟೈಲ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಒಲಿಗೊ ಡಿಟಿಯೊಂದಿಗೆ ಯಾದೃಚ್ಛಿಕ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಸರಿಯಾಗಿ ಹೊಂದಿಸುವುದು ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ.

4.ಇತರ ಘಟಕಗಳು

ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಅವನತಿಗೆ ಸುಲಭವಾಗಿದೆ ಎಂಬ ಅಂಶದ ದೃಷ್ಟಿಯಿಂದ, ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಸಿಸ್ಟಮ್‌ನಲ್ಲಿನ ಘಟಕಗಳ ಪರಿಚಯವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದು, ಇದು ಆರ್‌ನೇಸ್‌ನ ಪ್ರವೇಶವನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ತಡೆಯುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್‌ನ ಸುಗಮ ಪ್ರಗತಿಯನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸುತ್ತದೆ.

Fಓರೆಜೀನ್ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನಿಂದ ಪಡೆಯುತ್ತದೆ, qPCR ಗೆ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್

ನಿಮ್ಮ lncRNA ಪತ್ತೆಗೆ ಸಮಗ್ರವಾಗಿ ಬೆಂಗಾವಲು

ಪ್ರಾಣಿಗಳ ಒಟ್ಟು RNA Iಪರಿಹಾರಕಿಟ್ (gDNA ತೆಗೆಯುವ ಕಾಲಮ್‌ನೊಂದಿಗೆ)

ಸೆಲ್ ಒಟ್ಟು RNA Iಪರಿಹಾರಕಿಟ್ (gDNA ತೆಗೆಯುವ ಕಾಲಮ್‌ನೊಂದಿಗೆ)

Lnc-RT HeroTM I(gDNase ಜೊತೆಗೆ)(lncRNA ಯಿಂದ ಮೊದಲ-ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ cDNA ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ ಸೂಪರ್ ಪ್ರೀಮಿಕ್ಸ್)

ರಿಯಲ್ ಟೈಮ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಈಸಿ TM-SYBR ಗ್ರೀನ್ I

Aಅನುಕೂಲಗಳು ofಆರ್ಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ:

ಕಿಟ್ ಮೂರನೇ ತಲೆಮಾರಿನ RNA ಹೊರತೆಗೆಯುವ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ, DNase ಅನ್ನು ಬಳಸುವ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲ.

96, 24, 12, ಮತ್ತು 6-ವೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್ ಕಲ್ಚರ್ಡ್ ಸೆಲ್‌ಗಳಿಂದ 11 ನಿಮಿಷಗಳು, gDNA-ಮುಕ್ತ, ಉನ್ನತ-ಶುದ್ಧತೆ, ಉತ್ತಮ-ಗುಣಮಟ್ಟದ ಒಟ್ಟು ಸೆಲ್ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯ ಹೆಚ್ಚಿನ-ದಕ್ಷತೆಯ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ.

lncRNA ರಿವರ್ಸ್ ಪ್ರತಿಲೇಖನದ ಪ್ರಯೋಜನಗಳು:

ಜೀನೋಮಿಕ್ DNA ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಲು LncRNA ಗಾಗಿ ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾದ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಶನ್ ಸಿಸ್ಟಮ್.

ಹಿಮ್ಮುಖ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಹೆಚ್ಚಿನ ಉಷ್ಣ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು ಇನ್ನೂ 50 ° C ನಲ್ಲಿ ಉತ್ತಮ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.

ಹೆಚ್ಚಿನ GC ವಿಷಯ ಮತ್ತು ಸಂಕೀರ್ಣ ದ್ವಿತೀಯಕ ರಚನೆಯೊಂದಿಗೆ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ದಕ್ಷತೆಯೊಂದಿಗೆ ಹಿಂತಿರುಗಿಸಬಹುದು.

ಅನುಕೂಲಗಳುof qPCR:

ಹಾಟ್ ಸ್ಟಾರ್ಟ್ ಫೋರ್ಜೀನ್ ಟಾಕ್ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಹೆಚ್ಚಿನ ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆ, ಹೆಚ್ಚಿನ ವರ್ಧನೆ ಸಂವೇದನೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ

ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ ರಿಯಲ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಈಸಿ ಮಿಕ್ಸ್ SYBR ಗ್ರೀನ್ ಅನ್ನು ನಾನು ಹೆಚ್ಚಿನ ಪತ್ತೆ ಸಂವೇದನೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು ಅದರ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ತೀವ್ರತೆಯು ಒಂದೇ ರೀತಿಯ ಉತ್ಪನ್ನಗಳಿಗಿಂತ 3-5 ಪಟ್ಟು ಹೆಚ್ಚು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಅಗತ್ಯಗಳನ್ನು ಪೂರೈಸುತ್ತದೆ.