ಎಷ್ಟು ಗೊತ್ತು

ಎನ್ ಬಗ್ಗೆಯುಕ್ಲಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ

ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಆರಂಭ ಮತ್ತು ಅಂತ್ಯ

ಆರಂಭದಲ್ಲಿ ಎಲ್ಲವೂ ಕಷ್ಟ, ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲವು ಹೆಚ್ಚು

ಆಣ್ವಿಕ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಪ್ರಾರಂಭ, ನಂತರದ ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗಾಗಿ

ಯಶಸ್ಸು ಅಥವಾ ವೈಫಲ್ಯವು ನಿರ್ಣಾಯಕ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬೀರುತ್ತದೆ.

ಟ್ರೇಸ್/ಅಲ್ಟ್ರಾ-ಟ್ರೇಸ್ ಯುವಿ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್ ಅನೇಕ ವೈಜ್ಞಾನಿಕ ಸಂಶೋಧಕರಿಂದ ಒಲವು ಹೊಂದಿದೆ ಏಕೆಂದರೆ ಇದು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಸಾಂದ್ರತೆ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮತ್ತು ಉಪ್ಪು ಅಯಾನು ಶೇಷಗಳನ್ನು ಸರಳವಾಗಿ, ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಮತ್ತು ಆರ್ಥಿಕವಾಗಿ ಪತ್ತೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

ನಮಗೆಲ್ಲರಿಗೂ ತಿಳಿದಿರುವಂತೆ, A260 ಎಂದರೆ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ OD ಮೌಲ್ಯ, A280 ಎಂದರೆ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ OD ಮೌಲ್ಯ, A230 ಎಂದರೆ ಉಪ್ಪು ಅಯಾನು ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ OD ಮೌಲ್ಯ, ಆದ್ದರಿಂದ A260 ಎಂದರೆ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಪರಿವರ್ತಿಸಬಹುದು, A260/280 ಎಂದರೆ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಶೇಷ, A260/230 ಎಂದರೆ ಸಂಶೋಧನೆಯ ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ದೊಡ್ಡ ಅಂಕಿಅಂಶಗಳು. ಮತ್ತು ಅದು "ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ” ಇದು ಡಿಎನ್ಎ ಮತ್ತು ಆರ್ಎನ್ಎಗಳ ಶುದ್ಧತೆಯನ್ನು ವಿವರಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಂಬಲುಒಂದು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಮಟ್ಟಿಗೆ.ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಇಳುವರಿ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧತೆಯ ಗುರುತಿಸುವಿಕೆಗೆ ಇದು ಏಕೈಕ ಮಾನದಂಡವಲ್ಲ, ಇದನ್ನು ಕೇವಲ ಉಲ್ಲೇಖವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಇದು "ಚಿನ್ನದ ಮಾನದಂಡ" ಅಲ್ಲ.

Thermo Fisher ND-2000 ಕೈಪಿಡಿಯು ಪರೀಕ್ಷಾ ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹತೆಯನ್ನು ಒತ್ತಿಹೇಳುತ್ತದೆ

ಕಾರಣವೇನೆಂದರೆ, ಮೈಕ್ರೋ/ಅಲ್ಟ್ರಾಮೈಕ್ರೊ UV ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೂಲಕ ಪಡೆದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಇಳುವರಿ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧತೆಯನ್ನು ಮಾತ್ರ ಪ್ರತಿಬಿಂಬಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಹಲವಾರು ಪ್ರಭಾವ ಬೀರುವ ಅಂಶಗಳಿವೆ (ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಮಾರ್ಗ, ಮಾದರಿ ಪರಿಮಾಣ, ಮಾದರಿ ಸಾಂದ್ರತೆ, pH ಮೌಲ್ಯ, ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ಮಾಪನದ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಇತರ ಅಯಾನುಗಳು, ಇತ್ಯಾದಿ.) , ಅಳತೆ ಮಾಡಿದ OD ಮೌಲ್ಯವು ಅಗತ್ಯವಾಗಿ ನಿಖರವಾಗಿರುವುದಿಲ್ಲ.ಅದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುವ ವಸ್ತುವಿನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯ ಕೊರತೆಯಿಂದಾಗಿ, ಸಿಂಗಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎ, ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎ, ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ, ಡಿಎನ್‌ಟಿಪಿಗಳು ಮತ್ತು ಕೆಲವು ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳು 260nm ತರಂಗಾಂತರದಲ್ಲಿ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ಶಿಖರಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ ಮತ್ತು A260 ಮಾತ್ರ ನಿರ್ಧರಿಸುವ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ನಿಜವಾದ DNA ಅಥವಾ RNA ಅಲ್ಲ.ಏಕಾಗ್ರತೆ, ಮತ್ತು ಅದರ ಸಮಗ್ರತೆ ಮತ್ತು ಅವನತಿಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ.

ಹಾಗಾದರೆ ನಮ್ಮ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಗುಣಮಟ್ಟವನ್ನು ಹೇಗೆ ನಿರ್ಣಯಿಸುವುದು?ಪತ್ತೆಗಾಗಿ ಸೂಕ್ಷ್ಮ/ಅಲ್ಟ್ರಾಮೈಕ್ರೊ ಯುವಿ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುವುದರ ಜೊತೆಗೆ, ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಶುದ್ಧತೆ ಮತ್ತು ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ದೃಷ್ಟಿಗೋಚರವಾಗಿ ಪ್ರದರ್ಶಿಸಲು ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಮಟ್ಟಿಗೆ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸಲು ಅಗರೋಸ್ ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್‌ನಂತಹ ವಿಧಾನಗಳು ಸಹ ಅಗತ್ಯವಿದೆ.ಈ ರೀತಿಯಾಗಿ, ವಿವಿಧ ವಿಧಾನಗಳ ಪತ್ತೆ ಫಲಿತಾಂಶಗಳಿಂದ ಪಡೆದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಇಳುವರಿ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧತೆಯು ನಂಬಲರ್ಹವಾಗಿದೆ.

ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಚಾರ್ಟ್ ಹೋಲಿಕೆ

H1299 ಕೋಶಗಳ ಜೀನೋಮಿಕ್ DNA ಅನ್ನು ಕಂಪನಿ A ಯ DNA ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಕಿಟ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ ಹೊರತೆಗೆಯಲಾಯಿತು, ಮತ್ತು ಗಮನಾರ್ಹವಾದ ಅಶುದ್ಧತೆಯ ಮಾಲಿನ್ಯವು ಕಂಡುಬಂದಿತು, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿನ OD ಮೌಲ್ಯಗಳು

(OD ಮಾಪನ ಮೌಲ್ಯ ಮತ್ತು ಅನುಗುಣವಾದ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೆರೋಗ್ರಾಮ್)

ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಸೂಚ್ಯಂಕ

ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಇಳುವರಿ ಮತ್ತು ಗುಣಮಟ್ಟದ ಪರೀಕ್ಷೆಗೆ "ಚಿನ್ನದ ಮಾನದಂಡ" ಇದೆಯೇ?

ನಮಗೆ ತಿಳಿದಿರುವಂತೆ, ಯಾವುದೇ ಸರಳ, ವೇಗದ ಮತ್ತು ಅಗ್ಗದ ವಿಧಾನವಿಲ್ಲ.ಇದು ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್, ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಅಥವಾ ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿಯಾಗಿರಲಿ, ಅವೆಲ್ಲವೂ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಸಾಂದ್ರತೆ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧತೆಯನ್ನು ವಿವಿಧ ಅಂಶಗಳಿಂದ ಪ್ರತಿಬಿಂಬಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಅವುಗಳನ್ನು ಪರಸ್ಪರ ಉಲ್ಲೇಖಿಸುವ ಮೂಲಕ ನಿರ್ಣಯಿಸಬೇಕಾಗಿದೆ.

ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಸೂಚ್ಯಂಕ ಯಾವಾಗಲೂಅನುಸರಣಾ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್.ಇದು ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವುದಿಲ್ಲ.ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ವರ್ಧನೆ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಮತ್ತು Ct ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಪಡೆಯುವುದು ಮತ್ತು ಅನುಕ್ರಮವಾಗಿ ಸಂಪೂರ್ಣ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಪಡೆಯುವುದು ಯಶಸ್ವಿ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯಾಗಿದೆ.

ಒಟ್ಟಾರೆಯಾಗಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ, ಅನುಪಾತ-ಮಾತ್ರ ಸಿದ್ಧಾಂತದ ದೃಷ್ಟಿಕೋನವನ್ನು "ಉತ್ತಮ ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಉತ್ತಮ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ನಿಯತಾಂಕಗಳಾಗಿ ಬಳಸುವುದು" ಎಂಬ ದೃಷ್ಟಿಕೋನದಿಂದ ಸವಾಲು ಮಾಡಬೇಕು!

ಹೆಚ್ಚಿನ ಡಿಎನ್‌ಎ/ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಶುದ್ಧತೆಯನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾದ ಫೋರ್ಜೀನ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಕಿಟ್‌ಗಳು:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/