ಪಿಸಿಆರ್, ಬಹು ಪಿಸಿಆರ್, ಸ್ಥಳದಲ್ಲಿ PCR, ರಿವರ್ಸ್ PCR, RT-PCR, qPCR (1)–ಪಿಸಿಆರ್

ನಾವು ವಿವಿಧ PCR ನ ಪರಿಕಲ್ಪನೆಗಳು, ಹಂತಗಳು ಮತ್ತು ವಿವರಗಳನ್ನು ವಿಂಗಡಿಸುತ್ತೇವೆ

Ⅰ. ಪಿಸಿಆರ್

ಪಿಸಿಆರ್ ಎಂದು ಕರೆಯಲ್ಪಡುವ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಚೈನ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್, ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಹಿಗ್ಗಿಸಲು ಬಳಸಲಾಗುವ ಆಣ್ವಿಕ ಜೈವಿಕ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವಾಗಿದೆ.ಇದನ್ನು ವಿಟ್ರೊದಲ್ಲಿ ವಿಶೇಷ DNA ಪ್ರತಿಕೃತಿ ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸಬಹುದು.DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ (DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ I) ಅನ್ನು 1955 ರ ಹಿಂದೆಯೇ ಕಂಡುಹಿಡಿಯಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಮೌಲ್ಯ ಮತ್ತು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ E. ಕೋಲಿಯ ಕ್ಲೆನೋ ಫ್ರಾಗ್ಮೆಂಟ್ ಅನ್ನು 1970 ರ ದಶಕದ ಆರಂಭದಲ್ಲಿ ಡಾ. H. ಕ್ಲೆನೋವ್ ಕಂಡುಹಿಡಿದರು, ಆದರೆ ಈ ಕಿಣ್ವವು ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಸಹಿಸದ ಕಾರಣ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಉಷ್ಣತೆಯು ಅದನ್ನು ಕ್ಷೀಣಿಸಬಹುದು, ಆದ್ದರಿಂದ ಇದು ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನದೊಂದಿಗೆ ವಿರೂಪಗೊಳ್ಳುವ ಪಾಲಿಮರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪೂರೈಸುವುದಿಲ್ಲ.ಇಂದು ಬಳಕೆಯಲ್ಲಿರುವ ಕಿಣ್ವಗಳನ್ನು (ಟಾಕ್ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ), 1976 ರಲ್ಲಿ ಬಿಸಿನೀರಿನ ಬುಗ್ಗೆ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾವಾದ ಥರ್ಮಸ್ ಅಕ್ವಾಟಿಕಸ್‌ನಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಯಿತು. ಇದರ ವೈಶಿಷ್ಟ್ಯವೆಂದರೆ ಇದು ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ತಡೆದುಕೊಳ್ಳಬಲ್ಲದು ಮತ್ತು ಆದರ್ಶ ಕಿಣ್ವವಾಗಿದೆ, ಆದರೆ ಇದನ್ನು 1980 ರ ದಶಕದ ನಂತರ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಪಿಸಿಆರ್‌ನ ಮೂಲ ಪ್ರಾಚೀನ ಮೂಲಮಾದರಿಯ ಮೂಲ ಪರಿಕಲ್ಪನೆಯು ಜೀನ್ ದುರಸ್ತಿ ಮತ್ತು ನಕಲು ಮಾಡುವಿಕೆಗೆ ಹೋಲುತ್ತದೆ, ಇದನ್ನು 1971 ರಲ್ಲಿ ಡಾ. ಕೆಜೆಲ್ ಕ್ಲೆಪ್ಪೆ ಪ್ರಸ್ತಾಪಿಸಿದರು. ಅವರು ಮೊದಲ ಸರಳ ಮತ್ತು ಅಲ್ಪಾವಧಿಯ ಜೀನ್ ಪ್ರತಿಯನ್ನು ಪ್ರಕಟಿಸಿದರು (ಪಿಸಿಆರ್‌ನ ಮೊದಲ ಎರಡು ಚಕ್ರ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಂತೆಯೇ).ಇಂದು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದ ಪಿಸಿಆರ್ ಅನ್ನು ಡಾ. ಕ್ಯಾರಿ ಬಿ. ಮುಲ್ಲಿಸ್ ಅವರು 1983 ರಲ್ಲಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದರು. ಡಾ. ಮುಲ್ಲಿಸ್ ಆ ವರ್ಷ ಪಿಇ ಕಂಪನಿಗಳಿಗೆ ಸೇವೆ ಸಲ್ಲಿಸಿದರು, ಆದ್ದರಿಂದ ಪಿಇ ಪಿಸಿಆರ್ ಉದ್ಯಮದಲ್ಲಿ ವಿಶೇಷ ಸ್ಥಾನಮಾನವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.ಡಾ. ಮುಲ್ಲಿಸ್ ಅವರು ಸೈಕಿ ಮತ್ತು ಇತರರೊಂದಿಗೆ 1985 ರಲ್ಲಿ ಅಧಿಕೃತವಾಗಿ ಮೊದಲ ಸಂಬಂಧಿತ ಪತ್ರಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರಕಟಿಸಿದರು. ಅಂದಿನಿಂದ, PCR ನ ಬಳಕೆಯು ದಿನಕ್ಕೆ ಸಾವಿರಾರು ಮೈಲುಗಳಷ್ಟು, ಮತ್ತು ಸಂಬಂಧಿತ ಪೇಪರ್‌ಗಳ ಗುಣಮಟ್ಟವು ಅನೇಕ ಇತರ ಸಂಶೋಧನಾ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಅಸಹ್ಯಕರವಾಗಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಹೇಳಬಹುದು.ತರುವಾಯ, ಪಿಸಿಆರ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಜೈವಿಕ ವೈಜ್ಞಾನಿಕ ಸಂಶೋಧನೆ ಮತ್ತು ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಆಣ್ವಿಕ ಜೀವಶಾಸ್ತ್ರದ ಸಂಶೋಧನೆಯ ಪ್ರಮುಖ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವಾಗಿದೆ.ಮುಲ್ಲಿಸ್ ಅವರು 1993 ರ ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರದಲ್ಲಿ ನೊಬೆಲ್ ಪ್ರಶಸ್ತಿಯನ್ನು ಗೆದ್ದರು.

ಪಿಸಿಆರ್ತತ್ವ

ಪಿಸಿಆರ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದ ಮೂಲ ತತ್ವವು ಡಿಎನ್‌ಎ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಪುನರಾವರ್ತನೆ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗೆ ಹೋಲುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ಅದರ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯು ಗುರಿ ಅನುಕ್ರಮದ ಎರಡೂ ತುದಿಗಳಿಗೆ ಪೂರಕವಾಗಿರುವ ಆಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್ ಪ್ರೈಮರ್ ಅನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿರುತ್ತದೆ.ಪಿಸಿಆರ್ ಡಿಜೆನರೇಶನ್-ಎನೆಲಿಂಗ್-ವಿಸ್ತರಿಸುವ ಮೂರು ಮೂಲಭೂತ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳ ಹಂತಗಳಿಂದ ಕೂಡಿದೆ: ① ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಡಿಜೆನರೇಶನ್: ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಅವಧಿಗೆ ಸುಮಾರು 93 ಡಿಗ್ರಿ ಸೆಲ್ಸಿಯಸ್‌ಗೆ ಬಿಸಿ ಮಾಡಿದ ನಂತರ, ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯಿಂದ ರೂಪುಗೊಂಡ ಡ್ಯುಯಲ್-ಚೈನ್ ಡಿಎನ್‌ಎಗೆ ಡ್ಯುಯಲ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಡಿಎನ್‌ಎ ಏಕ ಸರಪಳಿಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಬಹುದು.② ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್‌ನ ಅನೆಲಿಂಗ್ (ಸಂಯುಕ್ತ): ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಬಿಸಿಯಾದ ನಂತರ ಮತ್ತು ಒಂದೇ ಸರಪಳಿಯಾಗಿ ಕ್ಷೀಣಿಸಿದ ನಂತರ, ತಾಪಮಾನವು ಸುಮಾರು 55 ಡಿಗ್ರಿ ಸೆಲ್ಸಿಯಸ್‌ಗೆ ಇಳಿಯುತ್ತದೆ.ಪ್ರೈಮರ್ ಮತ್ತು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ DNA ಏಕ-ಸರಪಳಿಯ ಪೂರಕ ಅನುಕ್ರಮ.③ ಪ್ರೈಮರ್‌ನ ವಿಸ್ತರಣೆ: DNA ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ - ಪ್ರೈಮರ್ ಬೈಂಡಿಂಗ್ TaqDNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ, dNTP ಅನ್ನು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಕಚ್ಚಾ ವಸ್ತುವಾಗಿ ಹೊಂದಿದೆ.ಪುನರಾವರ್ತನೆಯ ತತ್ವವನ್ನು ಇರಿಸಿ, ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಸರಪಳಿಗೆ ಪೂರಕವಾಗಿರುವ ಹೊಸ ಅರೆ-ಮೀಸಲಾತಿ ನಕಲು ಸರಪಳಿಯನ್ನು ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಿ ಮತ್ತು ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಸೈಕಲ್ ಡಿಜೆನರೇಶನ್-ಅನೆಲಿಂಗ್-ವಿಸ್ತರಣೆ ಮೂರು ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳು ಹೆಚ್ಚು "ಅರೆ-ಮೀಸಲು ಕಾಪಿ ಚೈನ್" ಅನ್ನು ಪಡೆಯಬಹುದು ಮತ್ತು ಈ ಹೊಸ ಸರಪಳಿಯು ಮತ್ತೆ ಲಭ್ಯವಿದೆ ಮುಂದಿನ ಚಕ್ರಕ್ಕೆ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ.ಲೂಪ್ ಅನ್ನು ಪೂರ್ಣಗೊಳಿಸಲು ಇದು 2-4 ನಿಮಿಷಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ, ಗುರಿ ಜೀನ್ ಅನ್ನು 2-3 ಗಂಟೆಗಳಲ್ಲಿ ಹಲವಾರು ಮಿಲಿಯನ್ ಬಾರಿ ವರ್ಧಿಸಬಹುದು.

ಪ್ರಮಾಣಿತಪಿಸಿಆರ್ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆ

ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಐದು ಅಂಶಗಳು

PCR ಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಮುಖ್ಯವಾಗಿ ಐದು ವಿಧದ ಪದಾರ್ಥಗಳು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತವೆ, ಅವುಗಳೆಂದರೆ ಪ್ರೈಮರ್, ಕಿಣ್ವ, dNTP, ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಮತ್ತು ಬಫರ್ (Mg2+ ಅಗತ್ಯವಿದೆ).[ಪಿಸಿಆರ್ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನ]

ಪ್ರಮಾಣಿತ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಮೂರು ಹಂತಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ

1. DNA ಅವನತಿ (90°C-96°C): ಉಷ್ಣ ಕ್ರಿಯೆಯ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಡ್ಯುಯಲ್-ಚೈನ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳು, ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಬಂಧಗಳು ಒಡೆಯುತ್ತವೆ, ಏಕ-ಸರಪಳಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ರೂಪಿಸುತ್ತವೆ.

2. ಅನೆಲಿಂಗ್ (25℃ -65℃): ಸಿಸ್ಟಂ ತಾಪಮಾನವು ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ, ಸ್ಥಳೀಯ ಡ್ಯುಯಲ್-ಚೈನ್ ಅನ್ನು ರೂಪಿಸಲು ಪ್ರೈಮರ್ ಅನ್ನು DNA ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

3. ವಿಸ್ತರಣೆ (70℃ -75℃): Taq ಕಿಣ್ವದ ಕ್ರಿಯೆಯ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ (ಸುಮಾರು 72 ° C, ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಚಟುವಟಿಕೆ), dNTP ಯನ್ನು ಕಚ್ಚಾ ವಸ್ತುವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಪ್ರೈಮರ್ → 3′ ಅಂತ್ಯದ 5′ ಅಂತ್ಯದಿಂದ ವಿಸ್ತರಿಸುತ್ತದೆ, ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ ಮತ್ತು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಪರಸ್ಪರ DNA ಸರಣಿಗೆ ಪೂರಕವಾಗಿರುತ್ತದೆ.

ಪ್ರತಿ ಚಕ್ರವನ್ನು ಡಿನೇಚರ್ಡ್, ಅನೆಲ್ ಮತ್ತು ವಿಸ್ತರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಡಿಎನ್ಎ ವಿಷಯವನ್ನು ದ್ವಿಗುಣಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ.ಪ್ರಸ್ತುತ, ಕಡಿಮೆ ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರದೇಶದಿಂದಾಗಿ, Taq ಕಿಣ್ವದ ಚಟುವಟಿಕೆಯು ಸೂಕ್ತವಲ್ಲದಿದ್ದರೂ ಸಹ ಕೆಲವು PCR ಅನ್ನು ಬಹಳ ಕಡಿಮೆ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಪುನರಾವರ್ತಿಸಬಹುದು, ಆದ್ದರಿಂದ ಇದನ್ನು ಎರಡು ಹಂತಗಳಿಗೆ ಬದಲಾಯಿಸಬಹುದು, ಅಂದರೆ, ಅನೆಲಿಂಗ್ ಮತ್ತು ವಿಸ್ತರಣೆಯನ್ನು 60 ° C-65 ° C ನಲ್ಲಿ ಒಂದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದು.ಎತ್ತುವ ಮತ್ತು ತಂಪಾಗಿಸುವ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವೇಗವನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು.

ಪಿಸಿಆರ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ವೈಶಿಷ್ಟ್ಯಗಳು

● ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ

ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ನಿರ್ಣಾಯಕ ಅಂಶಗಳು: ① ಪ್ರೈಮರ್ ಮತ್ತು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ DNA ಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸಂಯೋಜನೆ.②ಬೇಸ್ ಜೋಡಣೆಯ ತತ್ವ.③TaqDNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ನಿಷ್ಠೆ.④ ಗುರಿ ಜೀನ್‌ನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ಸಂಪ್ರದಾಯಶೀಲತೆ.

ಪ್ರೈಮರ್ಗಳು ಮತ್ತು ಟೆಂಪ್ಲೆಟ್ಗಳ ಸರಿಯಾದ ಸಂಯೋಜನೆಯು ಪ್ರಮುಖವಾಗಿದೆ.ಪ್ರೈಮರ್ ಮತ್ತು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನ ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್ ಚೈನ್‌ನ ವಿಸ್ತರಣೆಯು ಕ್ಷಾರೀಯ ಬೇಸ್ ಹೊಂದಾಣಿಕೆಯ ತತ್ವವನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ.ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳ ನಿಷ್ಠೆ ಮತ್ತು ಟಾಕ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್‌ನ ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನದ ಪ್ರತಿರೋಧವು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನ ಬೈಂಡಿಂಗ್ (ಸಂಯುಕ್ತ) ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಪ್ರೈಮರ್ ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದು.ಸಂಯೋಜನೆಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯು ಹೆಚ್ಚು ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ.ಕ್ಲಿಪ್ ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಟ್ಟದ ನಿಖರತೆಯನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳಬಹುದು.ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಪ್ರದಾಯಶೀಲತೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಪ್ರದಾಯಶೀಲತೆಯೊಂದಿಗೆ ಗುರಿಯ ಆನುವಂಶಿಕ ಪ್ರದೇಶವನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ, ಅದರ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯು ಹೆಚ್ಚಾಗಿರುತ್ತದೆ.

● ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂವೇದನೆ

PCR ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಉತ್ಪಾದನಾ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಸೂಚ್ಯಂಕದಿಂದ ಹೆಚ್ಚಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಮೈಕ್ರೋಗ್ರಾಮ್‌ಗಳ ಮಟ್ಟಕ್ಕೆ ಮೈಕ್ರೊಕಂಟ್ರೋಲರ್‌ನ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಪಿಕರ್ (PG=10-12) ನ ಆರಂಭಿಕ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ವಿಸ್ತರಿಸಬಹುದು (μg= -6).1 ಮಿಲಿಯನ್ ಕೋಶಗಳಿಂದ ಗುರಿ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯಬಹುದು;ವೈರಸ್ಗಳ ಪತ್ತೆಯಲ್ಲಿ, PCR ನ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯು 3 RFU ಗಳನ್ನು ತಲುಪಬಹುದು (ಖಾಲಿ ತಾಣಗಳು ರೂಪುಗೊಂಡ ಘಟಕಗಳು);ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ವಿಜ್ಞಾನದಲ್ಲಿ ಕನಿಷ್ಠ ಪತ್ತೆ ದರವು 3 ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾಗಳು.

● ಸರಳ ಮತ್ತು ವೇಗ

ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಬಿಂಬವು ಹೆಚ್ಚಿನ-ತಾಪಮಾನದ ಟಾಕ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಒಂದು ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಸೇರಿಸುತ್ತದೆ, ಅಂದರೆ ಡಿಎನ್‌ಎ ವರ್ಧನೆಯ ಪರಿಹಾರ ಮತ್ತು ನೀರಿನ ಸ್ನಾನದ ಮಡಕೆಯ ಮೇಲೆ ಡಿಜೆನರೇಶನ್-ಅನೆಲ್-ವಿಸ್ತರಣೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ.ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯು 2 ರಿಂದ 4 ಗಂಟೆಗಳಲ್ಲಿ ಪೂರ್ಣಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.ವರ್ಧಿತ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ವಿದ್ಯುತ್ ಕತ್ತಿಯಿಂದ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಐಸೊಟೋಪ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಬೇಕಾಗಿಲ್ಲ, ವಿಕಿರಣಶೀಲ ಮಾಲಿನ್ಯವಿಲ್ಲ, ಮತ್ತು ಸುಲಭ ಪ್ರಚಾರ.

● ಮಾದರಿಯ ಶುದ್ಧತೆ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ

ವೈರಸ್ಗಳು ಅಥವಾ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ ಮತ್ತು ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸುವ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲ.ಡಿಎನ್ಎ ಕಚ್ಚಾ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಮತ್ತು ಆರ್ಎನ್ಎಗಳನ್ನು ಆಂಪ್ಲಿಫೈಯರ್ಗಳಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು.ರಕ್ತ, ದೇಹದ ದ್ರವ, ಕೆಮ್ಮು ತೊಳೆಯುವ ದ್ರವ, ಕೂದಲು, ಜೀವಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಜೀವಂತ ಅಂಗಾಂಶಗಳಂತಹ ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು DNA ವರ್ಧನೆ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವಿಕೆಯನ್ನು ನೇರವಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು.

ಪಿಸಿಆರ್ಸಾಮಾನ್ಯ ಸಮಸ್ಯೆಗಳು

● ತಪ್ಪು ಋಣಾತ್ಮಕ, ಯಾವುದೇ ವರ್ಧಿತ ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳಿಲ್ಲ

PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಪ್ರಮುಖ ಹಂತಗಳು ಸೇರಿವೆ: ① ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳ ತಯಾರಿಕೆ, ② ಗುಣಮಟ್ಟ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ, ③ ಕಿಣ್ವಗಳ ಗುಣಮಟ್ಟ ④ PCR ಸೈಕಲ್ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು.ಕಾರಣವನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿಯುವುದು ಮೇಲಿನ ಲಿಂಕ್‌ಗಳಿಗಾಗಿ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಬೇಕು.

ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳು: ① ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ವಿವಿಧ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ, ② ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಟಾಕ್ ಕಿಣ್ವ ಪ್ರತಿರೋಧಕವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ③ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನಲ್ಲಿರುವ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಕ್ರೋಮೋಸೋಮ್‌ನಲ್ಲಿರುವ ಗುಂಪು ಪ್ರೋಟೀನ್.⑤ ಡಿಮಿನರ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಡಿಜೆನರೇಶನ್ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿಲ್ಲ.ಕಿಣ್ವಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್ಗಳ ಗುಣಮಟ್ಟವು ಉತ್ತಮವಾದಾಗ, ಯಾವುದೇ ವರ್ಧನೆ ಬ್ಯಾಂಡ್ ಇಲ್ಲ, ಇದು ಮಾದರಿಗಳ ಜೀರ್ಣಕಾರಿ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯಾಗಿದೆ.ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಏನಾದರೂ ತಪ್ಪಾಗಿದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರವಾದ ಜೀರ್ಣಕ್ರಿಯೆಯ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ತಯಾರಿಸಲು, ಅದರ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವನ್ನು ಸರಿಪಡಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ನಿರಂಕುಶವಾಗಿ ಬದಲಾಯಿಸಬಾರದು.

ಕಿಣ್ವ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆ: ಕಿಣ್ವದ ಚಟುವಟಿಕೆಯು ಕಳೆದುಹೋಗಿದೆಯೇ ಅಥವಾ ಸಾಕಷ್ಟಿಲ್ಲವೇ ಎಂಬುದನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲು ಹೊಸ ಕಿಣ್ವ ಅಥವಾ ಹಳೆಯ ಮತ್ತು ಹೊಸ ಕಿಣ್ವಗಳನ್ನು ಒಟ್ಟಿಗೆ ಬಳಸಬೇಕು, ಇದು ತಪ್ಪು ನಿರಾಕರಣೆಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.ಟಾಕ್ ಕಿಣ್ವ ಅಥವಾ ಎಥಿಡಿಯಮ್ ಬ್ರೋಮೈಡ್ ಅನ್ನು ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ ಮರೆತುಬಿಡಲಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ಗಮನಿಸಬೇಕು.

ಪ್ರೈಮರ್: ಪ್ರೈಮರ್‌ನ ಗುಣಮಟ್ಟ, ಪ್ರೈಮರ್‌ನ ಸಾಂದ್ರತೆ ಮತ್ತು ಎರಡು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಸಮ್ಮಿತೀಯವಾಗಿದೆಯೇ.ಪಿಸಿಆರ್ ವೈಫಲ್ಯಕ್ಕೆ ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯ ಕಾರಣವಾಗಿದೆ ಅಥವಾ ಹೆಚ್ಚುತ್ತಿರುವ ಬ್ಯಾಂಡ್ ಸೂಕ್ತವಲ್ಲ ಮತ್ತು ಪ್ರಸರಣಕ್ಕೆ ಒಳಗಾಗುತ್ತದೆ.ಕೆಲವು ಬ್ಯಾಚ್ ಸಂಖ್ಯೆಗಳ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ಗುಣಮಟ್ಟದಲ್ಲಿ ಸಮಸ್ಯೆಗಳಿವೆ.ಎರಡು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ, ಇದು ಕಡಿಮೆ ಸಾಮರ್ಥ್ಯದ ಅಸಮಪಾರ್ಶ್ವದ ವರ್ಧನೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.ಪ್ರತಿಕ್ರಮಗಳೆಂದರೆ: ① ಘಟಕಗಳನ್ನು ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲು ಉತ್ತಮ ಪ್ರೈಮರ್ ಅನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿ.② ಪ್ರೈಮರ್‌ನ ಸಾಂದ್ರತೆಯು OD ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿರುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಅಗರ್ ಶುಗರ್ ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಮಾಡಲು ಪ್ರೈಮರ್‌ನ ಮೂಲ ದ್ರವಕ್ಕೆ ಗಮನ ಕೊಡುತ್ತದೆ.ಪ್ರೈಮರ್ ಸ್ಟ್ರಿಪ್ ವಲಯ ಇರಬೇಕು, ಮತ್ತು ಎರಡು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ಹೊಳಪು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಸ್ಥಿರವಾಗಿರಬೇಕು.ಬೆಲ್ಟ್, ಪಿಸಿಆರ್ ಈ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ವಿಫಲವಾಗಬಹುದು, ಮತ್ತು ಇದನ್ನು ಪ್ರೈಮರ್ ಸಿಂಥೆಸಿಸ್ ಘಟಕದೊಂದಿಗೆ ಪರಿಹರಿಸಬೇಕು.ಪ್ರೈಮರ್ ಅಧಿಕವಾಗಿದ್ದರೆ, ಹೊಳಪು ಕಡಿಮೆಯಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಿದಾಗ ಅದರ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಸಮತೋಲನದಲ್ಲಿರಬೇಕು.③ ಪ್ರೈಮರ್ ಅನ್ನು ಪಾವತಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ರೆಫ್ರಿಜರೇಟರ್‌ನ ಬಹು ಘನೀಕರಣ ಅಥವಾ ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ಶೈತ್ಯೀಕರಣದ ಭಾಗಗಳನ್ನು ತಡೆಗಟ್ಟಲು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು, ಇದು ಪ್ರೈಮರ್ ಹದಗೆಡಲು ಮತ್ತು ಅವನತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.④ ಪ್ರೈಮರ್‌ನ ವಿನ್ಯಾಸವು ಅಸಮಂಜಸವಾಗಿದೆ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಪ್ರೈಮರ್‌ನ ಉದ್ದವು ಸಾಕಷ್ಟಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ ನಡುವೆ ಡಿ ಕ್ಲಸ್ಟರ್ ರಚನೆಯಾಗುತ್ತದೆ.

Mg2+ ಸಾಂದ್ರತೆ: Mg2+ ಐಯಾನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯು PCR ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆಯ ಮೇಲೆ ಉತ್ತಮ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.ಅತಿಯಾದ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ವಿರುದ್ಧ ಲಿಂಗವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ಸಾಂದ್ರತೆಯು ತುಂಬಾ ಕಡಿಮೆಯಿದ್ದರೆ, PCR ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಔಟ್‌ಪುಟ್ ವಿಸ್ತರಣೆ ಬ್ಯಾಂಡ್ ಇಲ್ಲದೆ PCR ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ವೈಫಲ್ಯವನ್ನು ಸಹ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಮಾಣದ ಬದಲಾವಣೆ: PCR ವರ್ಧನೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾದ ಪರಿಮಾಣವು 20ul, 30ul, ಮತ್ತು 50ul ಅಥವಾ 100uL ಆಗಿದೆ, PCR ವರ್ಧನೆಗಾಗಿ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್‌ನ ದೊಡ್ಡ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ವೈಜ್ಞಾನಿಕ ಸಂಶೋಧನೆ ಮತ್ತು ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಪರೀಕ್ಷೆಯ ವಿವಿಧ ಉದ್ದೇಶಗಳ ಪ್ರಕಾರ ಹೊಂದಿಸಲಾಗಿದೆ.20ul ನಂತಹ ಸಣ್ಣ ಸಂಪುಟಗಳನ್ನು ಮಾಡಿದ ನಂತರ, ಗಾತ್ರವನ್ನು ಮಾಡುವಾಗ ಬಳ್ಳಿಯ ಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಮಾಡುವುದು ಅವಶ್ಯಕ, ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೆ ಅದು ವಿಫಲಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.

ದೈಹಿಕ ಕಾರಣಗಳು: ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಗೆ ರೂಪಾಂತರವು ಬಹಳ ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ.ಅವನತಿ ಉಷ್ಣತೆಯು ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದ್ದರೆ, ಅವನತಿ ಸಮಯವು ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ, ಇದು ತಪ್ಪು ನಿರಾಕರಣೆಗಳಲ್ಲಿ ಸಂಭವಿಸುವ ಸಾಧ್ಯತೆಯಿದೆ;ತುಂಬಾ ಕಡಿಮೆ ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ವರ್ಧನೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ ವಿಸ್ತರಣೆ ಅಥವಾ ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಕರಗುವ ಕುಕ್ಕರ್‌ನಲ್ಲಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸ, ಅನೆಲಿಂಗ್ ಮತ್ತು ವಿಸ್ತೃತ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ಥರ್ಮಾಮೀಟರ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸುವುದು ಅಗತ್ಯವಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ಪಿಸಿಆರ್ ವೈಫಲ್ಯಕ್ಕೆ ಒಂದು ಕಾರಣವಾಗಿದೆ.

ಟಾರ್ಗೆಟ್ ಅನುಕ್ರಮ ರೂಪಾಂತರಗಳು: ಗುರಿ ಅನುಕ್ರಮ ಸಂಭವಿಸಿದಲ್ಲಿ, ರೂಪಾಂತರ ಅಥವಾ ಅಳಿಸುವಿಕೆ, ಮೂಲಮಾದರಿ ಮತ್ತು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಅಥವಾ ಗುರಿ ಅನುಕ್ರಮದ ಕೊರತೆಯಿಂದಾಗಿ, ಪ್ರೈಮರ್ ಮತ್ತು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಪೂರಕ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಕಳೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅದರ ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯು ಯಶಸ್ವಿಯಾಗುವುದಿಲ್ಲ.

● ತಪ್ಪು ಧನಾತ್ಮಕ

ಪಿಸಿಆರ್ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಬ್ಯಾಂಡ್ ಟಾರ್ಗೆಟ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸ್ ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಕಾಣಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ ಅದರ ಬ್ಯಾಂಡ್ ಹೆಚ್ಚು ಅಚ್ಚುಕಟ್ಟಾಗಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನದಾಗಿರುತ್ತದೆ.

ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸವು ಸೂಕ್ತವಲ್ಲ: ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿದ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಅನುಕ್ರಮ ಮತ್ತು ಉದ್ದೇಶರಹಿತ ವರ್ಧನೆ ಅನುಕ್ರಮವು ಏಕರೂಪತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ, ವರ್ಧಿತ ಪಿಸಿಆರ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಉದ್ದೇಶಪೂರ್ವಕವಲ್ಲದ ಅನುಕ್ರಮಗಳಾಗಿವೆ.ಗುರಿಯ ಅನುಕ್ರಮವು ತುಂಬಾ ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ ಅಥವಾ ಪ್ರೈಮರ್ ತುಂಬಾ ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಇದು ತಪ್ಪು ಧನಾತ್ಮಕತೆಗೆ ಗುರಿಯಾಗುತ್ತದೆ.ಮರುವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಬೇಕಾಗಿದೆ.

ಗುರಿ ಅನುಕ್ರಮ ಅಥವಾ ವರ್ಧನೆಯ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಅಡ್ಡ ಮಾಲಿನ್ಯ: ಈ ಮಾಲಿನ್ಯಕ್ಕೆ ಎರಡು ಕಾರಣಗಳಿವೆ: ಮೊದಲನೆಯದಾಗಿ, ಸಂಪೂರ್ಣ ಜೀನೋಮ್ ಅಥವಾ ದೊಡ್ಡ ಭಾಗಗಳ ಅಡ್ಡ-ಮಾಲಿನ್ಯ, ಇದು ತಪ್ಪು ಧನಾತ್ಮಕತೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.ಈ ರೀತಿಯ ತಪ್ಪು ಧನಾತ್ಮಕತೆಯನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನ ವಿಧಾನಗಳಿಂದ ಪರಿಹರಿಸಬಹುದು: ಮಾದರಿ ಗನ್‌ಗೆ ಗುರಿಯ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಉಸಿರಾಡುವುದನ್ನು ತಡೆಯಲು ಅಥವಾ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್‌ನಿಂದ ಸ್ಪ್ಲಾಶ್ ಆಗುವುದನ್ನು ತಡೆಯಲು ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಜಾಗರೂಕರಾಗಿರಿ ಮತ್ತು ಮೃದುವಾಗಿರಿ.ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ತಡೆದುಕೊಳ್ಳಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗದ ಕಿಣ್ವಗಳು ಮತ್ತು ಪದಾರ್ಥಗಳನ್ನು ಹೊರತುಪಡಿಸಿ, ಎಲ್ಲಾ ಕಾರಕಗಳು ಅಥವಾ ಉಪಕರಣಗಳನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ಒತ್ತಡದಿಂದ ಸೋಂಕುರಹಿತಗೊಳಿಸಬೇಕು.ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಕೊಳವೆಗಳು ಮತ್ತು ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಒಂದೇ ಬಾರಿಗೆ ಬಳಸಬೇಕು.ಅಗತ್ಯವಿದ್ದಾಗ, ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೊದಲು, ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿರುವ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲವನ್ನು ನಾಶಮಾಡಲು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಟ್ಯೂಬ್ ಮತ್ತು ಕಾರಕವನ್ನು ನೇರಳಾತೀತ ಕಿರಣಗಳಿಗೆ ಒಡ್ಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ಎರಡನೆಯದಾಗಿ, ವಾಯು ಮಾಲಿನ್ಯದಲ್ಲಿ ಸಣ್ಣ ತುಣುಕುಗಳು.ಈ ಸಣ್ಣ ತುಣುಕುಗಳು ಗುರಿಯ ಅನುಕ್ರಮಕ್ಕಿಂತ ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ, ಆದರೆ ಅವು ಕೆಲವು ಏಕರೂಪತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ.ಇದನ್ನು ಪರಸ್ಪರ ವಿಭಜಿಸಬಹುದು.ಪ್ರೈಮರ್ಗಳನ್ನು ಪೂರೈಸಿದ ನಂತರ, ಪಿಸಿಆರ್ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ವಿಸ್ತರಿಸಬಹುದು, ಇದು ತಪ್ಪು ಧನಾತ್ಮಕ ಉತ್ಪಾದನೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.ಗೂಡಿನ ಪಿಸಿಆರ್ ವಿಧಾನವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಅಥವಾ ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಇದನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು.

● ಅನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಬ್ಯಾಂಡ್ ಕಾಣಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ

ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ನಂತರ ಕಾಣಿಸಿಕೊಂಡ ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳು ನಿರೀಕ್ಷಿತ ಗಾತ್ರ, ಅಥವಾ ದೊಡ್ಡ ಅಥವಾ ಸಣ್ಣ, ಅಥವಾ ಅದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಅಥವಾ ಅದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಸಮಂಜಸವಾಗಿದೆ.ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳ ಹೊರಹೊಮ್ಮುವಿಕೆ: ಮೊದಲನೆಯದಾಗಿ, ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಗುರಿಯ ಅನುಕ್ರಮಕ್ಕೆ ಅಪೂರ್ಣ ಪೂರಕವಾಗಿದೆ, ಅಥವಾ ಪ್ರೈಮರ್‌ನ ಪಾಲಿಮರೀಕರಣವು ಡಿ ಕ್ಲಸ್ಟರ್ ಅನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ.ಎರಡನೆಯದು MG2+ಅಯಾನುಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ತುಂಬಾ ಹೆಚ್ಚಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವು ತುಂಬಾ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ ಮತ್ತು PCR ಚಕ್ರಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯು ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ.ಎರಡನೆಯದಾಗಿ, ಕಿಣ್ವಗಳ ಗುಣಮಟ್ಟ ಮತ್ತು ಪ್ರಮಾಣ.ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ಕೆಲವು ಮೂಲಗಳ ಕಿಣ್ವಗಳು ವಿಶೇಷವಲ್ಲದ ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳಿಗೆ ಗುರಿಯಾಗುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಇತರ ಮೂಲದ ಕಿಣ್ವಗಳು ಸಂಭವಿಸುವುದಿಲ್ಲ.ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ ಕಿಣ್ವಗಳ ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ವರ್ಧನೆಯು ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ.ಪ್ರತಿಕ್ರಮಗಳೆಂದರೆ: ಅಗತ್ಯವಿದ್ದರೆ ಮರು-ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾದ ಆಕರ್ಷಕ.ಕಿಣ್ವದ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ ಅಥವಾ ಇನ್ನೊಂದು ಮೂಲದ ಕಿಣ್ವವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಿ.ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ, ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಸೂಕ್ತವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿಸಿ ಮತ್ತು ಚಕ್ರಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ.ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಸರಿಯಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿಸಿ ಅಥವಾ ಎರಡು ತಾಪಮಾನ ಬಿಂದು ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಿ (93 ° C ಅವನತಿ, ಅನೆಲಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಸುಮಾರು 65 ° C ನಲ್ಲಿ ವಿಸ್ತರಿಸುವುದು).

● ಫ್ಲಾಕಿ ಟೋ ಅಥವಾ ಸ್ಮೀಯರ್ ಟೇಪ್ ಕಾಣಿಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ

ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯು ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ ಅನ್ವಯಿಸಲಾಗಿದೆ ಅಥವಾ ಶೆಲ್ ಅಥವಾ ಕಾರ್ಪೆಟ್ ತರಹದ ಬೆಲ್ಟ್ ಅನ್ನು ತೋರುತ್ತದೆ.ಕಾರಣಕ್ಕಾಗಿ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದ ಕಿಣ್ವಗಳು ಅಥವಾ ಕಿಣ್ವದ ಕಳಪೆ ಗುಣಮಟ್ಟದಿಂದಾಗಿ, dNTP ಸಾಂದ್ರತೆಯು ತುಂಬಾ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ, Mg2+ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ತುಂಬಾ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ, ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವು ತುಂಬಾ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಚಕ್ರಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯು ತುಂಬಾ ಹೆಚ್ಚು.ಪ್ರತಿಕ್ರಮಗಳೆಂದರೆ: ①ಕಿಣ್ವಗಳ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ, ಅಥವಾ ಇನ್ನೊಂದು ಮೂಲದ ಕಿಣ್ವವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಿ.②dNTP ಯ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ ③Mg2+ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಸರಿಯಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ.④ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಿ ಮತ್ತು ಚಕ್ರಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ.

ಸಂಬಂಧಿತ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು

PCR Heroᴹ (ಬಣ್ಣದೊಂದಿಗೆ)

◮ ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿಷ್ಠೆ: ಸಾಮಾನ್ಯ ಟಾಕ್ ಕಿಣ್ವಕ್ಕಿಂತ 6 ಪಟ್ಟು;

◮ ವೇಗವಾದ ವರ್ಧನೆಯ ವೇಗ

◮ ಹೆಚ್ಚು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ

◮ ಹೆಚ್ಚಿನ ವರ್ಧನೆ ದಕ್ಷತೆ

◮ ಪರಿಸರ ಸಹಿಷ್ಣುತೆ ಪ್ರಬಲವಾಗಿದೆ: ಒಂದು ವಾರದವರೆಗೆ 37 ° C ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, 90% ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ;

◮ ಇದು 5'→3' DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು 5'→3' ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, 3'→5' ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯಿಲ್ಲದೆ.

ಪಿಸಿಆರ್ ಸುಲಭ (ವರ್ಣದೊಂದಿಗೆ)

ವಿಶಿಷ್ಟ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ದಕ್ಷತೆಯ Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯು ಹೆಚ್ಚಿನ ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆ, ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ.

RT-qPCR ಸುಲಭ (ಒಂದು ಹಂತ)-SYBR ಗ್ರೀನ್ I

◮ ಒಂದು-ಹಂತದ ಕಿಟ್ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಮತ್ತು qPCR ಅನ್ನು ಒಂದೇ ಟ್ಯೂಬ್‌ನಲ್ಲಿ ಎರಡು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ, ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಆರ್‌ನೇಸ್-ಫ್ರೀ ಡಿಡಿಹೆಚ್ ಅನ್ನು ಮಾತ್ರ ಸೇರಿಸುವ ಅಗತ್ಯವಿದೆ₂O.

◮ ಕಿಟ್ ವೈರಲ್ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಅಥವಾ ಟ್ರೇಸ್ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕವಾಗಿ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಬಹುದು.

◮ ಕಿಟ್ ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಫೋರ್ಜೀನ್ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಕಾರಕವನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಫೋರೆಜೀನ್ ಹಾಟ್‌ಸ್ಟಾರ್ ಟಾಕ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅನ್ನು ವಿಶಿಷ್ಟ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಿ ವರ್ಧನೆಯ ದಕ್ಷತೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ.

◮ ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯು ಹೆಚ್ಚಿನ ಪತ್ತೆ ಸಂವೇದನೆ, ಬಲವಾದ ಉಷ್ಣ ಸ್ಥಿರತೆ ಮತ್ತು ಉತ್ತಮ ಸಹಿಷ್ಣುತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ.

◮ RT-qPCR ಸುಲಭ^TM(ಒಂದು ಹಂತ)-SYBR ಗ್ರೀನ್ I ಕಿಟ್ ROX ಆಂತರಿಕ ಉಲ್ಲೇಖದ ಬಣ್ಣದೊಂದಿಗೆ ಬರುತ್ತದೆ, ಇದು ಸಿಗ್ನಲ್ ಹಿನ್ನೆಲೆ ಮತ್ತು ಬಾವಿಗಳ ನಡುವಿನ ಸಿಗ್ನಲ್ ದೋಷಗಳನ್ನು ತೊಡೆದುಹಾಕಲು ಬಳಸಬಹುದು, ಇದು ಗ್ರಾಹಕರು ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ಉಪಕರಣಗಳ ವಿವಿಧ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸಲು ಅನುಕೂಲಕರವಾಗಿದೆ.

ಆರ್ಟಿ ಸುಲಭ^TMII (ಇದಕ್ಕಾಗಿ ಮಾಸ್ಟರ್ ಪ್ರೀಮಿಕ್ಸ್ ಮೊದಲ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ cDNA ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆರಿಯಲ್ ಟೈಮ್ ಪಿಸಿಆರ್)

2 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನಲ್ಲಿ gDNA ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದಾದ gDNA ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುವ ಸಮರ್ಥ ಸಾಮರ್ಥ್ಯ.

-ಸಮರ್ಥ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಸಿಸ್ಟಮ್, ಇದು ಮೊದಲ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ cDNA ಯ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಪೂರ್ಣಗೊಳಿಸಲು ಕೇವಲ 15 ನಿಮಿಷಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.

-ಸಂಕೀರ್ಣ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳು: ಹೆಚ್ಚಿನ GC ವಿಷಯ ಮತ್ತು ಸಂಕೀರ್ಣ ದ್ವಿತೀಯಕ ರಚನೆಯೊಂದಿಗೆ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳನ್ನು ಸಹ ಹೆಚ್ಚಿನ ದಕ್ಷತೆಯೊಂದಿಗೆ ಹಿಂತಿರುಗಿಸಬಹುದು.

-ಹೈ-ಸೆನ್ಸಿಟಿವಿಟಿ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಸಿಸ್ಟಮ್, pg-ಲೆವೆಲ್ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳು ಸಹ ಉತ್ತಮ ಗುಣಮಟ್ಟದ cDNA ಪಡೆಯಬಹುದು.

-ಹಿಮ್ಮುಖ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಹೆಚ್ಚಿನ ಉಷ್ಣ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಸೂಕ್ತ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ತಾಪಮಾನವು 42℃ ಆಗಿದೆ, ಮತ್ತು ಇದು ಇನ್ನೂ 50℃ ನಲ್ಲಿ ಉತ್ತಮ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.