ಕೋವಿಡ್-19 ಎಂಬುದು ತೀವ್ರವಾದ ಉಸಿರಾಟದ ಸಿಂಡ್ರೋಮ್ ಕೊರೊನಾವೈರಸ್ ಟೈಪ್ 2 ನಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಸಾಂಕ್ರಾಮಿಕ ಕಾಯಿಲೆಯಾಗಿದೆ. ಒಬ್ಬ ವ್ಯಕ್ತಿಯು ಸೋಂಕಿಗೆ ಒಳಗಾದಾಗ, ಸಾಮಾನ್ಯ ಲಕ್ಷಣಗಳೆಂದರೆ ಜ್ವರ, ಕೆಮ್ಮು ಮತ್ತು ಉಸಿರಾಟದ ತೊಂದರೆ.

ಪರೀಕ್ಷೆಗೆ ಬಳಸಲಾಗುವ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ನಾಸೊಫಾರ್ಂಜಿಯಲ್ ಸ್ವ್ಯಾಬ್‌ಗಳು ಅಥವಾ ಓರೊಫಾರ್ಂಜಿಯಲ್ ಸ್ವ್ಯಾಬ್‌ಗಳಿಂದ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬಹುದು.

PCR ಎಂದರೇನು?

ಕರೋನವೈರಸ್ ಪತ್ತೆಯ ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಧಾನವೆಂದರೆ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಚೈನ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್, ಪಿಸಿಆರ್.ಇದು ಆಣ್ವಿಕ ಜೀವಶಾಸ್ತ್ರದಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ.ಇದು ಮಿಲಿಯನ್‌ಗಳಿಂದ ಶತಕೋಟಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ DNA ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ನಕಲಿಸಬಹುದು.

ಹೊಸ ಕರೋನವೈರಸ್ ಬಹಳ ಉದ್ದವಾದ ಸಿಂಗಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಆರ್ಎನ್ಎ ಜೀನೋಮ್ ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ.ಪಿಸಿಆರ್ ಮೂಲಕ ಈ ವೈರಸ್‌ಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು, ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಅಣುಗಳನ್ನು ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ ಮೂಲಕ ಅವುಗಳ ಪೂರಕ ಡಿಎನ್‌ಎ ಅನುಕ್ರಮಗಳಾಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ನಂತರ ಹೊಸದಾಗಿ ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಪ್ರಮಾಣಿತ ಪಿಸಿಆರ್ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳಿಂದ ವರ್ಧಿಸಬಹುದು, ಇದನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಆರ್‌ಟಿ-ಪಿಸಿಆರ್ ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.

RT-PCR ಪ್ರಕ್ರಿಯೆ

ಆರ್ಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ

ಈ ವಿಧಾನವನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲು, ವೈರಲ್ ಆರ್ಎನ್ಎ ಮೂಲಭೂತವಾಗಿ ಹೊರತೆಗೆಯಬೇಕು.ಅನುಕೂಲಕರವಾದ, ವೇಗವಾದ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾದ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆಗಾಗಿ ವಿವಿಧ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಿಟ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು.

ವಾಣಿಜ್ಯ ಕಿಟ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವೈರಲ್ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲು, ಮೊದಲು ಮಾದರಿಯನ್ನು ಮೈಕ್ರೋಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ನಂತರ ಅದನ್ನು ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ.ಈ ಬಫರ್ ಹೆಚ್ಚು ಡಿನ್ಯಾಚರ್ಡ್ ಆಗಿದೆ ಮತ್ತು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಫೀನಾಲ್ ಮತ್ತು ಗ್ವಾನಿಡಿನ್ ಐಸೊಥಿಯೋಸೈನೇಟ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ.ಇದರ ಜೊತೆಯಲ್ಲಿ, ಅಖಂಡ ವೈರಲ್ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಆರ್‌ನೇಸ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್‌ಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಲಿಸಿಸ್ ಬಫರ್‌ನಲ್ಲಿ ಇರುತ್ತವೆ.

ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿದ ನಂತರ, ಮಿಕ್ಸಿಂಗ್ ಟ್ಯೂಬ್ ಅನ್ನು ಪಲ್ಸ್ ಮೂಲಕ ಸುಳಿ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಿ.ನಂತರ ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್ ಒದಗಿಸಿದ ಹೆಚ್ಚು ಡಿನಾಟರಿಂಗ್ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ವೈರಸ್ ಅನ್ನು ಲೈಸ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಮಾದರಿಯನ್ನು ಲೈಸ್ ಮಾಡಿದ ನಂತರ, ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಕ್ಕಾಗಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಮಾದರಿಯನ್ನು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ ಲೋಡ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಈ ವಿಧಾನವು ಘನ ಹಂತದ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ, ಇದರಲ್ಲಿ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತವು ಸಿಲಿಕಾ ಜೆಲ್ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ.

ಸೂಕ್ತವಾದ ಉಪ್ಪು ಮತ್ತು pH ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ, ಆರ್ಎನ್ಎ ಅಣುಗಳು ಸಿಲಿಕಾ ಪೊರೆಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತವೆ.

ಅದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮತ್ತು ಇತರ ಮಾಲಿನ್ಯಕಾರಕಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿಯಾದ ನಂತರ, ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್ ಅನ್ನು ಕ್ಲೀನ್ ಸಂಗ್ರಹಣಾ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ ಹಾಕಿ, ಫಿಲ್ಟರ್ ಅನ್ನು ತ್ಯಜಿಸಿ, ತದನಂತರ ವಾಷಿಂಗ್ ಬಫರ್ ಸೇರಿಸಿ.

ಮೆಂಬರೇನ್ ಮೂಲಕ ವಾಶ್ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಒತ್ತಾಯಿಸಲು ಟ್ಯೂಬ್ ಅನ್ನು ಮತ್ತೆ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿಯಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ.ಇದು ಪೊರೆಯಿಂದ ಉಳಿದಿರುವ ಎಲ್ಲಾ ಕಲ್ಮಶಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುತ್ತದೆ, ಸಿಲಿಕಾ ಜೆಲ್ಗೆ ಆರ್ಎನ್ಎ ಮಾತ್ರ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ.

ಮಾದರಿಯನ್ನು ತೊಳೆದ ನಂತರ, ಟ್ಯೂಬ್ ಅನ್ನು ಕ್ಲೀನ್ ಮೈಕ್ರೋಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ ಹಾಕಿ ಮತ್ತು ಎಲುಷನ್ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.

ನಂತರ ಪೊರೆಯ ಮೂಲಕ ಎಲುಷನ್ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಒತ್ತಾಯಿಸಲು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಎಲುಷನ್ ಬಫರ್ ಸ್ಪಿನ್ ಕಾಲಮ್‌ನಿಂದ ವೈರಲ್ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು, ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಮಾಲಿನ್ಯಕಾರಕಗಳಿಂದ ಮುಕ್ತವಾದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಪಡೆಯುತ್ತದೆ.

ಹಂತ 2

ಮಿಶ್ರ ಸಾಂದ್ರತೆ

ವೈರಲ್ ಆರ್ಎನ್ಎಯನ್ನು ಹೊರತೆಗೆದ ನಂತರ, ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಗಾಗಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಸಿದ್ಧಪಡಿಸುವುದು ಮುಂದಿನ ಹಂತವಾಗಿದೆ.ಈ ಹಂತದಲ್ಲಿ, ಸಾಂದ್ರೀಕರಣವನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಈ ಕೇಂದ್ರೀಕೃತ ಪರಿಹಾರವು ಪ್ರಿಮಿಕ್ಸ್, ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್, ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳು, ಫಾರ್ವರ್ಡ್ ಪ್ರೈಮರ್, ರಿವರ್ಸ್ ಪ್ರೈಮರ್, ಟಕ್‌ಮ್ಯಾನ್ ಪ್ರೋಬ್ ಮತ್ತು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಪ್ರಿಮಿಕ್ಸ್ಡ್ ಸಾಂದ್ರೀಕೃತ ಪರಿಹಾರವಾಗಿದೆ.

ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಈ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಪೂರ್ಣಗೊಳಿಸಲು, RNA ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳನ್ನು ನಾಡಿ ಸುಳಿಯ ಮೂಲಕ ಬೆರೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗೆ ಲೋಡ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.PCR ಪ್ಲೇಟ್ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 96 ಬಾವಿಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಅನೇಕ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಬಹುದು.

ಹಂತ 3

ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆ

ಮುಂದೆ, ಪಿಸಿಆರ್ ಯಂತ್ರದಲ್ಲಿ ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಇರಿಸಿ, ಇದು ಮೂಲಭೂತವಾಗಿ ಥರ್ಮಲ್ ಸೈಕ್ಲರ್ ಆಗಿದೆ.

RdrRP ಜೀನ್, E ಜೀನ್ ಮತ್ತು N ಜೀನ್‌ನಲ್ಲಿ ಗುರಿ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ವರ್ಧಿಸುವ ಮೂಲಕ 2019 ರ ಕಾದಂಬರಿ ಕೊರೊನಾವೈರಸ್ ಅನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ನೈಜ-ಸಮಯದ RT-PCR ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಗುರಿ ಜೀನ್‌ನ ಆಯ್ಕೆಯು ಪ್ರೈಮರ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಬ್ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿರುತ್ತದೆ.

RT-PCR ನ ಮೊದಲ ಹಂತವು ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಆಗಿದೆ.ಪೂರಕ DNA ಯ ಮೊದಲ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಅನ್ನು ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು PCR ರಿವರ್ಸ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ನಿಂದ ಪ್ರಾರಂಭಿಸಲ್ಪಡುತ್ತದೆ, ಇದು ವೈರಲ್ RNA ಜೀನೋಮ್‌ನ ಪೂರಕ ಭಾಗಕ್ಕೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ.ನಂತರ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರೈಮರ್‌ನ 3′ಅಂತ್ಯಕ್ಕೆ ಸೇರಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ವೈರಲ್ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಗೆ ಪೂರಕವಾದ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸುತ್ತದೆ.ಈ ಹಂತದ ತಾಪಮಾನ ಮತ್ತು ಅವಧಿಯು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು, ಗುರಿ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಮತ್ತು ಬಳಸಿದ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ ಅನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿರುತ್ತದೆ.

ಮುಂದೆ, ಆರಂಭಿಕ ಡಿನಾಟರೇಶನ್ ಹಂತವನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಆರ್ಎನ್ಎ-ಡಿಎನ್ಎ ಹೈಬ್ರಿಡ್ನ ಡಿನಾಟರೇಶನ್ಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲು ಈ ಹಂತವು ಅವಶ್ಯಕವಾಗಿದೆ.ಅದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ ಅನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಪಿಸಿಆರ್ ಉಷ್ಣ ಚಕ್ರಗಳ ಸರಣಿಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ.ಪ್ರತಿ ಚಕ್ರವು ಡಿನಾಟರೇಶನ್, ಅನೆಲಿಂಗ್ ಮತ್ತು ವಿಸ್ತರಣೆ ಹಂತಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ.

ಡಿನಾಟರೇಶನ್ ಹಂತವು ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಚೇಂಬರ್ ಅನ್ನು 95 ಡಿಗ್ರಿ ಸೆಲ್ಸಿಯಸ್‌ಗೆ ಬಿಸಿಮಾಡುವುದನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನ ಡಿನಾಟರೇಶನ್‌ಗಾಗಿ ಅದನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ.

ಮುಂದಿನ ಹಂತದಲ್ಲಿ, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಉಷ್ಣತೆಯು 58 ಡಿಗ್ರಿ ಸೆಲ್ಸಿಯಸ್‌ಗೆ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಫಾರ್ವರ್ಡ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗೆ ಅದರ ಏಕ-ತಂತಿಯ DNA ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನ ಪೂರಕ ಭಾಗಕ್ಕೆ ಅನೆಲ್ ಮಾಡಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ.ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವು ನೇರವಾಗಿ ಪ್ರೈಮರ್ನ ಉದ್ದ ಮತ್ತು ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿರುತ್ತದೆ.

ವಿಸ್ತರಣಾ ಹಂತದಲ್ಲಿ, ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್‌ಗೆ ಪೂರಕವಾಗಿರುವ ಹೊಸ ಡಿಎನ್‌ಎ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಅನ್ನು ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸುತ್ತದೆ.ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮಿಶ್ರಣದಿಂದ 5′ ರಿಂದ 3′ ದಿಕ್ಕಿನಲ್ಲಿ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗೆ ಪೂರಕವಾದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ.ಈ ಹಂತದ ಉಷ್ಣತೆಯು ಬಳಸಿದ DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಅನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿರುತ್ತದೆ.

ಮೊದಲ ಚಕ್ರದ ನಂತರ, ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ DNA ಗುರಿಯನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.

ನಂತರ, ಎರಡನೇ ಚಕ್ರವನ್ನು ನಮೂದಿಸಿ.ಎರಡು ಏಕ-ತಂತಿಯ ಡಿಎನ್‌ಎ ಅಣುಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ನಿರಾಕರಿಸಲಾಗಿದೆ.

ಮುಂದಿನ ಹಂತದಲ್ಲಿ, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಉಷ್ಣತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿ ಏಕ-ಎಳೆಯ ಡಿಎನ್‌ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗೆ ಅನೆಲ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಟಾಕ್-ಮ್ಯಾನ್ ಪ್ರೋಬ್ ಅನ್ನು ಗುರಿಯ ಡಿಎನ್‌ಎಯ ಪೂರಕ ಭಾಗಕ್ಕೆ ಅನೆಲ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.

TaqMan ತನಿಖೆಯು ಆಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ ತನಿಖೆಯ 5′ಅಂತ್ಯಕ್ಕೆ ಕೋವೆಲೆಂಟ್ ಲಿಂಕ್ ಆಗಿರುವ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ.ಸೈಕ್ಲರ್‌ನ ಬೆಳಕಿನ ಮೂಲದಿಂದ ಉತ್ಸುಕರಾದಾಗ, ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ ಪ್ರತಿದೀಪಕವನ್ನು ಹೊರಸೂಸುತ್ತದೆ.ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ತನಿಖೆಯು 3′ಅಂತ್ಯದಲ್ಲಿ ಕ್ವೆಂಚರ್‌ನಿಂದ ಕೂಡಿದೆ.ಕ್ವೆಂಚರ್‌ಗೆ ವರದಿಗಾರ ಜೀನ್‌ನ ಸಾಮೀಪ್ಯವು ಪ್ರತಿದೀಪಕವನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚುವುದನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ.

ವಿಸ್ತರಣೆಯ ಹಂತದಲ್ಲಿ, ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಹೊಸ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಅನ್ನು ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸುತ್ತದೆ.ಪಾಲಿಮರೇಸ್ TaqMan ತನಿಖೆಯನ್ನು ತಲುಪಿದಾಗ, ಅದರ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ 5′ನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯು ತನಿಖೆಯನ್ನು ಸೀಳುತ್ತದೆ, ಕ್ವೆಂಚರ್‌ನಿಂದ ಬಣ್ಣವನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸುತ್ತದೆ.

PCR ನ ಪ್ರತಿ ಚಕ್ರದೊಂದಿಗೆ, ಹೆಚ್ಚು ಡೈ ಅಣುಗಳು ಬಿಡುಗಡೆಯಾಗುತ್ತವೆ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ ಆಂಪ್ಲಿಕಾನ್‌ಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ತೀವ್ರತೆಯು ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ.

ಈ ವಿಧಾನವು ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿರುವ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಅನುಕ್ರಮದ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಅಂದಾಜು ಮಾಡಲು ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ.ಪ್ರತಿ ಚಕ್ರದಲ್ಲಿ ಡಬಲ್-ಸ್ಟ್ರಾಂಡೆಡ್ DNA ತುಣುಕುಗಳ ಸಂಖ್ಯೆ ದ್ವಿಗುಣಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.ಆದ್ದರಿಂದ, PCR ಅನ್ನು ಚಿಕ್ಕ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲು ಬಳಸಬಹುದು.

ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಸಿಗ್ನಲ್ ಅನ್ನು ಅಳೆಯಲು, ಟಂಗ್‌ಸ್ಟನ್ ಹ್ಯಾಲೊಜೆನ್ ಲ್ಯಾಂಪ್, ಎಕ್ಸಿಟೇಶನ್ ಫಿಲ್ಟರ್, ರಿಫ್ಲೆಕ್ಟರ್, ಲೆನ್ಸ್, ಎಮಿಷನ್ ಫಿಲ್ಟರ್ ಮತ್ತು ಚಾರ್ಜ್ ಕಪಲ್ಡ್ ಡಿವೈಸ್-ಯೂಸ್ CCD ಕ್ಯಾಮೆರಾ.

ಹಂತ 4 ಪತ್ತೆ

ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಸಿಗ್ನಲ್ ಅನ್ನು ಅಳೆಯಲು, ಟಂಗ್‌ಸ್ಟನ್ ಹ್ಯಾಲೊಜೆನ್ ಲ್ಯಾಂಪ್, ಎಕ್ಸಿಟೇಶನ್ ಫಿಲ್ಟರ್, ರಿಫ್ಲೆಕ್ಟರ್, ಲೆನ್ಸ್, ಎಮಿಷನ್ ಫಿಲ್ಟರ್ ಮತ್ತು ಚಾರ್ಜ್ ಕಪಲ್ಡ್ ಡಿವೈಸ್-ಯೂಸ್ CCD ಕ್ಯಾಮೆರಾ.

ದೀಪದಿಂದ ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಿದ ಬೆಳಕು ಪ್ರತಿಫಲಕದಿಂದ ಪ್ರತಿಫಲಿಸುತ್ತದೆ, ಕಂಡೆನ್ಸರ್ ಲೆನ್ಸ್ ಮೂಲಕ ಹಾದುಹೋಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿ ರಂಧ್ರದ ಮಧ್ಯಭಾಗಕ್ಕೆ ಕೇಂದ್ರೀಕೃತವಾಗಿರುತ್ತದೆ.ನಂತರ ರಂಧ್ರದಿಂದ ಹೊರಸೂಸುವ ಪ್ರತಿದೀಪಕವು ಕನ್ನಡಿಯಿಂದ ಪ್ರತಿಫಲಿಸುತ್ತದೆ, ಹೊರಸೂಸುವಿಕೆಯ ಫಿಲ್ಟರ್ ಮೂಲಕ ಹಾದುಹೋಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸಿಸಿಡಿ ಕ್ಯಾಮೆರಾದಿಂದ ಪತ್ತೆ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.ಪ್ರತಿ PCR ಚಕ್ರದಲ್ಲಿ, ಸ್ವಯಂ-ಪ್ರಚೋದಿತ ಫ್ಲೋರೋಫೋರ್ ಬೆಳಕನ್ನು CCD ಯಿಂದ ಕಂಡುಹಿಡಿಯಬಹುದು.

ಇದು ಸೆರೆಹಿಡಿಯಲಾದ ಬೆಳಕನ್ನು ಡಿಜಿಟಲ್ ಡೇಟಾಗೆ ಪರಿವರ್ತಿಸುತ್ತದೆ.ಈ ವಿಧಾನವನ್ನು ನೈಜ-ಸಮಯದ ಪಿಸಿಆರ್ ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಇದು ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಪ್ರಗತಿಯ ನೈಜ-ಸಮಯದ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆಯನ್ನು ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ.