ನಾವು ಅನುಭವಿ ತಯಾರಕರಾಗಿದ್ದೇವೆ.ಬಿಗ್ ಡಿಸ್ಕೌಂಟಿಂಗ್ ಚೀನಾ ಹೈ ಸೆನ್ಸಿಟಿವಿಟಿ ಒನ್-ಸ್ಟೆಪ್ ಪ್ರೋಬ್ ಆರ್ಟಿ-ಗಾಗಿ ಅದರ ಮಾರುಕಟ್ಟೆಯ ನಿರ್ಣಾಯಕ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣಗಳಲ್ಲಿ ಬಹುಮತವನ್ನು ಗೆಲ್ಲುವುದು.Qpcrಕಿಟ್ ವಿ 2, ಗುಣಮಟ್ಟವು ಕಾರ್ಖಾನೆಯ ಜೀವನ, ಗ್ರಾಹಕರ ಬೇಡಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸುವುದು ಕಂಪನಿಯ ಉಳಿವು ಮತ್ತು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯ ಮೂಲವಾಗಿದೆ, ನಾವು ಪ್ರಾಮಾಣಿಕತೆ ಮತ್ತು ಉತ್ತಮ ನಂಬಿಕೆಯ ಕಾರ್ಯ ವೈಖರಿಯನ್ನು ಅನುಸರಿಸುತ್ತೇವೆ, ನಿಮ್ಮ ಬರುವಿಕೆಯನ್ನು ಎದುರು ನೋಡುತ್ತಿದ್ದೇವೆ!
ನಾವು ಅನುಭವಿ ತಯಾರಕರಾಗಿದ್ದೇವೆ.ಅದರ ಮಾರುಕಟ್ಟೆಯ ನಿರ್ಣಾಯಕ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣಗಳಲ್ಲಿ ಬಹುಮತವನ್ನು ಗೆಲ್ಲುವುದುಚೀನಾ ಟಾಕ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್, Qpcr, ನಮ್ಮ ಕಂಪನಿ ಭರವಸೆ: ಸಮಂಜಸವಾದ ಬೆಲೆಗಳು, ಕಡಿಮೆ ಉತ್ಪಾದನಾ ಸಮಯ ಮತ್ತು ತೃಪ್ತಿದಾಯಕ ಮಾರಾಟದ ನಂತರದ ಸೇವೆ, ನೀವು ಬಯಸಿದ ಯಾವುದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ನಮ್ಮ ಕಾರ್ಖಾನೆಗೆ ಭೇಟಿ ನೀಡಲು ನಾವು ನಿಮ್ಮನ್ನು ಸ್ವಾಗತಿಸುತ್ತೇವೆ.ಈಗ ನಾವು ಒಟ್ಟಿಗೆ ಆಹ್ಲಾದಕರ ಮತ್ತು ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ವ್ಯವಹಾರವನ್ನು ಹೊಂದಲು ಬಯಸುತ್ತೇವೆ !!!

ವಿವರಣೆಗಳು

ಈ ಕಿಟ್ ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಆರ್‌ಟಿ-ಕ್ಯೂಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗಾಗಿ ಕಲ್ಚರ್ಡ್ ಸೆಲ್ ಸ್ಯಾಂಪಲ್‌ಗಳಿಂದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಬಿಡುಗಡೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಸಮಯ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುವ ಮತ್ತು ಶ್ರಮದಾಯಕ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುತ್ತದೆ.ಆರ್ಎನ್ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಕೇವಲ 7 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಪಡೆಯಬಹುದು.ಕಿಟ್‌ನಿಂದ ಒದಗಿಸಲಾದ 5×ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಆರ್‌ಟಿ ಮಿಕ್ಸ್ ಮತ್ತು 2×ಡೈರೆಕ್ಟ್ qPCR ಮಿಕ್ಸ್-SYBR ಕಾರಕಗಳು ನೈಜ-ಸಮಯದ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಪಡೆಯಬಹುದು.

5×ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಆರ್‌ಟಿ ಮಿಕ್ಸ್ ಮತ್ತು 2×ಡೈರೆಕ್ಟ್ qPCR ಮಿಕ್ಸ್-SYBR ಪ್ರಬಲ ಪ್ರತಿರೋಧಕ ಸಹಿಷ್ಣುತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ, ಮತ್ತು ಮಾದರಿಗಳ ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು ನೇರವಾಗಿ RT-qPCR ಗೆ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನಂತೆ ಬಳಸಬಹುದು.ಈ ಕಿಟ್ ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಹೈ-ಅಫಿನಿಟಿ ಫೋರ್ಜೀನ್ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ ಮತ್ತು ಹಾಟ್ ಡಿ-ಟಾಕ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್, ಡಿಎನ್‌ಟಿಪಿಗಳು, ಎಂಜಿಸಿಎಲ್ ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ₂, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಬಫರ್, ಪಿಸಿಆರ್ ಆಪ್ಟಿಮೈಜರ್ ಮತ್ತು ಸ್ಟೆಬಿಲೈಸರ್.

ವಿಶೇಷಣಗಳು

200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns

ಕಿಟ್ ಘಟಕಗಳು

ವೈಶಿಷ್ಟ್ಯಗಳು ಮತ್ತು ಅನುಕೂಲಗಳು

■ ಸರಳ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ : ಸೆಲ್ ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಆರ್‌ಟಿ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದೊಂದಿಗೆ, ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಕೇವಲ 7 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಪಡೆಯಬಹುದು.

■ ಮಾದರಿ ಬೇಡಿಕೆಯು ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ, 10 ಸೆಲ್‌ಗಳಷ್ಟು ಕಡಿಮೆ ಪರೀಕ್ಷೆ ಮಾಡಬಹುದು.

■ ಹೆಚ್ಚಿನ ಥ್ರೋಪುಟ್: ಇದು 384, 96, 24, 12, 6-ವೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಿದ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಪತ್ತೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

■ DNA ಎರೇಸರ್ ಬಿಡುಗಡೆಯಾದ ಜೀನೋಮ್‌ಗಳನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು, ನಂತರದ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ಮೇಲೆ ಪ್ರಭಾವವನ್ನು ಬಹಳವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

■ ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ RT ಮತ್ತು qPCR ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಎರಡು-ಹಂತದ RT-PCR ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಶನ್ ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು PCR ಹೆಚ್ಚು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು RT-qPCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳಿಗೆ ಹೆಚ್ಚು ನಿರೋಧಕವಾಗಿದೆ.

ಕಿಟ್ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್

ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ವ್ಯಾಪ್ತಿ: ಸುಸಂಸ್ಕೃತ ಜೀವಕೋಶಗಳು.

- ಮಾದರಿ ಲೈಸಿಸ್‌ನಿಂದ ಬಿಡುಗಡೆಯಾದ RNA: ಈ ಕಿಟ್‌ನ RT-qPCR ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗೆ ಮಾತ್ರ ಅನ್ವಯಿಸುತ್ತದೆ.

- ಕಿಟ್ ಅನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಉದ್ದೇಶಗಳಿಗಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು: ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ, siRNA-ಮಧ್ಯಸ್ಥ ಜೀನ್ ಸೈಲೆನ್ಸಿಂಗ್ ಪರಿಣಾಮದ ಪರಿಶೀಲನೆ, ಡ್ರಗ್ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್, ಇತ್ಯಾದಿ.

ರೇಖಾಚಿತ್ರ

ಸಂಗ್ರಹಣೆ ಮತ್ತು ಶೆಲ್ಫ್ ಜೀವನ

ಈ ಕಿಟ್‌ನ ಭಾಗ I ಅನ್ನು 4℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು;ಭಾಗ II ಅನ್ನು -20℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು.

Foregene Protease Plus II ಅನ್ನು 4℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು, -20℃ ನಲ್ಲಿ ಫ್ರೀಜ್ ಮಾಡಬೇಡಿ.

ಕಾರಕ 2×ಡೈರೆಕ್ಟ್ qPCR ಮಿಕ್ಸ್-SYBR ಅನ್ನು ಕತ್ತಲೆಯಲ್ಲಿ -20℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು;ಆಗಾಗ್ಗೆ ಬಳಸಿದರೆ, ಅಲ್ಪಾವಧಿಯ ಸಂಗ್ರಹಣೆಗಾಗಿ ಇದನ್ನು 4℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬಹುದು (10 ದಿನಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸಿ).ನಾವು ಅನುಭವಿ ತಯಾರಕರಾಗಿದ್ದೇವೆ.Wining the majority in the crucial certifications of its market for Big discounting China High Sensitivity One-Step Probe Rt-Qpcr Kit V2, ಗುಣಮಟ್ಟವು ಕಾರ್ಖಾನೆಯ ಜೀವನ , ಗ್ರಾಹಕರ ಬೇಡಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸಿ ಕಂಪನಿಯ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯ ಮೂಲವಾಗಿದೆ, We adhere to honesty and good faith working attitude, looking forward to your coming !
ದೊಡ್ಡ ರಿಯಾಯಿತಿಚೀನಾ ಟಾಕ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್, Qpcr, ನಮ್ಮ ಕಂಪನಿ ಭರವಸೆ: ಸಮಂಜಸವಾದ ಬೆಲೆಗಳು, ಕಡಿಮೆ ಉತ್ಪಾದನಾ ಸಮಯ ಮತ್ತು ತೃಪ್ತಿದಾಯಕ ಮಾರಾಟದ ನಂತರದ ಸೇವೆ, ನೀವು ಬಯಸಿದ ಯಾವುದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ನಮ್ಮ ಕಾರ್ಖಾನೆಗೆ ಭೇಟಿ ನೀಡಲು ನಾವು ನಿಮ್ಮನ್ನು ಸ್ವಾಗತಿಸುತ್ತೇವೆ.ಈಗ ನಾವು ಒಟ್ಟಿಗೆ ಆಹ್ಲಾದಕರ ಮತ್ತು ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ವ್ಯವಹಾರವನ್ನು ಹೊಂದಲು ಬಯಸುತ್ತೇವೆ !!!

QuickEಆಸಿTM Cell Direct RT-qಪಿಸಿಆರ್ Kit -ತಕ್ಮ್an

Cat.No.DRT-01021/01022

≤ 1000,000 ಸೆಲ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸೆಲ್ ನೇರ RT-qPCR ಗೆ

ಉತ್ಪನ್ನ ಪರಿಚಯ

ಈ ಉತ್ಪನ್ನವು ಆರ್‌ಟಿ-ಕ್ಯೂಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗಾಗಿ ಕಲ್ಚರ್ಡ್ ಸೆಲ್ ಸ್ಯಾಂಪಲ್‌ಗಳಿಂದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಬಿಡುಗಡೆ ಮಾಡಲು ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಸಮಯ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುವ ಮತ್ತು ಶ್ರಮದಾಯಕ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಕೇವಲ 7 ನಿಮಿಷಗಳು, 5× ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಆರ್‌ಟಿ ಮಿಕ್ಸ್, 2× ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಕ್ಯೂಪಿಸಿಆರ್ ಮಿಕ್ಸ್-ಟಾಕ್‌ಮ್ಯಾನ್ ಮೂಲಕ ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಬಹುದು.

5× ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಆರ್‌ಟಿ ಮಿಕ್ಸ್ ಮತ್ತು 2× ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಕ್ಯೂಪಿಸಿಆರ್ ಮಿಕ್ಸ್-ತಕ್ಮನ್ ಪ್ರಬಲವಾದ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಸಹಿಷ್ಣುತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ ಮತ್ತು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನಂತೆ ಅಳೆಯಲು ಮಾದರಿಯ ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಮರ್ಥ ರಿವರ್ಸಲ್ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಮಾಡಬಹುದು.ಕಾರಕವು ಫೋರ್ಜೀನ್ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್, ಹಾಟ್ ಡಿ-ಟಾಕ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್, ಡಿಎನ್‌ಟಿಪಿಗಳು, ಎಂಜಿಸಿಎಲ್ ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ₂, ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಬಫರ್, PCR ಆಪ್ಟಿಮೈಜರ್ ಮತ್ತು ಸ್ಟೆಬಿಲೈಸರ್, ಇದು ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಮತ್ತು ಸುಲಭವಾಗಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಬಳಸಬಹುದಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆ, ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರತೆಯ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.

ಉತ್ಪನ್ನ ಲಕ್ಷಣಗಳು

ಸರಳ, ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಸೆಲ್ ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಆರ್‌ಟಿ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲು 7 ನಿಮಿಷಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.

ಮಾದರಿಯ ಅವಶ್ಯಕತೆಗಳು ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಗಕ್ಕಾಗಿ ಕನಿಷ್ಠ 10 ಕಲ್ಚರ್ಡ್ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು.

384, 96, 24, 12, ಮತ್ತು 6-ವೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಂತಹ ಕಲ್ಚರ್ಡ್ ಕೋಶಗಳ ತ್ವರಿತ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಸ್ವಾಧೀನಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಥ್ರೋಪುಟ್.

DNA ಎರೇಸರ್ ಬಿಡುಗಡೆಯಾದ ಜೀನೋಮ್‌ಗಳನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುತ್ತದೆ, ನಂತರದ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ಮೇಲೆ ಪ್ರಭಾವವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ RT ಮತ್ತು qPCR ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳು ಎರಡು-ಹಂತದ RT-PCR ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾದ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್, ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ಬಲವಾದ RT-qPCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಸಹಿಷ್ಣುತೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ.

ಕಿಟ್ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್

ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ವ್ಯಾಪ್ತಿ: ಸುಸಂಸ್ಕೃತ ಕೋಶಗಳು.

ಸ್ಯಾಂಪಲ್ ಲೈಸಿಸ್ RNAಯನ್ನು ಅರ್ಥೈಸಲಾಗಿದೆ: ಎರಡು-ಹಂತದ RT-qPCR ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಮಾತ್ರ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಕಿಟ್‌ಗಳನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಉದ್ದೇಶಗಳಿಗಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು: ಜೀನ್ ನಿಯಂತ್ರಕ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ, ಆಲೀಲ್ ಪರೀಕ್ಷೆ, ಡ್ರಗ್ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್, ಇತ್ಯಾದಿ.

ಕಿಟ್ ಮಿತಿಗಳು

ವರ್ಧಿತ ತುಣುಕುಗಳು ≤ 300 ಬಿಪಿ.

ಕೋಶಗಳನ್ನು ಹೊಸದಾಗಿ ಬೆಳೆಸಲು ಕಿಟ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಉತ್ಪನ್ನ ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿಯಂತ್ರಣ

FOREGENE ನ ಒಟ್ಟು ಗುಣಮಟ್ಟ ನಿರ್ವಹಣಾ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಪ್ರಕಾರ, ಸೆಲ್ ಡೈರೆಕ್ಟ್ RT-qPCR ಸರಣಿಯ ಕಿಟ್‌ಗಳ ಪ್ರತಿ ಬ್ಯಾಚ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತಿ ಬ್ಯಾಚ್‌ನ ಕಿಟ್‌ಗಳ ಗುಣಮಟ್ಟದ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹತೆ ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಹಲವು ಬಾರಿ ಕಟ್ಟುನಿಟ್ಟಾಗಿ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಕಿಟ್ ವಿಷಯಗಳು

*:ಸೆಲ್ ಲಿಸಿಸ್, 5×ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಆರ್ಟಿ ಮಿಕ್ಸ್, 2× ಡೈರೆಕ್ಟ್ qPCR ಮಿಕ್ಸ್-ತಕ್ಮನ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ಖರೀದಿಸಬಹುದು, ವಿವರಗಳನ್ನು ಅನುಬಂಧ 1 ರಲ್ಲಿ ನೀಡಲಾಗಿದೆ (ಪುಟ 13).

ಶೇಖರಣಾ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು

1. ಶಿಪ್ಪಿಂಗ್ ಷರತ್ತುಗಳು

ಕಿಟ್ <4 °C ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿದೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನದ ಐಸ್ ಪ್ಯಾಕ್ ಬಾಕ್ಸ್ ಸಾಗಣೆಯ ಸಂಪೂರ್ಣ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆ.

2. ಶೇಖರಣಾ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು

ಭಾಗ I ಅನ್ನು 4 ° C ಮತ್ತು ಭಾಗ II ಅನ್ನು -20 ° C ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ.

Foregene Protease Plus II ಅನ್ನು 4 ° C ನಲ್ಲಿ ಶೇಖರಿಸಿಡಬೇಕು, -20 ° C ನಲ್ಲಿ ಫ್ರೀಜ್ ಮಾಡಬಾರದು.

ಕಾರಕ 2× ಡೈರೆಕ್ಟ್ qPCR Mix-Taqman ಅನ್ನು -20 ° C ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಅಥವಾ ಆಗಾಗ್ಗೆ ಬಳಸಿದರೆ (10 ದಿನಗಳಲ್ಲಿ) ಅಲ್ಪಾವಧಿಯ ಬಳಕೆಗಾಗಿ 4 ° C ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಕಿಟ್ ಘಟಕ ಮಾಹಿತಿ

ಬಫರ್ CL: ಜೀವಕೋಶದ ಲೈಸಿಸ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗೆ ಅಗತ್ಯವಾದ ಪರಿಸರವನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ.

ಬಫರ್ ST: ನಂತರದ RT ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಲೈಸೇಟ್‌ನಲ್ಲಿರುವ ಸಕ್ರಿಯ ವಸ್ತುವನ್ನು ಕೊನೆಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ.

ಡಿಎನ್ಎ ಎರೇಸರ್: ಡಿಎನ್ಎ ಹೋಗಲಾಡಿಸುವವನು, ನಂತರದ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಮೇಲೆ ಜೀನೋಮ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುವ ಪರಿಣಾಮ.

5× ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಆರ್‌ಟಿ ಮಿಕ್ಸ್: ಹೆಚ್ಚಿನ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಅಫಿನಿಟಿ ಫೋರ್ಜೀನ್ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್, ಆರ್‌ನೇಸ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್, ಡಿಎನ್‌ಟಿಪಿಗಳು, ಸ್ಟೇಬಿಲೈಸರ್‌ಗಳು, ಎನ್‌ಹಾನ್ಸರ್‌ಗಳು, ಆಪ್ಟಿಮೈಜರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಆಪ್ಟಿಮಲ್ ಅಲೈನ್‌ಮೆಂಟ್ (ರ್ಯಾಂಡಮ್ ಪ್ರೈಮರ್, ಒಲಿಗೊ(ಡಿಟಿ) ಒಳಗೊಂಡಿದೆ.₁₈ಪ್ರೈಮರ್).

ಫೋರ್ಜೀನ್ ಪ್ರೋಟೀಸ್ ಪ್ಲಸ್ II: ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ, ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳನ್ನು ಬಿಡುಗಡೆ ಮಾಡಲು ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಲೈಸ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.

2× ನೇರ qPCR ಮಿಕ್ಸ್-ತಕ್ಮನ್: ಈ ಕಾರಕವು ಹಾಟ್ D-Taq DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್, dNTPs, MgCl ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ₂, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಬಫರ್, ಪಿಸಿಆರ್ ಆಪ್ಟಿಮೈಜರ್ ಮತ್ತು ಸ್ಟೆಬಿಲೈಜರ್.

20× ROX ರೆಫರೆನ್ಸ್ ಡೈ: ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ABI, ಸ್ಟ್ರಾಟಜೀನ್ ಮತ್ತು ಇತರ ಕಂಪನಿಗಳ ರಿಯಲ್ ಟೈಮ್ PCR ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಉಪಕರಣಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, PCR ಡೋಸಿಂಗ್ ದೋಷಗಳಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ PCR ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳ ನಡುವಿನ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಸರಿಹೊಂದಿಸಲು ಇದನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ವಿಭಿನ್ನ ಉಪಕರಣಗಳಿಗೆ ಅಗತ್ಯವಿರುವ 20× ROX ರೆಫರೆನ್ಸ್ ಡೈ ಸಾಂದ್ರತೆಯು ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಉಪಕರಣದ ಶಿಫಾರಸು ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಪ್ರಕಾರ ಬಳಕೆದಾರರು ಅದನ್ನು ಸೇರಿಸಬಹುದು.

RNase-ಮುಕ್ತ ddH₂O: ಎರಡು-ಹಂತದ RT-qPCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗಾಗಿ RNase-ಮುಕ್ತ ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕ ಅಲ್ಟ್ರಾ ಶುದ್ಧ ನೀರು.

ಮುನ್ನಚ್ಚರಿಕೆಗಳು:(ಕಿಟ್ ಬಳಸುವ ಮೊದಲು ಮುನ್ನೆಚ್ಚರಿಕೆಗಳನ್ನು ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ಓದಲು ಮರೆಯದಿರಿ)

ಮಾದರಿಗಳ ನಡುವೆ ಅಡ್ಡ-ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಪ್ರಯೋಗದ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ವಿಧಾನಕ್ಕೆ ಗಮನ ಕೊಡಿ.

RNase ಮಾಲಿನ್ಯ ಮತ್ತು RNA ಅವನತಿಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪರಿಸರ ಮತ್ತು ಪಾತ್ರೆಗಳ ಶುಚಿತ್ವಕ್ಕೆ ಗಮನ ಕೊಡಿ.

ತಾಜಾ ಅಥವಾ ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಸಂರಕ್ಷಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಜೀವಕೋಶದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಿ ಮತ್ತು ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಫ್ರೀಜ್-ಕರಗಿದ ಜೀವಕೋಶದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಎಂದಿಗೂ ಬಳಸಬೇಡಿ.

5× ಡೈರೆಕ್ಟ್ qPCR ಮಿಕ್ಸ್,2× ಡೈರೆಕ್ಟ್ qPCR ಮಿಕ್ಸ್-ತಕ್ಮನ್ ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಫ್ರೀಜ್-ಲೇಪವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಬೇಕು, ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೆ ಇದು ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ದಕ್ಷತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.

ತಯಾರಿಪಡಿತರಮೊದಲುಕಾರ್ಯಾಚರಣೆ

ಈ ಕಿಟ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೊದಲು ಸೂಚನೆಗಳನ್ನು ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ಓದಲು ಮರೆಯದಿರಿ.ಸೆಲ್ ಡೈರೆಕ್ಟ್ RT-qPCR ಕಿಟ್ ಸರಳ, ಅನುಕೂಲಕರ ಮತ್ತು ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಲು ವೇಗವಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು ಸೂಚನೆಗಳು ಸಂಪೂರ್ಣ ಕಿಟ್ ಮತ್ತು ಅದನ್ನು ಸರಿಯಾಗಿ ಬಳಸುವುದು ಹೇಗೆ ಎಂಬುದರ ಕುರಿತು ಸಂಪೂರ್ಣ ಮಾಹಿತಿಯನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ.ದಯವಿಟ್ಟು ಬಳಸುವ ಮೊದಲು ಅಗತ್ಯ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಸಾಮಗ್ರಿಗಳು ಮತ್ತು ಸಲಕರಣೆಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ.

ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ವಸ್ತುಗಳು ಮತ್ತು ಉಪಕರಣಗಳು

◆ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಕೋಶಗಳು.

◆ 1.5 ಮಿಲಿ ಅಥವಾ 2 ಮಿಲಿ, RNase-/DNase-ಮುಕ್ತ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್, RNase-/DNase-ಮುಕ್ತ ತುದಿ, 0.2 ಮಿಲಿ ಸ್ಟೆರೈಲ್ qPCR ಟ್ಯೂಬ್.

◆ qPCR ಯಂತ್ರ, ಪೈಪೆಟ್, ಟೇಬಲ್‌ಟಾಪ್ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ (≥13,400×g) (ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಅಗತ್ಯಗಳನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ), ಇತ್ಯಾದಿ.

ಸುರಕ್ಷತೆ

◆ ಈ ಉತ್ಪನ್ನವು ವೈಜ್ಞಾನಿಕ ಸಂಶೋಧನೆ ಉದ್ದೇಶಗಳಿಗಾಗಿ ಮಾತ್ರ, ದಯವಿಟ್ಟು ಇದನ್ನು ಔಷಧೀಯ, ವೈದ್ಯಕೀಯ, ಆಹಾರ ಮತ್ತು ಸೌಂದರ್ಯವರ್ಧಕ ಉದ್ದೇಶಗಳಿಗಾಗಿ ಬಳಸಬೇಡಿ.

◆ ರಾಸಾಯನಿಕಗಳನ್ನು ಬಳಸುವಾಗ, ಸೂಕ್ತವಾದ ಲ್ಯಾಬ್ ಬಟ್ಟೆಗಳು, ಕೈಗವಸುಗಳು, ರಕ್ಷಣಾತ್ಮಕ ಕನ್ನಡಕಗಳು ಇತ್ಯಾದಿಗಳನ್ನು ಧರಿಸಿ.

ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಮಾರ್ಗದರ್ಶಿಗಳು

ಅನುಬಂಧ 1 (ಪುಟ 13) ರಲ್ಲಿ ವಿವರಗಳಿಗಾಗಿ ಸೆಲ್ ಲಿಸಿಸ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳು, RT ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳು ಮತ್ತು qPCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಹಾರ ಪೂರಕ ಪ್ಯಾಕ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ಖರೀದಿಸಬಹುದು.

ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿ

ಉ: ಮಾದರಿ RNA ಬಿಡುಗಡೆ

1.ಕೋಶಗಳನ್ನು ಮೊದಲೇ ಸಂಸ್ಕರಿಸಲಾಗಿದೆ: ಸೆಲ್ ಕಲ್ಚರ್ ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಕೋಲ್ಡ್ PBS ನೊಂದಿಗೆ ತೊಳೆಯಿರಿ, ನಂತರ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಲೈಸ್ ಮಾಡಿ (10-10⁶), 10⁶ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಪ್ರಮಾಣಕ್ಕಿಂತ, ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಣಕ್ಕಾಗಿ ಫಾರ್ಜೆನ್ ದಿ ಸೆಲ್ ಮತ್ತು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಐಸೋಲೇಶನ್ ಕಿಟ್ ಟೋಟಲ್ (ಡಿಇ-03111) ಅಥವಾ ಅನಿಮಲ್ ಟೋಟಲ್ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಐಸೋಲೇಷನ್ ಕಿಟ್ (ಡಿಇ-03011) ಅನ್ನು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.

1.1.ಅಂಟಿಕೊಂಡಿರುವ ಕೋಶಗಳು (24- ಬಾವಿ ಪ್ಲೇಟ್ ಉದಾಹರಣೆಯಾಗಿ)

1.1.1.ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಯಲ್ಲಿನ ಕೋಶಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಿ, ಜೀವಕೋಶಗಳ ಸಂಖ್ಯೆ 1 × 10 ಎಂದು ನಿರ್ಧರಿಸಿ⁵, ಮತ್ತು ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಭಕ್ಷ್ಯದಿಂದ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಪೈಪೆಟ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿ.

1.1.2.ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 200 μl ಪೂರ್ವ ಶೀತಲವಾಗಿರುವ 1 × PBS ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.ಪದೇ ಪದೇ ಪೈಪ್ ಹಾಕಬೇಡಿ ಮತ್ತು ಬಾವಿಗಳಿಂದ PBS ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ.ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಓರೆಯಾಗಿಸಿ ಮತ್ತು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು PBS ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ.ಹಂತ 2 ಕ್ಕೆ ಮುಂದುವರಿಯಿರಿ.

1.1.3.ಸೆಲ್ ಕಲ್ಚರ್ ಡಿಶ್‌ನಲ್ಲಿ ವಿಭಿನ್ನ ಸೆಲ್ ಕಲ್ಚರ್ ಡಿಶ್ ಅಥವಾ ರೆಫರೆನ್ಸ್ ನಂಬರ್ ಟೇಬಲ್ 1-1 ಅನ್ನು ಸೆಲ್ ವಾಷಿಂಗ್‌ಗಾಗಿ ಪ್ರಿಕೂಲ್ಡ್ 1 × ಪಿಬಿಎಸ್ ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು.

ಕೋಷ್ಟಕ 1-1: ವಿವಿಧ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗೆ PBS ಡೋಸೇಜ್

ಸೂಚನೆ（ದೃಢವಾದ ಅಂಟಿಕೊಂಡಿರುವ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು,ತೊಳೆಯುವಾಗ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಜೀವಕೋಶದ ನಷ್ಟವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

1.2.ಅಮಾನತು ಕೋಶಗಳು ಅಥವಾ ಅಂಟಿಕೊಂಡಿರುವ ಕೋಶಗಳನ್ನು ರಂಧ್ರಗಳಿಲ್ಲದ ಫಲಕಗಳಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ

1.2.1.ಬಹು ಅಲ್ಲದ ಬಾವಿ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಲಾದ ಅಂಟಿಕೊಂಡಿರುವ ಕೋಶಗಳು (ತೂಗು ಕೋಶಗಳು ಮುಂದಿನ ಹಂತ 1.2.2 ರಿಂದ ಪ್ರಾರಂಭವಾಗುತ್ತವೆ), ಸಾಮಾನ್ಯ ಕೋಶ ಸಂಗ್ರಹಣೆ ವಿಧಾನದ ಪ್ರಕಾರ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಿ, ಮತ್ತು ಅವುಗಳನ್ನು ಕಲ್ಚರ್ ಪ್ಲೇಟ್ ಅಥವಾ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ;ಟ್ರಿಪ್ಸಿನೈಸೇಶನ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿದರೆ, ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಲು ಮತ್ತು ಉಳಿದಿರುವ ಟ್ರಿಪ್ಸಿನ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಅಗತ್ಯವಿದೆ, ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಚದುರಿಸಲು PBS ಮರುಹೊಂದಿಸಿದ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಕೋಶಗಳಿಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

1.2.2.ಕೋಶಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಎಣಿಸಿದ ನಂತರ, 1 × 10 ಅಲಿಕೋಟೆಡ್ ಕೋಶಗಳು⁵ ಒಂದು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳಿಗೆ, 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 1000 × g ನಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮೂಲಕ ಕೋಶಗಳನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ.

1.2.3.ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ 200 μl PBS ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ, ಪದೇ ಪದೇ ಪೈಪೆಟ್ ಮಾಡಬೇಡಿ ಮತ್ತು ನೇರವಾಗಿ PBS ಅನ್ನು ಆಸ್ಪಿರೇಟ್ ಮಾಡಿ.ಹಂತ 2 ಕ್ಕೆ ಮುಂದುವರಿಯಿರಿ. (ಅವಕ್ಷೇಪಿಸಲು ಕಷ್ಟವಾಗಿದ್ದರೆ ಮತ್ತು ಕೋಶಗಳನ್ನು ಮತ್ತೆ ಮರುಹೊಂದಿಸಿದರೆ, ಸೂಪರ್ನಾಟಂಟ್ ಅನ್ನು ತ್ಯಜಿಸಿದ 10 ನಿಮಿಷಗಳ ನಂತರ 1000×g ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದು, ಸೆಲ್ ಪೆಲೆಟ್ ಹಂತ 2 ಕ್ಕೆ ಮುಂದುವರಿಯುತ್ತದೆ)

2.ಸೆಲ್ ಲೈಸಿಸ್: ಬಫರ್ CL ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ, ಅದರ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶಕ್ಕೆ ಸಮೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ, DNA ಎರೇಸರ್ ಮತ್ತು ಫೋರ್ಜೀನ್ ಪ್ರೋಟೀಸ್ ಪ್ಲಸ್ II, ಕೆಳಗಿನ ಕೋಷ್ಟಕ 1-2 ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಿದ ಲೈಸಿಸ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ ಪ್ರಕಾರ: (ಲೈಸಿಸ್ ಪರಿಹಾರವು ಬಳಕೆಗೆ ಸಿದ್ಧವಾಗಿದೆ).

ಕೋಷ್ಟಕ 1-2: ಸೀಳು ಸಿಸ್ಟಮ್ ತಯಾರಿ (ಗಮನಿಸಿ: ಐಸ್ ಮೇಲೆ ತಯಾರಿಕೆಯಲ್ಲಿ)

3.( 24 -ಬಾವಿ ಪ್ಲೇಟ್ ಉದಾಹರಣೆಯಾಗಿ ) ಪಿಪೆಟ್ 200 μl ಸೆಲ್ ಲೈಸಿಸ್ ಮಾಸ್ಟರ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ, ಪುನರಾವರ್ತಿತವಾಗಿ 5-10 ಬಾರಿ ಸ್ಫೋಟಿಸಿ, 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ (20-25 ℃) ಕಾವುಕೊಡಿ.

ಸೂಚನೆ（ಗುಳ್ಳೆಗಳ ರಚನೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು, ಪೈಪೆಟ್ ಸ್ಕೇಲ್ ಅನ್ನು 200μl ಅಥವಾ ಕಡಿಮೆಗೆ ಸರಿಹೊಂದಿಸಿದಾಗ ದಯವಿಟ್ಟು.ಲೈಸಿಸ್ ನಂತರ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಮೋಡವಾಗಿ ಕಾಣಿಸಬಹುದು, ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿದೆ.

4.(24 –ಒಂದು ಉದಾಹರಣೆಯಾಗಿ ವೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್ ) ದ್ರವದಲ್ಲಿ 20 μl ಬಫರ್ ST (ಟೇಬಲ್ 1-3 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವ ಮೊತ್ತದಲ್ಲಿ ಬಫರ್ ST ಸೇರಿಸಲಾದ ವಿವಿಧ ಲೈಸಿಸ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ಸ್) ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ (20-25 ℃) 5-10 ಬಾರಿ ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಪೈಪೆಟಿಂಗ್ ಅನ್ನು 2 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವು ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ .

ಸೂಚನೆ（ಪೈಪೆಟ್ ತುದಿಯನ್ನು ಮೇಲ್ಮೈ ಕೆಳಗೆ ವಿಲೇವಾರಿ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ, ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸುತ್ತದೆ,ಗುಳ್ಳೆಗಳ ರಚನೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು, ಪೈಪೆಟ್ ಸ್ಕೇಲ್ ಅನ್ನು 200μl ಅಥವಾ ಕಡಿಮೆಗೆ ಸರಿಹೊಂದಿಸಿದಾಗ ದಯವಿಟ್ಟು.

ಕೋಷ್ಟಕ 1-3（ಬಫರ್ ST ಸೇರಿಸಿ

5.ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು ನಂತರದ RT-qPCR ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗೆ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ನಂತರದ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ಸಮಯಕ್ಕೆ ಸರಿಯಾಗಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗದಿದ್ದರೆ, ದಯವಿಟ್ಟು ಅದನ್ನು 2ಗಂಟೆಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಕಾಲ ಐಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ ಮತ್ತು -20℃ ಅಥವಾ -80 ℃ (ಮೂರು ತಿಂಗಳಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿಲ್ಲ) ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ.

ಬಿ: ಆರ್ಟಿ ಸಿಸ್ಟಮ್ ತಯಾರಿ

1. 5 × ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಆರ್‌ಟಿ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಂಡು ಅದನ್ನು ಐಸ್ ಸ್ನಾನದ ಮೇಲೆ ಇರಿಸಿ, ಅದು ನೈಸರ್ಗಿಕವಾಗಿ ಕರಗಲು ಬಿಡಿ ಮತ್ತು ನಂತರದ ಬಳಕೆಗಾಗಿ ಅದನ್ನು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ;RNase-Free ddH2O ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಂಡು ಅದನ್ನು ಕರಗಿಸಿ ಮತ್ತು ನಂತರದ ಬಳಕೆಗಾಗಿ ಐಸ್ ಸ್ನಾನದ ಮೇಲೆ ಇರಿಸಿ.ಕೆಳಗಿನ ಕೋಷ್ಟಕ 2-1 ರ ಪ್ರಕಾರ ಮಂಜುಗಡ್ಡೆಯ ಮೇಲೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ.

ಕೋಷ್ಟಕ 2-1: ಆರ್ಟಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ತಯಾರಿ

2.ಸಿಸ್ಟಮ್ ಸೂತ್ರೀಕರಣವನ್ನು ಪೂರ್ಣಗೊಳಿಸಿದ ನಂತರ, ನಿಧಾನವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮತ್ತು ಕೆಳಗಿನ ಕೋಷ್ಟಕದಲ್ಲಿ ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ 2 -2 ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು RT ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ.

ಕೋಷ್ಟಕ 2-2: RT ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಸ್ಥಿತಿಯ ಸೆಟ್ಟಿಂಗ್

3.ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪೂರ್ಣಗೊಳಿಸಿದ ನಂತರ, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು qPCR ಗಾಗಿ ನೇರವಾಗಿ ಐಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಯಿತು, ದಯವಿಟ್ಟು ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ಸಂರಕ್ಷಣೆ -20℃ ಅಥವಾ -80 ℃ ಅನ್ನು ಇರಿಸಿ.

ಗಮನಿಸಿ: ಶುದ್ಧೀಕರಿಸದ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಬಳಕೆಯಿಂದಾಗಿ, ಹಿಮ್ಮುಖ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಉತ್ಪನ್ನದಲ್ಲಿ ಬಿಳಿ ಅವಕ್ಷೇಪಗಳು ಕಾಣಿಸಿಕೊಳ್ಳಬಹುದು.ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯ ವಿದ್ಯಮಾನವಾಗಿದೆ.ನಂತರದ ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗಾಗಿ ತಕ್ಷಣವೇ ಸೂಪರ್ನಾಟಂಟ್ ಅನ್ನು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡಿ.

ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ RT ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಮುಂದಿನ ಹಂತದ ನೈಜ ಸಮಯದ PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳಿಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ 10-30% ವರೆಗಿನ ಮೊತ್ತವನ್ನು ಸೇರಿಸಲು ಸೂಚಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಸಿ: qPCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ತಯಾರಿ

1.ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಲು ಕೆಳಗಿನ ಕೋಷ್ಟಕ 3-1 ರ ಪ್ರಕಾರ ಹಂತದ cDNA ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನಲ್ಲಿ B ಯ ಸೂಕ್ತ ಮೊತ್ತವನ್ನು ತಯಾರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಗಮನಿಸಿ: cDNA ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನ ಪ್ರಮಾಣವು qPCR ಸಿಸ್ಟಮ್‌ನ 10-30% ರಷ್ಟಿದೆ.ಉದಾಹರಣೆಗೆ, 20μl qPCR ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ, 2-6 μl ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ, ಆದರೆ 6 μl ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿಲ್ಲ.

2. qPCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಾಗಿ ಉತ್ತಮ qPCR ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು (ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನ ， ಇತ್ಯಾದಿ) ಆಪ್ಟಿಮೈಸೇಶನ್ (ಕೋಷ್ಟಕ 3-2 ರಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ನೀಡಲಾಗಿದೆ).

ಗಮನಿಸಿ: ಉತ್ತಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲು qPCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗಾಗಿ ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ ಷರತ್ತುಗಳನ್ನು ಬಳಸಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿ.

ಕೋಷ್ಟಕ 3-1: PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ತಯಾರಿ

1*: ಪ್ರೈಮರ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆ ಕಳಪೆಯಾಗಿರುವಾಗ ಪ್ರೈಮರ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು 50-900 nM ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಸರಿಹೊಂದಿಸಬಹುದು.

ಗಮನಿಸಿ: ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಅಗತ್ಯಗಳು ಮತ್ತು ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಸೈಕ್ಲರ್ ಮಾದರಿಯ ಪ್ರಕಾರ qPCR ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಸರಿಹೊಂದಿಸಬಹುದು.50 ರಲ್ಲಿ qPCR ಗಾಗಿμl ವ್ಯವಸ್ಥೆ, ಕಾರಕ ಡೋಸೇಜ್ ಅನ್ನು 20 ರ ಪ್ರಕಾರ ಪ್ರಮಾಣಾನುಗುಣವಾಗಿ ಹೊಂದಿಸಿμl ವ್ಯವಸ್ಥೆ.

2*: ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಕ್ವಾಂಟಿಟೇಟಿವ್ ಥರ್ಮಲ್ ಸೈಕ್ಲರ್ ಪ್ರಕಾರ ROX ರೆಫರೆನ್ಸ್ ಡೈನ ಸೂಕ್ತವಾದ ಅಂತಿಮ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿ.ಸಾಮಾನ್ಯ ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಕ್ವಾಂಟಿಟೇಟಿವ್ ಸೈಕ್ಲರ್‌ಗಳಿಗೆ ಅತ್ಯಂತ ಸೂಕ್ತವಾದ ROX ರೆಫರೆನ್ಸ್ ಡೈ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳನ್ನು ಕೆಳಗಿನ ಕೋಷ್ಟಕದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ:

ಕೋಷ್ಟಕ 3-2: qPCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸಲಾಗಿದೆ

ಗಮನಿಸಿ: ಅತ್ಯುತ್ತಮ qPCR ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಪಡೆಯಲು, ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ PCR ಅನ್ನು ವಿಭಿನ್ನ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ವಿಭಿನ್ನ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳಿಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾಗಿಸಲು ಬಳಸಬಹುದು.ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು ಪ್ರತಿದೀಪಕ ವಿಶ್ಲೇಷಕ, ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್, ಪ್ರೈಮರ್, ಇತ್ಯಾದಿಗಳನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ ಬದಲಾಗುತ್ತವೆ. ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯಲ್ಲಿ, ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಥರ್ಮಲ್ ಸೈಕ್ಲರ್, ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಪ್ರಕಾರ, ಆಸಕ್ತಿಯ ತುಣುಕಿನ ಗಾತ್ರ, ವರ್ಧಿತ ತುಣುಕಿನ ಮೂಲ ಅನುಕ್ರಮದ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಸೂಕ್ತ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ.

ರಿಯಲ್ ಟೈಮ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸ ತತ್ವಗಳು

ಫಾರ್ವರ್ಡ್ ಪ್ರೈಮರ್ ಮತ್ತು ರಿವರ್ಸ್ ಪ್ರೈಮರ್

ರಿಯಲ್ ಟೈಮ್ PCR ಗಾಗಿ, ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸವು ಬಹಳ ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ.ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ದಕ್ಷತೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿವೆ ಮತ್ತು ಈ ಕೆಳಗಿನ ತತ್ವಗಳನ್ನು ಉಲ್ಲೇಖಿಸಿ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಬಹುದು:

◆ ಪ್ರೈಮರ್ ಉದ್ದ: 18-30bp.

◆ GC ವಿಷಯ: 40-60%.

◆ Tm ಮೌಲ್ಯ: ಪ್ರೈಮರ್ 5 ನಂತಹ ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್, ಪ್ರೈಮರ್‌ನ Tm ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ನೀಡಬಹುದು.ಅಪ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಮತ್ತು ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ Tm ಮೌಲ್ಯಗಳು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಹತ್ತಿರವಾಗಿರಬೇಕು.Tm ಲೆಕ್ಕಾಚಾರದ ಸೂತ್ರವನ್ನು ಸಹ ಬಳಸಬಹುದು: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR ಅನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವಾಗ, 5 °C ನ ಪ್ರೈಮರ್ Tm ಮೌಲ್ಯಕ್ಕಿಂತ ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವಾಗಿ ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ (ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿನ ಅನುಗುಣವಾದ ಹೆಚ್ಚಳವು PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ).

◆ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು PCR ಉತ್ಪನ್ನಗಳು:

◆ ವಿನ್ಯಾಸ ಪ್ರೈಮರ್ PCR ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಉತ್ಪನ್ನದ ಉದ್ದವು ಆದ್ಯತೆ 100-150bp ಆಗಿದೆ.

◆ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನ ದ್ವಿತೀಯಕ ರಚನಾತ್ಮಕ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿ ವಿನ್ಯಾಸ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ತಪ್ಪಿಸಬೇಕು.

◆ ಅಪ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಮತ್ತು ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ 3′ ತುದಿಗಳ ನಡುವೆ 2 ಅಥವಾ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪೂರಕ ಬೇಸ್‌ಗಳ ರಚನೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.

◆ ಪ್ರೈಮರ್ 3′ ಟರ್ಮಿನಲ್ ಬೇಸ್ 3 ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಸತತ G ಅಥವಾ C ನೊಂದಿಗೆ ಇರುವಂತಿಲ್ಲ.

◆ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಸ್ವತಃ ಪೂರಕ ರಚನೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದಿಲ್ಲ, ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೆ ಕೂದಲಿನ ಪಿನ್ ರಚನೆಯು ರೂಪುಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ, ಇದು ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.

◆ ATCG ಅನ್ನು ಪ್ರೈಮರ್ ಅನುಕ್ರಮದಲ್ಲಿ ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಸಮವಾಗಿ ವಿತರಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು 3′ ಟರ್ಮಿನಲ್ ಬೇಸ್ ಅನ್ನು T ಎಂದು ತಪ್ಪಿಸಬೇಕು.

ಅನುಬಂಧ1（Cಎಲ್ಲಾ ನೇರRT-qPCR ಕಿಟ್ ಕಾಂಪೊನೆನ್ಟಿ ಪೂರಕ ಪ್ಯಾಕ್

1.ಸೆಲ್ ಲಿಸಿಸ್ ಪರಿಹಾರ