ಸೆಲ್ ಡೈರೆಕ್ಟ್ RT qPCR ಕಿಟ್-SYBR ಗ್ರೀನ್ I ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಸೆಲ್ ಲಿಸಿಸ್ ಸೆಲ್ ರೆಡಿ ಒಂದು-ಹಂತದ qRT-PCR ಕಿಟ್‌ಗಳು
ವಿವರಣೆಗಳು
ಈ ಕಿಟ್ ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಆರ್ಟಿ-ಕ್ಯೂಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗಾಗಿ ಕಲ್ಚರ್ಡ್ ಸೆಲ್ ಸ್ಯಾಂಪಲ್‌ಗಳಿಂದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಬಿಡುಗಡೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಸಮಯ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುವ ಮತ್ತು ಶ್ರಮದಾಯಕ ಆರ್ಎನ್ಎ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುತ್ತದೆ.ಆರ್ಎನ್ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಕೇವಲ 7 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಪಡೆಯಬಹುದು.5×ನೇರ RT ಮಿಕ್ಸ್ ಮತ್ತು 2×ಕಿಟ್ ಒದಗಿಸಿದ ನೇರ qPCR ಮಿಕ್ಸ್-SYBR ಕಾರಕಗಳು ನೈಜ-ಸಮಯದ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಪಡೆಯಬಹುದು.
5×ನೇರ RT ಮಿಕ್ಸ್ ಮತ್ತು 2×ನೇರ qPCR ಮಿಕ್ಸ್-SYBR ಬಲವಾದ ಪ್ರತಿರೋಧಕ ಸಹಿಷ್ಣುತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಮತ್ತು ಮಾದರಿಗಳ ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು ನೇರವಾಗಿ RT-qPCR ಗೆ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಬಳಸಬಹುದು.ಈ ಕಿಟ್ ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಆರ್ಎನ್ಎ ಹೈ-ಅಫಿನಿಟಿ ಫೋರ್ಜೀನ್ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ ಮತ್ತು ಹಾಟ್ ಡಿ-ಟಾಕ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್, ಡಿಎನ್‌ಟಿಪಿಗಳು, ಎಂಜಿಸಿಎಲ್ ಅನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ2, ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಬಫರ್, ಪಿಸಿಆರ್ ಆಪ್ಟಿಮೈಜರ್ ಮತ್ತು ಸ್ಟೆಬಿಲೈಸರ್.
ವಿಶೇಷಣಗಳು
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
ಕಿಟ್ ಘಟಕಗಳು
| ಭಾಗ I | ಬಫರ್ CL |
| ಫೋರ್ಜೀನ್ ಪ್ರೋಟಿಯೇಸ್ ಪ್ಲಸ್ II | |
| ಬಫರ್ ST | |
| ಭಾಗ II | ಡಿಎನ್ಎ ಎರೇಸರ್ |
| 5× ನೇರ RT ಮಿಕ್ಸ್ | |
| 2× ನೇರ qPCR ಮಿಕ್ಸ್-SYBR | |
| 50× ROX ರೆಫರೆನ್ಸ್ ಡೈ | |
| RNase-ಮುಕ್ತ ddH2O | |
| ಸೂಚನೆಗಳು | |
ವೈಶಿಷ್ಟ್ಯಗಳು ಮತ್ತು ಅನುಕೂಲಗಳು
■ಸರಳ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ : ಸೆಲ್ ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಆರ್ಟಿ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದೊಂದಿಗೆ, ಆರ್ಎನ್ಎ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಕೇವಲ 7 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಪಡೆಯಬಹುದು.
■ ಮಾದರಿ ಬೇಡಿಕೆಯು ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ, 10 ಸೆಲ್‌ಗಳಷ್ಟು ಕಡಿಮೆ ಪರೀಕ್ಷೆ ಮಾಡಬಹುದು.
■ ಹೆಚ್ಚಿನ ಥ್ರೋಪುಟ್: ಇದು 384, 96, 24, 12, 6-ವೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಿದ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಪತ್ತೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
■ DNA ಎರೇಸರ್ ಬಿಡುಗಡೆಯಾದ ಜೀನೋಮ್‌ಗಳನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು, ನಂತರದ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ಮೇಲೆ ಪ್ರಭಾವವನ್ನು ಬಹಳವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
■ ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ RT ಮತ್ತು qPCR ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಎರಡು-ಹಂತದ RT-PCR ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಶನ್ ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು PCR ಹೆಚ್ಚು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು RT-qPCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳಿಗೆ ಹೆಚ್ಚು ನಿರೋಧಕವಾಗಿದೆ.
ಕಿಟ್ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್
ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ವ್ಯಾಪ್ತಿ: ಸುಸಂಸ್ಕೃತ ಜೀವಕೋಶಗಳು.
- ಮಾದರಿ ಲೈಸಿಸ್‌ನಿಂದ ಬಿಡುಗಡೆಯಾದ RNA: ಈ ಕಿಟ್‌ನ RT-qPCR ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗೆ ಮಾತ್ರ ಅನ್ವಯಿಸುತ್ತದೆ.
- ಕಿಟ್ ಅನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಉದ್ದೇಶಗಳಿಗಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು: ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ, siRNA-ಮಧ್ಯಸ್ಥ ಜೀನ್ ಸೈಲೆನ್ಸಿಂಗ್ ಪರಿಣಾಮದ ಪರಿಶೀಲನೆ, ಡ್ರಗ್ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್, ಇತ್ಯಾದಿ.
ರೇಖಾಚಿತ್ರ
ಸಂಗ್ರಹಣೆ ಮತ್ತು ಶೆಲ್ಫ್ ಜೀವನ
ಈ ಕಿಟ್‌ನ ಭಾಗ I ಅನ್ನು 4℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು;ಭಾಗ II ಅನ್ನು -20℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು.
ಫೋರ್ಜೀನ್ ಪ್ರೋಟಿಯೇಸ್ ಪ್ಲಸ್ II ಅನ್ನು 4 ರಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು℃, -20℃ ನಲ್ಲಿ ಫ್ರೀಜ್ ಮಾಡಬೇಡಿ.
ಕಾರಕ 2×ನೇರ qPCR ಮಿಕ್ಸ್-SYBR ಅನ್ನು -20 ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು℃ಕತ್ತಲೆಯಲ್ಲಿ;ಆಗಾಗ್ಗೆ ಬಳಸಿದರೆ, ಅದನ್ನು 4 ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬಹುದುಅಲ್ಪಾವಧಿಯ ಸಂಗ್ರಹಣೆಗಾಗಿ ℃ (10 ದಿನಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸಿ).
ರಿಯಲ್ ಟೈಮ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸ ತತ್ವಗಳು
ಫಾರ್ವರ್ಡ್ ಪ್ರೈಮರ್ ಮತ್ತು ರಿವರ್ಸ್ ಪ್ರೈಮರ್
ರಿಯಲ್ ಟೈಮ್ PCR ಗಾಗಿ, ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸವು ಬಹಳ ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ.ಪ್ರೈಮರ್ಗಳು ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ದಕ್ಷತೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿವೆ ಮತ್ತು ಈ ಕೆಳಗಿನ ತತ್ವಗಳನ್ನು ಉಲ್ಲೇಖಿಸಿ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಬಹುದು:
ಪ್ರೈಮರ್ ಉದ್ದ: 18-30bp.
GC ವಿಷಯ: 40-60%.
Tm ಮೌಲ್ಯ: ಪ್ರೈಮರ್ 5 ನಂತಹ ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್, ಪ್ರೈಮರ್‌ನ Tm ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ನೀಡಬಹುದು.ಅಪ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಮತ್ತು ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ Tm ಮೌಲ್ಯಗಳು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಹತ್ತಿರವಾಗಿರಬೇಕು.Tm ಲೆಕ್ಕಾಚಾರದ ಸೂತ್ರವನ್ನು ಸಹ ಬಳಸಬಹುದು: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR ಅನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವಾಗ, 5 °C ನ ಪ್ರೈಮರ್ Tm ಮೌಲ್ಯಕ್ಕಿಂತ ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವಾಗಿ ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ (ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿನ ಅನುಗುಣವಾದ ಹೆಚ್ಚಳವು PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ).
ಪ್ರೈಮರ್ಗಳು ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು:
ಡಿಸೈನ್ ಪ್ರೈಮರ್ PCR ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಉತ್ಪನ್ನದ ಉದ್ದವು 100-150bp ಆಗಿರುತ್ತದೆ.
ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನ ದ್ವಿತೀಯಕ ರಚನಾತ್ಮಕ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿ ವಿನ್ಯಾಸ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ತಪ್ಪಿಸಬೇಕು.
ಅಪ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಮತ್ತು ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ 3′ ತುದಿಗಳ ನಡುವೆ 2 ಅಥವಾ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪೂರಕ ಬೇಸ್‌ಗಳ ರಚನೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.
ಪ್ರೈಮರ್ 3′ ಟರ್ಮಿನಲ್ ಬೇಸ್ 3 ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಸತತ G ಅಥವಾ C ನೊಂದಿಗೆ ಇರುವಂತಿಲ್ಲ.
ಪ್ರೈಮರ್ಗಳು ಸ್ವತಃ ಪೂರಕ ರಚನೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ, ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೆ ಹೇರ್ಪಿನ್ ರಚನೆಯು ರಚನೆಯಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.
ATCG ಅನ್ನು ಪ್ರೈಮರ್ ಅನುಕ್ರಮದಲ್ಲಿ ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಸಮವಾಗಿ ವಿತರಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು 3′ ಟರ್ಮಿನಲ್ ಬೇಸ್ ಅನ್ನು T ಎಂದು ತಪ್ಪಿಸಬೇಕು.
ಅನುಬಂಧ 1: ಸೆಲ್ ಡೈರೆಕ್ಟ್ RT-qPCR ಕಿಟ್ ಕಾಂಪೊನೆಂಟ್ ಸಪ್ಲಿಮೆಂಟ್ ಪ್ಯಾಕ್
1.ಸೆಲ್ ಲಿಸಿಸ್ ಪರಿಹಾರ
|
| |||
| ಕಿಟ್ ಘಟಕಗಳು (24-ವೆಲ್ ಲಿಸಿಸ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ / ಬಾವಿ) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ಟಿ | 500 ಟಿ | ||
| ಭಾಗI | ಬಫರ್ CL | 20 ಮಿ.ಲೀ | 100 ಮಿ.ಲೀ |
| ಫೋರ್ಜೀನ್ ಪ್ರೋಟಿಯೇಸ್ ಪ್ಲಸ್ II | 400 μl | 1 ಮಿಲಿ × 2 | |
| ಬಫರ್ ST | 1 ಮಿಲಿ × 2 | 10 ಮಿ.ಲೀ | |
| ಭಾಗII | ಡಿಎನ್ಎ ಎರೇಸರ್ | 400 μl | 1 ಮಿಲಿ × 2 |
2.RT ಮಿಶ್ರಣ
|
| |
| ಕಿಟ್ ಘಟಕಗಳು (20 μl ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆ) | DRT-01011-B1 |
| 200 ಟಿ | |
| 5× ನೇರ RT ಮಿಕ್ಸ್ | 800 μl |
| RNase-ಮುಕ್ತ ddH2O | 1.7 ಮಿಲಿ × 2 |
|
| ||
| ಕಿಟ್ ಘಟಕಗಳು (20 μl ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆ) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 ಟಿ | 1000 ಟಿ | |
| 2× ನೇರ qPCR ಮಿಕ್ಸ್-SYBR | 1 ಮಿಲಿ × 2 | 1.7 ಮಿಲಿ × 6 |
| 50× ROX ರೆಫರೆನ್ಸ್ ಡೈ | 40 μl | 200 μl |
| RNase-ಮುಕ್ತ ddH2O | 1.7 ಮಿ.ಲೀ | 10 ಮಿ.ಲೀ |
ಸೂಚನಾ ಕೈಪಿಡಿಗಳು:
