(96-ವೆಲ್) ಕ್ವಿಕ್ ಈಸಿ ಸೆಲ್ ಡೈರೆಕ್ಟ್ RT-qPCR ಕಿಟ್ - ತಕ್ಮನ್
ವಿವರಣೆಗಳು
ದಿ(96-ಚೆನ್ನಾಗಿ) ಕ್ವಿಕ್ ಈಸಿTM ಸೆಲ್ ಡೈರೆಕ್ಟ್ RT-qPCR ಕಿಟ್–ತಕ್ಮಾನ್ಒದಗಿಸುತ್ತದೆಒಂದು ಅನನ್ಯ ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆto ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಆರ್ಎನ್ಎ ಬಿಡುಗಡೆಸುಸಂಸ್ಕೃತ ಕೋಶದಿಂದRT-qPCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗೆ ಮಾದರಿಗಳು, ಸಮಯ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುವ ಮತ್ತು ಪ್ರಯಾಸಕರವಾದವುಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುತ್ತದೆಆರ್ಎನ್ಎ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆ, ಮತ್ತು ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಆರ್ಎನ್ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಪಡೆಯಲು ಕೇವಲ 7 ನಿಮಿಷಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.ದಿ5× ನೇರ RT ಮಿಕ್ಸ್ಮತ್ತು2× ನೇರ qPCR ಮಿಕ್ಸ್-SYBRಪೆಟ್ಟಿಗೆಯಲ್ಲಿ ಒದಗಿಸಲಾಗಿದೆ ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಮತ್ತು ಮಾಡಬಹುದುಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ನೈಜ-ಸಮಯದ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಪಡೆದುಕೊಳ್ಳಿಪಿಸಿಆರ್ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು.
5× ಡೈರೆಕ್ಟ್ RT ಮಿಕ್ಸ್ ಮತ್ತು 2× ಡೈರೆಕ್ಟ್ qPCR ಮಿಕ್ಸ್-ತಕ್ಮನ್ ಪ್ರಬಲವಾದ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಸಹಿಷ್ಣುತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ, ಮತ್ತು ಸಮರ್ಥ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ವರ್ಧನೆಗಾಗಿ ಮಾದರಿಯ ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ಬಳಸಬಹುದು.ಕಾರಕವು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಗೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಒಲವು ಹೊಂದಿರುವ ಫೋರ್ಜೀನ್ ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಹಾಗೆಯೇ ಹಾಟ್ ಡಿ-ಟಾಕ್ ಡಿಎನ್ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್, ಡಿಎನ್‌ಟಿಪಿಗಳು, ಎಂಜಿಸಿಎಲ್2 , ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಬಫರ್, ಪಿಸಿಆರ್ ಆಪ್ಟಿಮೈಜರ್ ಮತ್ತು ಸ್ಟೆಬಿಲೈಸರ್ , ಮತ್ತು ಮಾದರಿಯನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ, ಸುಲಭವಾಗಿ ಮತ್ತು ನಿಖರವಾಗಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಲೈಸಿಸ್ ಬಫರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿತವಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಇದು ಹೆಚ್ಚಿನ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆ, ಬಲವಾದ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ಉತ್ತಮ ಸ್ಥಿರತೆಯ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.
ಕಿಟ್ 96-ಚೆನ್ನಾಗಿ ಬೆಳೆಸಿದ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಸೂಕ್ಷ್ಮ-ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಲೈಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಗುರಿಯಾಗಿರಿಸಿಕೊಂಡಿದೆ ಮತ್ತು ಉತ್ತಮ ಏಕರೂಪತೆ ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ;ಕಿಟ್ ಘಟಕಗಳು 96 ಲಿಸಿಸ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು, 96 ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು ಮತ್ತು 96×2 qPCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು 96-ಬಾವಿ ಕೋಶಗಳ ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಒಂದು-ಬಾರಿ ಬಳಕೆಗಾಗಿ ಪೂರೈಸುತ್ತದೆ, ಪುನರಾವರ್ತಿತ ತೆರೆಯುವಿಕೆ, ಘನೀಕರಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಕಾರಕಗಳ ಕರಗುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಕಾರಕ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯ ಅವನತಿಯಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸುತ್ತದೆ.
ಕಿಟ್ ಘಟಕಗಳು
| ಕಿಟ್ ಸಂಯೋಜನೆ ( 50 μಎಲ್ ಲಿಸಿಸ್ ಸಿಸ್ಟಮ್/20 μLRT ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆ /20μL qPCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆ) | DRT-03021 | ಟೀಕೆ | |
| 96T | |||
| ಭಾಗI | ಬಫರ್CL | 5 ಮಿ.ಲೀ | ಕೋಶಲೈಸಿಸ್ |
| ಪೂರ್ವಜನ್ಯಪ್ರೋಟಿಯೇಸ್ ಪ್ಲಸ್ II | 100 μL | ||
| ಬಫರ್ST | 500 μL | ||
| ಭಾಗ II | ಡಿಎನ್ಎಎರೇಸರ್ | 100 μL | |
| 5× ನೇರ RT ಮಿಕ್ಸ್ | 400 μL | RT | |
| 2× ನೇರ qPCR ಮಿಕ್ಸ್-ತಕ್ಮಾನ್ | 1 ಮೀL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX ರೆಫರೆನ್ಸ್ ಡೈ | 400µL | ||
| RNase- ಉಚಿತddH2 O | 1.7mL |
| |
| Mವಾರ್ಷಿಕ | 1 ತುಂಡು | 1 ಸೇವೆ | |
*: ಲೈಸಿಸ್ ಕಾರಕ DNA ಎರೇಸರ್ ಅನ್ನು ಕಿಟ್‌ನ ಭಾಗ II ರಲ್ಲಿ ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆ;ಸೆಲ್ ಲಿಸಿಸ್, ಆರ್ಟಿ ಮತ್ತು ಕ್ಯೂಪಿಸಿಆರ್ ಘಟಕಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ಖರೀದಿಸಬಹುದು.
ವೈಶಿಷ್ಟ್ಯಗಳು ಮತ್ತು ಅನುಕೂಲಗಳು
■ಸರಳ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ : ಸೆಲ್ ಡೈರೆಕ್ಟ್ ಆರ್ಟಿ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದೊಂದಿಗೆ, ಆರ್ಎನ್ಎ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಕೇವಲ 7 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಪಡೆಯಬಹುದು.
■ ಮಾದರಿ ಬೇಡಿಕೆಯು ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ, 10 ಸೆಲ್‌ಗಳಷ್ಟು ಕಡಿಮೆ ಪರೀಕ್ಷೆ ಮಾಡಬಹುದು.
■ ಹೆಚ್ಚಿನ ಥ್ರೋಪುಟ್: ಇದು 384, 96, 24, 12, 6-ವೆಲ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಿದ ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಪತ್ತೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
■ DNA ಎರೇಸರ್ ಬಿಡುಗಡೆಯಾದ ಜೀನೋಮ್‌ಗಳನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು, ನಂತರದ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳ ಮೇಲೆ ಪ್ರಭಾವವನ್ನು ಬಹಳವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
■ ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ RT ಮತ್ತು qPCR ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಎರಡು-ಹಂತದ RT-PCR ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಶನ್ ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು PCR ಹೆಚ್ಚು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು RT-qPCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳಿಗೆ ಹೆಚ್ಚು ನಿರೋಧಕವಾಗಿದೆ.
ಕಿಟ್ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್
ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ ವ್ಯಾಪ್ತಿ: ಸುಸಂಸ್ಕೃತ ಜೀವಕೋಶಗಳು.
- ಮಾದರಿ ಲೈಸಿಸ್‌ನಿಂದ ಬಿಡುಗಡೆಯಾದ RNA: ಈ ಕಿಟ್‌ನ RT-qPCR ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ಗೆ ಮಾತ್ರ ಅನ್ವಯಿಸುತ್ತದೆ.
- ಕಿಟ್ ಅನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಉದ್ದೇಶಗಳಿಗಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು: ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ, siRNA-ಮಧ್ಯಸ್ಥ ಜೀನ್ ಸೈಲೆನ್ಸಿಂಗ್ ಪರಿಣಾಮದ ಪರಿಶೀಲನೆ, ಡ್ರಗ್ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್, ಇತ್ಯಾದಿ.
ಸಂಗ್ರಹಣೆ ಮತ್ತು ಶೆಲ್ಫ್ ಜೀವನ
ಈ ಕಿಟ್‌ನ ಭಾಗ I ಅನ್ನು 4 ರಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು℃;ಭಾಗ II ಅನ್ನು -20℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು.
ಫೋರ್ಜೀನ್ ಪ್ರೋಟಿಯೇಸ್ ಪ್ಲಸ್ II ಅನ್ನು 4 ರಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು℃, -20℃ ನಲ್ಲಿ ಫ್ರೀಜ್ ಮಾಡಬೇಡಿ.
ಕಾರಕ 2×ನೇರ qPCR ಮಿಕ್ಸ್-ತಕ್ಮನ್ ಅನ್ನು -20 ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು℃ಕತ್ತಲೆಯಲ್ಲಿ;ಆಗಾಗ್ಗೆ ಬಳಸಿದರೆ, ಅದನ್ನು 4 ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬಹುದುಅಲ್ಪಾವಧಿಯ ಸಂಗ್ರಹಣೆಗಾಗಿ ℃ (10 ದಿನಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸಿ).
ರಿಯಲ್ ಟೈಮ್ ಪಿಸಿಆರ್ ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸ ತತ್ವಗಳು
ಫಾರ್ವರ್ಡ್ ಪ್ರೈಮರ್ ಮತ್ತು ರಿವರ್ಸ್ ಪ್ರೈಮರ್
ರಿಯಲ್ ಟೈಮ್ PCR ಗಾಗಿ, ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸವು ಬಹಳ ಮುಖ್ಯವಾಗಿದೆ.ಪ್ರೈಮರ್ಗಳು ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ದಕ್ಷತೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿವೆ ಮತ್ತು ಈ ಕೆಳಗಿನ ತತ್ವಗಳನ್ನು ಉಲ್ಲೇಖಿಸಿ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಬಹುದು:
- ಪ್ರೈಮರ್ ಉದ್ದ: 18-30bp.
- GC ವಿಷಯ: 40-60%.
- Tm ಮೌಲ್ಯ: ಪ್ರೈಮರ್ 5 ನಂತಹ ಪ್ರೈಮರ್ ವಿನ್ಯಾಸ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್, ಪ್ರೈಮರ್‌ನ Tm ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ನೀಡಬಹುದು.ಅಪ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಮತ್ತು ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ Tm ಮೌಲ್ಯಗಳು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಹತ್ತಿರವಾಗಿರಬೇಕು.Tm ಲೆಕ್ಕಾಚಾರದ ಸೂತ್ರವನ್ನು ಸಹ ಬಳಸಬಹುದು: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR ಅನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವಾಗ, 5 °C ನ ಪ್ರೈಮರ್ Tm ಮೌಲ್ಯಕ್ಕಿಂತ ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನವಾಗಿ ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ (ಅನೆಲಿಂಗ್ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿನ ಅನುಗುಣವಾದ ಹೆಚ್ಚಳವು PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ).
- ಪ್ರೈಮರ್ಗಳು ಮತ್ತು ಪಿಸಿಆರ್ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು:
- ಡಿಸೈನ್ ಪ್ರೈಮರ್ PCR ಆಂಪ್ಲಿಫಿಕೇಶನ್ ಉತ್ಪನ್ನದ ಉದ್ದವು 100-150bp ಆಗಿರುತ್ತದೆ.
- ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನ ದ್ವಿತೀಯಕ ರಚನಾತ್ಮಕ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿ ವಿನ್ಯಾಸ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ತಪ್ಪಿಸಬೇಕು.
- ಅಪ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಮತ್ತು ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳ 3′ ತುದಿಗಳ ನಡುವೆ 2 ಅಥವಾ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪೂರಕ ಬೇಸ್‌ಗಳ ರಚನೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.
- ಪ್ರೈಮರ್ 3′ ಟರ್ಮಿನಲ್ ಬೇಸ್ 3 ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಸತತ G ಅಥವಾ C ನೊಂದಿಗೆ ಇರುವಂತಿಲ್ಲ.
- ಪ್ರೈಮರ್ಗಳು ಸ್ವತಃ ಪೂರಕ ರಚನೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ, ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೆ ಹೇರ್ಪಿನ್ ರಚನೆಯು ರಚನೆಯಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಪಿಸಿಆರ್ ವರ್ಧನೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.
- ATCG ಅನ್ನು ಪ್ರೈಮರ್ ಅನುಕ್ರಮದಲ್ಲಿ ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಸಮವಾಗಿ ವಿತರಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು 3′ ಟರ್ಮಿನಲ್ ಬೇಸ್ ಅನ್ನು T ಎಂದು ತಪ್ಪಿಸಬೇಕು.
ಅನುಬಂಧ1: ಸಿಎಲ್ಲಾ ನೇರRT-qPCR ಕಿಟ್ ಕಾಂಪೊನೆನ್ಟಿ ಪೂರಕ ಪ್ಯಾಕ್
1.ಸೆಲ್ ಲಿಸಿಸ್ ಪರಿಹಾರ
| ಸೆಲ್ ಲಿಸಿಸ್ ಪರಿಹಾರ | |||
| ಕಿಟ್ ಘಟಕಗಳು (24-ವೆಲ್ ಲಿಸಿಸ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ / ಬಾವಿ) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ಟಿ | 500 ಟಿ | ||
| ಭಾಗI | ಬಫರ್ CL | 20 ಮಿ.ಲೀ | 100 ಮಿ.ಲೀ |
| ಫೋರ್ಜೀನ್ ಪ್ರೋಟಿಯೇಸ್ ಪ್ಲಸ್ II | 400 μl | 1 ಮಿಲಿ × 2 | |
| ಬಫರ್ ST | 1 ಮಿಲಿ × 2 | 10 ಮಿ.ಲೀ | |
| ಭಾಗII | ಡಿಎನ್ಎ ಎರೇಸರ್ | 400 μl | 1 ಮಿಲಿ × 2 |
| ಆರ್ಟಿ ಮಿಕ್ಸ್ | |
| ಕಿಟ್ ಘಟಕಗಳು (20 μl ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆ) | DRT-01011-B1 |
| 200 ಟಿ | |
| 5× ನೇರ RT ಮಿಕ್ಸ್ | 800 μl |
| RNase-ಮುಕ್ತ ddH2O | 1.7 ಮಿಲಿ × 2 |
| qPCR ಮಿಶ್ರಣ | ||
| ಕಿಟ್ ಘಟಕಗಳು (20 μl ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆ) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 ಟಿ | 1000 ಟಿ | |
| 2× ನೇರ qPCR ಮಿಕ್ಸ್-ತಕ್ಮನ್ | 1 ಮಿಲಿ × 2 | 1.7 ಮಿಲಿ × 6 |
| 20× ROX ರೆಫರೆನ್ಸ್ ಡೈ | 40 μl | 200 μl |
| RNase-ಮುಕ್ತ ddH2O | 1.7 ಮಿ.ಲೀ | 10 ಮಿ.ಲೀ |
ಸೂಚನಾ ಕೈಪಿಡಿಗಳು:
