ನೇರ RT-qPCR ಕಿಟ್
ವಿವರಣೆ
ನೇರ RT-qPCR ಕಿಟ್ ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ಪ್ಯಾಕ್ ಮಾಡಲಾದ RT-qPCR ಬಫರ್ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ದಕ್ಷ ಕಿಣ್ವವನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆಮಿಶ್ರಣ (Taq, M-MLV, RI), ಬ್ಯಾಕ್-ಎಂಡ್ ಕಿಟ್ಗಳು ಮತ್ತು ಸಿಸ್ಟಮ್ ಅನ್ನು ರಚಿಸಲು ಇದು ಅನುಕೂಲಕರವಾಗಿದೆಹೊಂದಾಣಿಕೆ, ಸರಳ ಪರಿಶೀಲನೆಯೊಳಗೆ.
ವಿಶೇಷಣಗಳು
500T, 50,000T
ಕಿಟ್ ಘಟಕಗಳು
ಕಿಟ್ ವಿಷಯಗಳು (20 μL ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆ) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
500 ಟಿ | 50,000 ಟಿ | |
ನೇರ ಕಿಣ್ವ ಮಿಶ್ರಣ | 500 μL× 1 | 50 ಮಿ.ಲೀ× 1 |
2× ನೇರ RT-qPCR ಬಫರ್ | 1 ಮಿ.ಲೀ× 5 | 500 ಮಿ.ಲೀ× 1 |
ಸೂಚನಾ | 1 | 1 |
ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ಹಂತಗಳು
ಕಾರಕವನ್ನು ತಯಾರಿಸುವ ಮೊದಲು, ಕಿಟ್ನಲ್ಲಿರುವ ಎಲ್ಲಾ ಕಾರಕಗಳನ್ನು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಕರಗಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಬೇಕು.
A: ತಯಾರು of ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಮತ್ತು ಕಾರಕ
1. ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಿದ ಆರ್ಎನ್ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ (ಆರ್ಎನ್ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲು ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲು ಫೋರ್ಜೀನ್ ಒಟ್ಟು ಆರ್ಎನ್ಎ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಕಿಟ್ ಸರಣಿಯ ಕಿಟ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ) ಅಥವಾ ಮಾದರಿ ಕ್ರ್ಯಾಕಿಂಗ್ ಉತ್ಪನ್ನ (ಫೋರ್ಜೀನ್ ಲೈಸಿಸ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ), ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರೈಮರ್ಗಳು (10 μM) ಮತ್ತು ಇತರ ಸಂಬಂಧಿತ ಉಪಭೋಗ್ಯಗಳು, ಉಪಕರಣವನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ.
2. 2× ಡೈರೆಕ್ಟ್ RT-qPCR ಬಫರ್, RNase-Free ddH2O ಮತ್ತು 20× ROX ರೆಫರೆನ್ಸ್ ಡೈ (ಅದು ಇದ್ದರೆ'ರು ಅಗತ್ಯವಿದೆ) ಮಂಜುಗಡ್ಡೆಯ ಪೆಟ್ಟಿಗೆಯಲ್ಲಿ, ಇವುಗಳನ್ನು ನೈಸರ್ಗಿಕವಾಗಿ ಕರಗಿಸಿ ಮತ್ತು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ.
B: ತಯಾರು of RT-qPCR ವ್ಯವಸ್ಥೆ
ಟೇಬಲ್ 1 : ತಯಾರು of RT-qPCR sವ್ಯವಸ್ಥೆ
ಘಟಕ | ಸಂಪುಟ | ಅಂತಿಮ ಏಕಾಗ್ರತೆ |
2× ನೇರ RT-qPCR ಬಫರ್ | 10 μL | 1× |
ನೇರ ಕಿಣ್ವ ಮಿಶ್ರಣ | 1μL | |
ಫಾರ್ವರ್ಡ್ ಪ್ರೈಮರ್ (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
ರಿವರ್ಸ್ ಪ್ರೈಮರ್ (10 μM) | 0.8 μL | 50-900nM |
ತನಿಖೆ (4 μM) | 1μL | 200nM |
ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ (ಆರ್ಎನ್ಎ ಅಥವಾ ಲೈಸೇಟ್) | X μL | |
20×ROX ರೆಫರೆನ್ಸ್ ಡೈ | - | 1* |
RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
ಒಟ್ಟು ಸಂಪುಟ | 20μL |
C: ಹೊಂದಿಸಿ ದಿ RT-qPCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಕಾರ್ಯಕ್ರಮ
ಟೇಬಲ್ 2 : RT-qPCR ರಿಯಾಕ್ಟಿon ಕಾರ್ಯಕ್ರಮ ಸೆಟ್ಟಿಂಗ್ (ಫಾರ್ ಉದಾಹರಣೆ: ಎರಡು-ಹಂತ ವಿಧಾನ)
ಹಂತ | ತಾಪಮಾನ | ಸಮಯ | ಸೈಕಲ್ಗಳು | ವಿಷಯ | |
1 | 50℃ | 15 ನಿಮಿಷ | 1* | 1 | ರಿವರ್ಸ್ ಪ್ರತಿಲೇಖನ |
2 | 95℃ | 1 ನಿಮಿಷ | 1 | ಪ್ರೀ-ಡಿನಾಟರೇಶನ್ | |
3 | 95℃ | 10 ಸೆ | 40-45 | ಡಿನಾಟರೇಶನ್ | |
60℃ | 30 ಸೆಕೆಂಡು 2* | ಅನೆಲ್/ವಿಸ್ತರಣೆ |
ಸಂಗ್ರಹಣೆ ಮತ್ತು ಶೆಲ್ಫ್ ಜೀವನ
-ಕಿಟ್ ಅನ್ನು -20 ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು± 5℃.ಮಾನ್ಯತೆಯ ಅವಧಿಯು 12 ತಿಂಗಳುಗಳು.
ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಫ್ರೀಜ್-ಲೇಪ ಚಕ್ರಗಳನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ (<5 ಚಕ್ರಗಳು).