ಸಮಸ್ಯೆಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿಗಳು

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

ಯಾವುದೇ ಆರ್ಎನ್ಎಯನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ ಅಥವಾ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಇಳುವರಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ

ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಚೇತರಿಕೆಯ ದಕ್ಷತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಹಲವು ಅಂಶಗಳಿವೆ, ಅವುಗಳೆಂದರೆ: ಮಾದರಿ RNA ವಿಷಯ, ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ವಿಧಾನ, ಎಲುಷನ್ ಪರಿಮಾಣ, ಇತ್ಯಾದಿ.

ಸಾಮಾನ್ಯ ಕಾರಣಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ:

ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ 1.ಐಸ್ ಬಾತ್ ಅಥವಾ ಕಡಿಮೆ-ತಾಪಮಾನದ (4 ° C) ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ.

ಸಲಹೆ: ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶ (15-25 ° C) ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆ, ಎಂದಿಗೂ ಐಸ್ ಸ್ನಾನ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನದ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ.

2. ಅಸಮರ್ಪಕ ಮಾದರಿ ಸಂಗ್ರಹಣೆ ಅಥವಾ ತುಂಬಾ ಸಮಯದವರೆಗೆ ಮಾದರಿ ಸಂಗ್ರಹಣೆ.

ಸಲಹೆ: ಮಾದರಿಗಳನ್ನು -80 ° C ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ ಅಥವಾ ದ್ರವ ಸಾರಜನಕದಲ್ಲಿ ಫ್ರೀಜ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಫ್ರೀಜ್-ಲೇಪ ಬಳಕೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ;ಆರ್ಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯಲು ಹೊಸದಾಗಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿ.

3.ಸಾಕಷ್ಟು ಸ್ಯಾಂಪಲ್ ಲೈಸಿಸ್

ಶಿಫಾರಸು: ದಯವಿಟ್ಟು ಮಾದರಿ ಮತ್ತು ಕೆಲಸದ ಪರಿಹಾರವನ್ನು (ಲೀನಿಯರ್ ಅಕ್ರಿಲಾಮೈಡ್) ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ (15-25 ° C) 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ.

4. ಎಲುಯೆಂಟ್ ಅನ್ನು ತಪ್ಪಾಗಿ ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆ

ಶಿಫಾರಸು: ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್‌ನ ಪೊರೆಯ ಮಧ್ಯಕ್ಕೆ RNase-Free ddH2O ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆಯೇ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ

5.ಬಫರ್ ವಿಆರ್ಡಬ್ಲ್ಯೂ 2 ನಲ್ಲಿನ ಜಲರಹಿತ ಎಥೆನಾಲ್ನ ಅಸಮರ್ಪಕ ಪರಿಮಾಣ

ಸಲಹೆ: ದಯವಿಟ್ಟು ಸೂಚನೆಗಳನ್ನು ಅನುಸರಿಸಿ, ಬಫರ್ ವಿಆರ್‌ಡಬ್ಲ್ಯೂ 2 ಗೆ ಸರಿಯಾದ ಪ್ರಮಾಣದ ಅನ್‌ಹೈಡ್ರಸ್ ಎಥೆನಾಲ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಕಿಟ್ ಬಳಸುವ ಮೊದಲು ಅವುಗಳನ್ನು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ.

6.ಅಸಮರ್ಪಕ ಮಾದರಿ ಬಳಕೆ.

ಸಲಹೆ: ಪ್ರತಿ 500μl ಬಫರ್ viRL ಗೆ 200µl ಮಾದರಿ.ಅಧಿಕ ಮಾದರಿಯ ಪರಿಮಾಣವು ಆರ್ಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ದರವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

7.ಅಸಮರ್ಪಕ ಎಲುಷನ್ ವಾಲ್ಯೂಮ್ ಅಥವಾ ಅಪೂರ್ಣ ಎಲುಷನ್.

ಸಲಹೆ: ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್ನ ಎಲುವೆಂಟ್ ಪರಿಮಾಣವು 30-50μl ಆಗಿದೆ;ಎಲುಷನ್ ಪರಿಣಾಮವು ತೃಪ್ತಿಕರವಾಗಿಲ್ಲದಿದ್ದರೆ, ಪೂರ್ವ-ಬಿಸಿಮಾಡಿದ RNase-ಮುಕ್ತ ddH ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಲು ಸೂಚಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ₂O ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಇರಿಸುವ ಸಮಯವನ್ನು ವಿಸ್ತರಿಸಿ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ 5-10 ನಿಮಿಷಗಳು

8.ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್ ಬಫರ್ viRW2 ನಲ್ಲಿ ತೊಳೆಯುವ ನಂತರ ಎಥೆನಾಲ್ ಶೇಷವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ.

ಸಲಹೆ: ಬಫರ್ viRW2 ಮತ್ತು ಖಾಲಿ-ಟ್ಯೂಬ್ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಗೇಶನ್‌ನಲ್ಲಿ 2 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ತೊಳೆಯುವ ನಂತರ ಎಥೆನಾಲ್ ಇನ್ನೂ ಉಳಿದಿದ್ದರೆ, ಉಳಿದ ಎಥೆನಾಲ್ ಅನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್ ಅನ್ನು ಖಾಲಿ-ಟ್ಯೂಬ್ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಗೇಶನ್ ನಂತರ 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಬಿಡಬಹುದು.

ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಆರ್ಎನ್ಎ ಅಣುಗಳ ಅವನತಿ

ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ RNA ಯ ಗುಣಮಟ್ಟವು ಮಾದರಿ ಸಂಗ್ರಹಣೆ, RNase ಮಾಲಿನ್ಯ ಮತ್ತು ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯಂತಹ ಅಂಶಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ.

ಸಾಮಾನ್ಯ ಕಾರಣಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ:

1. ಸಂಗ್ರಹಿಸಿದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸಮಯಕ್ಕೆ ಉಳಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ.

ಸಲಹೆ: ಸಂಗ್ರಹಣೆಯ ನಂತರ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಸಮಯಕ್ಕೆ ಬಳಸದಿದ್ದರೆ, ದಯವಿಟ್ಟು ಅದನ್ನು -80 ℃ ಅಥವಾ ದ್ರವ ಸಾರಜನಕದಲ್ಲಿ ತಕ್ಷಣವೇ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ.ಆರ್ಎನ್ಎ ಅಣುಗಳ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಗಾಗಿ, ಸಾಧ್ಯವಾದಾಗಲೆಲ್ಲಾ ಹೊಸದಾಗಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿ.

2. ಸಂಗ್ರಹಿಸಿದ ಮಾದರಿಗಳು ಘನೀಕರಿಸುವ ಮತ್ತು ಪದೇ ಪದೇ ಕರಗುತ್ತವೆ.

ಸಲಹೆ: ಮಾದರಿ ಸಂಗ್ರಹಣೆ ಮತ್ತು ಶೇಖರಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಘನೀಕರಣ ಮತ್ತು ಕರಗುವಿಕೆಯನ್ನು (ಒಂದಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಬಾರಿ) ತಪ್ಪಿಸಿ, ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೆ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಇಳುವರಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ.

3.ಆರ್‌ನೇಸ್ ಅನ್ನು ಆಪರೇಟಿಂಗ್ ಕೋಣೆಯಲ್ಲಿ ಪರಿಚಯಿಸಲಾಯಿತು ಅಥವಾ ಬಿಸಾಡಬಹುದಾದ ಕೈಗವಸುಗಳು, ಮುಖವಾಡಗಳು ಇತ್ಯಾದಿಗಳನ್ನು ಧರಿಸಿರಲಿಲ್ಲ.

ಸಲಹೆ: ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಅಣುಗಳ ಪ್ರಯೋಗವನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆ ಕೊಠಡಿಯಲ್ಲಿ ಉತ್ತಮವಾಗಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಗದ ಮೊದಲು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಕೋಷ್ಟಕವನ್ನು ಸ್ವಚ್ಛಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.RNase ಪರಿಚಯದಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ RNA ಅವನತಿಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಪ್ರಯೋಗದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಬಿಸಾಡಬಹುದಾದ ಕೈಗವಸುಗಳು ಮತ್ತು ಮುಖವಾಡಗಳನ್ನು ಧರಿಸಿ.

4. ಬಳಕೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ RNase ನಿಂದ ಕಾರಕವು ಕಲುಷಿತಗೊಂಡಿದೆ.

ಸಲಹೆ: ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗಾಗಿ ಹೊಸ ವೈರಲ್ ಆರ್ಎನ್ಎ ಐಸೋಲೇಶನ್ ಕಿಟ್ ಅನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಿ.

5.ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳು, ಪೈಪೆಟ್ ಟಿಪ್ಸ್, ಇತ್ಯಾದಿಗಳ RNase ಮಾಲಿನ್ಯ. ಸಲಹೆ: ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳು, ಪೈಪೆಟ್ ಟಿಪ್ಸ್ ಮತ್ತು ಪೈಪೆಟ್‌ಗಳು ಎಲ್ಲಾ RNase-ಫ್ರೀ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ.

ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಅಣುಗಳು ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಿತು

ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್‌ನಿಂದ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಅಣುಗಳು ಹೆಚ್ಚು ಉಪ್ಪು ಅಯಾನುಗಳು ಅಥವಾ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ಇದ್ದಲ್ಲಿ ಕೆಳಮಟ್ಟದ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತವೆ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ: ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್, ನಾರ್ದರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟ್, ಇತ್ಯಾದಿ.

1.ಎಲುಟೆಡ್ ಆರ್ಎನ್ಎ ಅಣುಗಳಲ್ಲಿ ಉಳಿದಿರುವ ಉಪ್ಪು ಅಯಾನುಗಳಿವೆ.

ಶಿಫಾರಸು: ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದ ಎಥೆನಾಲ್ನ ಸರಿಯಾದ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಬಫರ್ viRW2 ಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆಯೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ ಮತ್ತು ಆಪರೇಟಿಂಗ್ ಸೂಚನೆಗಳ ಮೇಲೆ ಸರಿಯಾದ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ವೇಗದ ಪ್ರಕಾರ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್ ಅನ್ನು ಎರಡು ಬಾರಿ ತೊಳೆಯಿರಿ; ಇನ್ನೂ ಉಪ್ಪು ಅಯಾನುಗಳು ಉಳಿದಿದ್ದರೆ, ನೀವು ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್ಗೆ ಬಫರ್ viRW2 ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಅದನ್ನು ಬಿಡಬಹುದು.ನಂತರ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ಉಪ್ಪು ಅಯಾನುಗಳ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡಿ

2. ಎಲುಟೆಡ್ ಆರ್ಎನ್ಎ ಅಣುಗಳಲ್ಲಿ ಉಳಿದ ಎಥೆನಾಲ್ ಇವೆ

ಸಲಹೆ: ಒಮ್ಮೆ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್‌ಗಳನ್ನು ಬಫರ್ viRW2 ಮೂಲಕ ತೊಳೆಯಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ದೃಢೀಕರಿಸಿದ ನಂತರ, ಆಪರೇಟಿಂಗ್ ಸೂಚನೆಗಳ ಮೇಲೆ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ವೇಗದ ಪ್ರಕಾರ ಖಾಲಿ-ಟ್ಯೂಬ್ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಿ.ಇನ್ನೂ ಎಥೆನಾಲ್ ಉಳಿದಿದ್ದರೆ, ಉಳಿದ ಎಥೆನಾಲ್ ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಖಾಲಿ-ಟ್ಯೂಬ್ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಗೇಶನ್ ನಂತರ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಅದನ್ನು 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಬಿಡಬಹುದು.

ಸೂಚನಾ ಕೈಪಿಡಿಗಳು:

ವೈರಲ್ ಆರ್ಎನ್ಎ ಐಸೋಲೇಶನ್ ಕಿಟ್ ಸೂಚನಾ ಕೈಪಿಡಿ