ಪೈಪೆಟ್ ಟಿಪ್ಸ್ ಮತ್ತು ಇಪಿ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳ ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕ, ಇತ್ಯಾದಿ.

1. 0.1% (ಸಾವಿರದ ಒಂದು) DEPC (ಅತ್ಯಂತ ವಿಷಕಾರಿ ವಸ್ತು) ಅನ್ನು ಡಿಯೋನೈಸ್ಡ್ ನೀರಿನಿಂದ ತಯಾರಿಸಿ, ಅದನ್ನು ಫ್ಯೂಮ್ ಹುಡ್‌ನಲ್ಲಿ ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ಬಳಸಿ ಮತ್ತು ಅದನ್ನು ಬೆಳಕಿನಿಂದ 4 ° C ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ;

DEPC ನೀರು DEPC ಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಶುದ್ಧ ನೀರು ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಒತ್ತಡದಿಂದ ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕವಾಗಿದೆ.RNase, DNase ಮತ್ತು ಪ್ರೊಟೀನೇಸ್ ಮುಕ್ತವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ.

2. ಪೈಪೆಟ್ ಟಿಪ್ ಮತ್ತು ಇಪಿ ಟ್ಯೂಬ್ ಅನ್ನು 0.1% DEPC ಗೆ ಹಾಕಿ, ಮತ್ತು ಪೈಪೆಟ್ ಟಿಪ್ ಮತ್ತು EP ಟ್ಯೂಬ್ 0.1% DEP ಯಿಂದ ತುಂಬಿದೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ.

3. ಬೆಳಕಿನಿಂದ ರಕ್ಷಿಸಿ, ನಿಲ್ಲಲು ಬಿಡಿ, ರಾತ್ರಿ (12-24ಗಂ)

4. ತುದಿ ಮತ್ತು EP ಟ್ಯೂಬ್ ಹೊಂದಿರುವ ಬಾಕ್ಸ್ ಅನ್ನು DEPC ಯಲ್ಲಿ ನೆನೆಸುವ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲ.ಟಿಪ್ ಅಥವಾ ಇಪಿ ಟ್ಯೂಬ್‌ನಲ್ಲಿ DEPC ನೀರನ್ನು ಸರಿಸುಮಾರು ತೆಗೆದ ನಂತರ, ಅದನ್ನು ಪ್ಯಾಕ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಅದನ್ನು ಕಟ್ಟಿಕೊಳ್ಳಿ.

5. 121 ಡಿಗ್ರಿ ಸೆಲ್ಸಿಯಸ್, 30ನಿಮಿ

6. 180 ಡಿಗ್ರಿ ಸೆಲ್ಸಿಯಸ್, ಹಲವಾರು ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಒಣಗಿಸಿ (ಕನಿಷ್ಠ 3 ಗಂಟೆಗಳು)

ಗಮನಿಸಿ: ಎ.DEPC ಅನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವಾಗ ಲ್ಯಾಟೆಕ್ಸ್ ಕೈಗವಸುಗಳು ಮತ್ತು ಮುಖವಾಡಗಳನ್ನು ಧರಿಸಿ!b, ಅಥವಾ DEPC ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕವಿಲ್ಲದೆ, 130 ℃, 90min ಆಟೋಕ್ಲೇವ್ (ಅನೇಕ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಗಳು ಎರಡು ಬಾರಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನದ ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕ)

ಆರ್ಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯ ಪರಿಗಣನೆಗಳು

ಅಂಗಾಂಶ ಆರ್ಎನ್ಎ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯ ವೈಫಲ್ಯದ ಎರಡು ಪ್ರಮುಖ ವಿದ್ಯಮಾನಗಳು

ಆರ್ಎನ್ಎ ಅವನತಿ ಮತ್ತು ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿನ ಕಲ್ಮಶಗಳ ಉಳಿಕೆಗಳು,ಅವನತಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದಂತೆ, ಕಲ್ಚರ್ಡ್ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಂದ ಹೊರತೆಗೆಯಲಾದ ಆರ್ಎನ್ಎ ಏಕೆ ಸುಲಭವಾಗಿ ಕ್ಷೀಣಗೊಳ್ಳುವುದಿಲ್ಲ ಎಂಬುದನ್ನು ನೋಡೋಣ.ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿರುವ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಕಾರಕಗಳೆಲ್ಲವೂ ಆರ್‌ನೇಸ್ ಅನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುವ ಘಟಕಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತವೆ.ಕಲ್ಚರ್ಡ್ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಗೆ ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ, ಮತ್ತು ಅದನ್ನು ಸರಳವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ, ಎಲ್ಲಾ ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಲೈಸೇಟ್ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಬಹುದು ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶಗಳು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಲೈಸ್ಡ್ ಆಗುತ್ತವೆ.ಕೋಶಗಳನ್ನು ಲೈಸ್ ಮಾಡಿದ ನಂತರ, ಲೈಸೇಟ್‌ನಲ್ಲಿರುವ ಸಕ್ರಿಯ ಪದಾರ್ಥಗಳು ತಕ್ಷಣವೇ ಅಂತರ್ಜೀವಕೋಶದ RNase ಅನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ RNA ಹಾಗೇ ಉಳಿಯುತ್ತದೆ.ಅಂದರೆ, ಕಲ್ಚರ್ಡ್ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಸುಲಭವಾಗಿ ಮತ್ತು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಲೈಸೇಟ್ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಪರ್ಕ ಹೊಂದಿರುವುದರಿಂದ, ಅವುಗಳ ಆರ್ಎನ್ಎ ಸುಲಭವಾಗಿ ಕ್ಷೀಣಗೊಳ್ಳುವುದಿಲ್ಲ;ಮತ್ತೊಂದೆಡೆ, ಅಂಗಾಂಶದಲ್ಲಿನ ಆರ್ಎನ್ಎ ಸುಲಭವಾಗಿ ಕ್ಷೀಣಿಸುತ್ತದೆ ಏಕೆಂದರೆ ಅಂಗಾಂಶದಲ್ಲಿನ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಸಂಪರ್ಕಿಸಲು ಸುಲಭವಲ್ಲ.ಸಾಕಷ್ಟು ಸಂಪರ್ಕದಿಂದಾಗಿ.ಆದ್ದರಿಂದ,ಆರ್ಎನ್ಎ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುವಾಗ ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ಒಂದೇ ಕೋಶವಾಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸಲು ಒಂದು ಮಾರ್ಗವಿದೆ ಎಂದು ಊಹಿಸಿದರೆ, ಅವನತಿಯ ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಪರಿಹರಿಸಬಹುದು.

ಲಿಕ್ವಿಡ್ ನೈಟ್ರೋಜನ್ ಮಿಲ್ಲಿಂಗ್ ಅಂತಹ ಅತ್ಯಂತ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ವಿಧಾನವಾಗಿದೆ.ಆದಾಗ್ಯೂ, ದ್ರವ ಸಾರಜನಕ ಮಿಲ್ಲಿಂಗ್ ವಿಧಾನವು ತುಂಬಾ ತೊಂದರೆದಾಯಕವಾಗಿದೆ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಮಾದರಿಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯು ದೊಡ್ಡದಾಗಿದೆ.ಇದು ಮುಂದಿನ ಅತ್ಯುತ್ತಮ ವಿಷಯಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು: ಹೋಮೊಜೆನೈಜರ್.ದಿಏಕರೂಪಿಕೋಶಗಳನ್ನು ಲೈಸೇಟ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಪರ್ಕಿಸುವ ಮೊದಲು RNase ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೇಗೆ ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಎಂಬ ಪ್ರಶ್ನೆಯನ್ನು ವಿಧಾನವು ಪರಿಗಣಿಸುವುದಿಲ್ಲ, ಬದಲಿಗೆ ಅಂಗಾಂಶದ ಅಡ್ಡಿ ದರವು ಅಂತರ್ಜೀವಕೋಶದ RNase RN ಅನ್ನು ಕುಗ್ಗಿಸುವ ದರಕ್ಕಿಂತ ವೇಗವಾಗಿರುತ್ತದೆ ಎಂದು ಪ್ರಾರ್ಥಿಸುತ್ತದೆ.

ಎಲೆಕ್ಟ್ರಿಕ್ ಹೋಮೊಜೆನೈಜರ್ನ ಪರಿಣಾಮವು ಉತ್ತಮವಾಗಿದೆ,ಮತ್ತು ಗ್ಲಾಸ್ ಹೋಮೋಜೆನೈಜರ್‌ನ ಪರಿಣಾಮವು ಕಳಪೆಯಾಗಿದೆ, ಆದರೆ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ಹೋಮೋಜೆನೈಜರ್ ವಿಧಾನವು ಅವನತಿ ವಿದ್ಯಮಾನವನ್ನು ತಡೆಯಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ.ಆದ್ದರಿಂದ, ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯು ಕ್ಷೀಣಿಸಿದರೆ, ದ್ರವ ಸಾರಜನಕದೊಂದಿಗೆ ರುಬ್ಬಲು ಮೂಲ ವಿದ್ಯುತ್ ಹೋಮೋಜೆನೈಜರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಬೇಕು;ಮೂಲ ಗ್ಲಾಸ್ ಹೋಮೋಜೆನೈಸರ್ ಅನ್ನು ಎಲೆಕ್ಟ್ರಿಕ್ ಹೋಮೋಜೆನೈಸರ್ ಆಗಿ ಬದಲಾಯಿಸಬೇಕು ಅಥವಾ ನೇರವಾಗಿ ದ್ರವ ಸಾರಜನಕದೊಂದಿಗೆ ಅರೆಯಬೇಕು.ಸಮಸ್ಯೆಯು ಸುಮಾರು 100% ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯವಾಗಿದೆ.ಪರಿಹರಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ.

ನಂತರದ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಅಶುದ್ಧತೆಯ ಶೇಷ ಸಮಸ್ಯೆಯು ಅವನತಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ವೈವಿಧ್ಯಮಯ ಕಾರಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು ಅದಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಪರಿಹಾರಗಳು ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿವೆ.ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ,ಅಂಗಾಂಶದಲ್ಲಿ ಅವನತಿ ಅಥವಾ ಉಳಿದಿರುವ ಕಲ್ಮಶಗಳಿದ್ದರೆ, ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ವಸ್ತುಗಳಿಗೆ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ವಿಧಾನ/ಕಾರಕವನ್ನು ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ ಮಾಡಬೇಕು.ಆಪ್ಟಿಮೈಸೇಶನ್‌ಗಾಗಿ ನಿಮ್ಮ ಅಮೂಲ್ಯ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ನೀವು ಬಳಸಬೇಕಾಗಿಲ್ಲ: ನೀವು ಮಾರುಕಟ್ಟೆಯಿಂದ ಮೀನು/ಕೋಳಿಯಂತಹ ಕೆಲವು ಸಣ್ಣ ಪ್ರಾಣಿಗಳನ್ನು ಖರೀದಿಸಬಹುದು, ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಹೊರತೆಗೆಯಲು ವಸ್ತುವಿನ ಅನುಗುಣವಾದ ಭಾಗವನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಬಹುದು ಮತ್ತು ಇನ್ನೊಂದು ಭಾಗವನ್ನು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಹೊರತೆಗೆಯಲು - ಬಾಯಿ, ಹೊಟ್ಟೆ ಮತ್ತು ಕರುಳಿನಿಂದ ರುಬ್ಬಿಕೊಳ್ಳಿ.

ಹೊರತೆಗೆಯಲಾದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಗುರಿಯ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ವಿಭಿನ್ನ ಅನುಸರಣಾ ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗೆ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅದರ ಗುಣಮಟ್ಟದ ಅವಶ್ಯಕತೆಗಳು ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿವೆ

cDNA ಲೈಬ್ರರಿ ನಿರ್ಮಾಣಕ್ಕೆ ಕಿಣ್ವ ಕ್ರಿಯೆಯ ಪ್ರತಿಬಂಧಕಗಳ ಅವಶೇಷಗಳಿಲ್ಲದೆ RNA ಸಮಗ್ರತೆಯ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ;ಉತ್ತರಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಸಮಗ್ರತೆ ಮತ್ತು ಕಿಣ್ವ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಪ್ರತಿಬಂಧಕಗಳ ಅವಶೇಷಗಳಿಗೆ ಕಡಿಮೆ ಅವಶ್ಯಕತೆಗಳು ಬೇಕಾಗುತ್ತವೆ;RT-PCR ಗೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಸಮಗ್ರತೆಯ ಅಗತ್ಯವಿರುವುದಿಲ್ಲ,ಆದರೆ ಕಿಣ್ವದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ.ಅವಶೇಷಗಳ ಅವಶ್ಯಕತೆಗಳು ಕಟ್ಟುನಿಟ್ಟಾಗಿವೆ.ಇನ್ಪುಟ್ ಔಟ್ಪುಟ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುತ್ತದೆ;ಪ್ರತಿ ಬಾರಿಯೂ ಅತ್ಯಧಿಕ ಶುದ್ಧತೆಯ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಪಡೆಯುವುದು ಗುರಿಯಾಗಿದೆ, ಅದು ಜನರಿಗೆ ಮತ್ತು ಹಣವನ್ನು ವೆಚ್ಚ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

ಮಾದರಿಗಳ ಸಂಗ್ರಹ/ಸಂಗ್ರಹಣೆ

ಅವನತಿಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಅಂಶಗಳು ಮಾದರಿಯು ಜೀವಂತ ದೇಹವನ್ನು/ಅಥವಾ ಮೂಲ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಪರಿಸರವನ್ನು ತೊರೆದ ನಂತರ, ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿರುವ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಕಿಣ್ವಗಳು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಕ್ಷೀಣಿಸಲು ಪ್ರಾರಂಭಿಸುತ್ತವೆ,ಮತ್ತು ಅವನತಿ ದರವು ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಕಿಣ್ವಗಳು ಮತ್ತು ತಾಪಮಾನದ ವಿಷಯಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ.ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕವಾಗಿ, ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಕಿಣ್ವದ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಲು ಕೇವಲ ಎರಡು ಮಾರ್ಗಗಳಿವೆ: ತಕ್ಷಣವೇ ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಮತ್ತು ವೇಗವಾಗಿ ಏಕರೂಪಗೊಳಿಸಿ;ಸಣ್ಣ ತುಂಡುಗಳಾಗಿ ಕತ್ತರಿಸಿ ತಕ್ಷಣ ದ್ರವ ಸಾರಜನಕದಲ್ಲಿ ಫ್ರೀಜ್ ಮಾಡಿ.ಎರಡೂ ವಿಧಾನಗಳಿಗೆ ತ್ವರಿತ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ.ಎರಡನೆಯದು ಎಲ್ಲಾ ಮಾದರಿಗಳಿಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ, ಆದರೆ ಮೊದಲನೆಯದು ಕಡಿಮೆ ಪ್ರಮಾಣದ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಕಿಣ್ವಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಅಂಗಾಂಶಗಳಿಗೆ ಮಾತ್ರ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಏಕರೂಪಗೊಳಿಸಲು ಸುಲಭವಾಗಿದೆ.ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ, ಸಸ್ಯ ಅಂಗಾಂಶ, ಯಕೃತ್ತು, ಥೈಮಸ್, ಮೇದೋಜ್ಜೀರಕ ಗ್ರಂಥಿ, ಗುಲ್ಮ, ಮೆದುಳು, ಕೊಬ್ಬು, ಸ್ನಾಯು ಅಂಗಾಂಶ, ಇತ್ಯಾದಿಗಳನ್ನು ಮುಂದುವರಿಸುವ ಮೊದಲು ದ್ರವ ಸಾರಜನಕದೊಂದಿಗೆ ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾಗಿ ಫ್ರೀಜ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಮಾದರಿಗಳ ವಿಘಟನೆ ಮತ್ತು ಏಕರೂಪತೆ

ಅವನತಿ ಮತ್ತು ಇಳುವರಿ ಮಾದರಿ ವಿಘಟನೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಅಂಶಗಳುಸಂಪೂರ್ಣ ಏಕರೂಪತೆಗಾಗಿ, ಇದು ಆರ್ಎನ್ಎಯ ಸಂಪೂರ್ಣ ಮತ್ತು ಸಂಪೂರ್ಣ ಬಿಡುಗಡೆಗಾಗಿ.ಕೋಶಗಳನ್ನು ಮುರಿಯದೆ ನೇರವಾಗಿ ಏಕರೂಪಗೊಳಿಸಬಹುದು.ಒಡೆದ ನಂತರವೇ ಅಂಗಾಂಶಗಳನ್ನು ಏಕರೂಪಗೊಳಿಸಬಹುದು.ಯೀಸ್ಟ್ ಮತ್ತು ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾವನ್ನು ಏಕರೂಪಗೊಳಿಸುವುದಕ್ಕೆ ಮುಂಚಿತವಾಗಿ ಅನುಗುಣವಾದ ಕಿಣ್ವಗಳೊಂದಿಗೆ ಒಡೆಯಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ.ಕಡಿಮೆ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಕಿಣ್ವದ ವಿಷಯ ಮತ್ತು ಸುಲಭವಾದ ಏಕರೂಪೀಕರಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಅಂಗಾಂಶಗಳನ್ನು ಏಕರೂಪದ ಮೂಲಕ ಲೈಸೇಟ್‌ನಲ್ಲಿ ಒಂದು ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಪುಡಿಮಾಡಬಹುದು ಮತ್ತು ಏಕರೂಪಗೊಳಿಸಬಹುದು;ಸಸ್ಯ ಅಂಗಾಂಶ, ಯಕೃತ್ತು, ಥೈಮಸ್, ಮೇದೋಜ್ಜೀರಕ ಗ್ರಂಥಿ, ಗುಲ್ಮ, ಮೆದುಳು, ಕೊಬ್ಬು, ಸ್ನಾಯು ಅಂಗಾಂಶ ಮತ್ತು ಇತರ ಮಾದರಿಗಳು, ಅವು ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಕಿಣ್ವಗಳಲ್ಲಿ ಅಧಿಕವಾಗಿರುತ್ತವೆ ಅಥವಾ ಸುಲಭವಾಗಿ ಏಕರೂಪವಾಗಿರುವುದಿಲ್ಲ,ಆದ್ದರಿಂದ ಅಂಗಾಂಶದ ಅಡ್ಡಿ ಮತ್ತು ಏಕರೂಪತೆಯನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ನಿರ್ವಹಿಸಬೇಕು.ವಿಘಟನೆಯ ಅತ್ಯಂತ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚು ಉತ್ಪಾದಕ ವಿಧಾನವೆಂದರೆ ದ್ರವ ಸಾರಜನಕದೊಂದಿಗೆ ಮಿಲ್ಲಿಂಗ್, ಮತ್ತು ಏಕರೂಪೀಕರಣದ ಅತ್ಯಂತ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ವಿಧಾನವೆಂದರೆ ವಿದ್ಯುತ್ ಏಕರೂಪದ ಬಳಕೆ.ದ್ರವ ಸಾರಜನಕದೊಂದಿಗೆ ಮಿಲ್ಲಿಂಗ್ ಬಗ್ಗೆ ವಿಶೇಷ ಟಿಪ್ಪಣಿ: ಸಂಪೂರ್ಣ ಮಿಲ್ಲಿಂಗ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಕರಗಿಸಬಾರದು, ಏಕೆಂದರೆ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಕಿಣ್ವಗಳು ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟಿದಾಗ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುವ ಸಾಧ್ಯತೆ ಹೆಚ್ಚು.

ಲೈಸೇಟ್ ಆಯ್ಕೆ

ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ಅನುಕೂಲತೆ ಮತ್ತು ಉಳಿದ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಕಲ್ಮಶಗಳ ಅಂಶಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವುದು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ ಲೈಸಿಸ್ ಪರಿಹಾರಗಳು RNase ನ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಬಹುತೇಕ ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಬಹುದು.ಆದ್ದರಿಂದ, ಲೈಸಿಸ್ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡುವ ಪ್ರಮುಖ ಅಂಶವೆಂದರೆ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ವಿಧಾನದೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಪರಿಗಣಿಸುವುದು.ಒಂದು ವಿನಾಯಿತಿ ಇದೆ:ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಕಿಣ್ವಗಳನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಫಿನಾಲ್ ಹೊಂದಿರುವ ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲು ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಕಿಣ್ವವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಶುದ್ಧೀಕರಣ ವಿಧಾನದ ಆಯ್ಕೆ

ಉಳಿದಿರುವ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಕಲ್ಮಶಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಅಂಶಗಳು, ಹೊರತೆಗೆಯುವ ವೇಗ ಜೀವಕೋಶಗಳಂತಹ ಶುದ್ಧ ಮಾದರಿಗಳಿಗೆ, ಕೈಯಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ವಿಧಾನದೊಂದಿಗೆ ತೃಪ್ತಿದಾಯಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಬಹುದು.ಆದರೆ ಅನೇಕ ಇತರ ಮಾದರಿಗಳಿಗೆ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಸಸ್ಯಗಳು, ಯಕೃತ್ತು, ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾ, ಇತ್ಯಾದಿಗಳಂತಹ ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಟ್ಟದ ಕಲ್ಮಶಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ, ಸೂಕ್ತವಾದ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ವಿಧಾನವನ್ನು ಆರಿಸುವುದು ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ.ಕಾಲಮ್ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ವಿಧಾನವು ವೇಗದ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ವೇಗವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು ಆರ್ಎನ್ಎಯ ನಂತರದ ಕಿಣ್ವಕ ಕ್ರಿಯೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಕಲ್ಮಶಗಳನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು, ಆದರೆ ಇದು ದುಬಾರಿಯಾಗಿದೆ (ಫೋರ್ಜೀನ್ ವೆಚ್ಚ-ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಕಿಟ್ಗಳನ್ನು ನೀಡಬಹುದು, ಹೆಚ್ಚಿನ ವಿವರಗಳನ್ನು ಕ್ಲಿಕ್ ಮಾಡಿಇಲ್ಲಿ);LiCl ಅವಕ್ಷೇಪನದಂತಹ ಆರ್ಥಿಕ ಮತ್ತು ಶ್ರೇಷ್ಠ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ತೃಪ್ತಿದಾಯಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಬಹುದು, ಆದರೆ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ಸಮಯವು ದೀರ್ಘವಾಗಿರುತ್ತದೆ..

RNA ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಗಾಗಿ "ಮೂರು ವಿಭಾಗಗಳು ಮತ್ತು ಎಂಟು ಗಮನಗಳು"

ಶಿಸ್ತು 1:ಬಾಹ್ಯ ಕಿಣ್ವಗಳ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಕೊನೆಗೊಳಿಸಿ.

ಸೂಚನೆ 1:ಮಾಸ್ಕ್ ಮತ್ತು ಕೈಗವಸುಗಳನ್ನು ಕಟ್ಟುನಿಟ್ಟಾಗಿ ಧರಿಸಿ.

ಟಿಪ್ಪಣಿ 2:ಪ್ರಯೋಗದಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳು, ಟಿಪ್ ಹೆಡ್‌ಗಳು, ಪೈಪೆಟ್ ರಾಡ್‌ಗಳು, ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಟ್ಯಾಂಕ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಬೆಂಚುಗಳನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ವಿಲೇವಾರಿ ಮಾಡಬೇಕು.

ಟಿಪ್ಪಣಿ 3:ಪ್ರಯೋಗದಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಕಾರಕಗಳು/ಪರಿಹಾರಗಳು, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ನೀರು, RNase-ಮುಕ್ತವಾಗಿರಬೇಕು.

ಶಿಸ್ತು 2:ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಕಿಣ್ವಗಳ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ಬಂಧಿಸಿ

ಟಿಪ್ಪಣಿ 4:ಸೂಕ್ತವಾದ ಏಕರೂಪತೆಯ ವಿಧಾನವನ್ನು ಆರಿಸಿ.

ಟಿಪ್ಪಣಿ 5:ಸೂಕ್ತವಾದ ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು ಆರಿಸಿ.

ಟಿಪ್ಪಣಿ 6:ಮಾದರಿಯ ಆರಂಭಿಕ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸಿ.

ಶಿಸ್ತು 3:ನಿಮ್ಮ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಉದ್ದೇಶವನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟಪಡಿಸಿ

ಟಿಪ್ಪಣಿ 7:ಯಾವುದೇ ಲೈಸೇಟ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಮಾದರಿಯ ಗರಿಷ್ಠ ಆರಂಭಿಕ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಸಮೀಪಿಸುತ್ತಿರುವಾಗ, ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯ ಯಶಸ್ಸಿನ ಪ್ರಮಾಣವು ತೀವ್ರವಾಗಿ ಇಳಿಯುತ್ತದೆ.

ಟಿಪ್ಪಣಿ 8:ಯಶಸ್ವಿ ಆರ್ಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯ ಏಕೈಕ ಆರ್ಥಿಕ ಮಾನದಂಡವೆಂದರೆ ನಂತರದ ಪ್ರಯೋಗಗಳಲ್ಲಿ ಯಶಸ್ಸು, ಇಳುವರಿ ಅಲ್ಲ.

RNase ಮಾಲಿನ್ಯದ ಟಾಪ್ 10 ಮೂಲಗಳು

1. ಬೆರಳುಗಳು ಬಾಹ್ಯ ಕಿಣ್ವಗಳ ಮೊದಲ ಮೂಲವಾಗಿದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಕೈಗವಸುಗಳನ್ನು ಆಗಾಗ್ಗೆ ಧರಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಬದಲಾಯಿಸಬೇಕು.ಜೊತೆಗೆ, ಮುಖವಾಡಗಳನ್ನು ಸಹ ಧರಿಸಬೇಕು, ಏಕೆಂದರೆ ಉಸಿರಾಟವು ಕಿಣ್ವಗಳ ಪ್ರಮುಖ ಮೂಲವಾಗಿದೆ.ಕೈಗವಸು ಮುಖವಾಡವನ್ನು ಧರಿಸುವುದರ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಪ್ರಯೋಜನವೆಂದರೆ ಪ್ರಯೋಗಕಾರರನ್ನು ರಕ್ಷಿಸುವುದು.

2. ಪೈಪೆಟ್ ಟಿಪ್ಸ್, ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳು, ಪೈಪೆಟ್‌ಗಳು - ಕೇವಲ ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕದಿಂದ RNase ಅನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ, ಆದ್ದರಿಂದ ಪೈಪೆಟ್ ಸುಳಿವುಗಳು ಮತ್ತು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳನ್ನು DEPC ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಎಂದು ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದ್ದರೂ ಸಹ DEPC ಯೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಬೇಕು.ವಿಶೇಷ ಉದ್ದೇಶದ ಪೈಪೆಟ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುವುದು ಉತ್ತಮ, ಬಳಕೆಗೆ ಮೊದಲು 75% ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್ ಹತ್ತಿ ಚೆಂಡನ್ನು ಒರೆಸಿ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ರಾಡ್;ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ಹೆಡ್ ರಿಮೂವರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸದಂತೆ ಮರೆಯಬೇಡಿ.

3. ನೀರು/ಬಫರ್ RNase ಮಾಲಿನ್ಯದಿಂದ ಮುಕ್ತವಾಗಿರಬೇಕು.

4. ಕನಿಷ್ಠ ಪರೀಕ್ಷಾ ಟೇಬಲ್ ಅನ್ನು 75% ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್ ಹತ್ತಿ ಚೆಂಡುಗಳಿಂದ ಒರೆಸಬೇಕು.

5.ಅಂತರ್ಜನಕ RNase ಎಲ್ಲಾ ಅಂಗಾಂಶಗಳು ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಕಿಣ್ವಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ದ್ರವ ಸಾರಜನಕದೊಂದಿಗೆ ಅಂಗಾಂಶಗಳ ತ್ವರಿತ ಘನೀಕರಣವು ಅವನತಿಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಉತ್ತಮ ಮಾರ್ಗವಾಗಿದೆ.ದ್ರವರೂಪದ ಸಾರಜನಕ ಸಂಗ್ರಹಣೆ/ಗ್ರೈಂಡಿಂಗ್ ವಿಧಾನವು ನಿಜಕ್ಕೂ ಅನಾನುಕೂಲವಾಗಿದೆ, ಆದರೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಟ್ಟದ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಕಿಣ್ವಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಅಂಗಾಂಶಗಳಿಗೆ ಇದು ಏಕೈಕ ಮಾರ್ಗವಾಗಿದೆ.

6. RNA ಮಾದರಿಗಳು RNA ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು RNase ಮಾಲಿನ್ಯದ ಕುರುಹುಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರಬಹುದು.

7. ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಆರ್ಎನ್ಎಯನ್ನು ಕೆಡಿಸಲು Rnase ಅನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ಉಳಿದಿರುವ Rnase ಅನ್ನು ಪ್ರೊಟೀನೇಸ್ K ನೊಂದಿಗೆ ಜೀರ್ಣಿಸಿಕೊಳ್ಳಬೇಕು ಮತ್ತು PCI ಯಿಂದ ಹೊರತೆಗೆಯಬೇಕು.

8. ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಸಂಗ್ರಹಣೆಯು ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಶೇಖರಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದ್ದರೂ ಸಹ, ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಸ್‌ನ ಜಾಡಿನ ಪ್ರಮಾಣವು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಅವನತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯ ದೀರ್ಘಾವಧಿಯ ಸಂರಕ್ಷಣೆಗೆ ಉತ್ತಮ ಪರಿಹಾರವೆಂದರೆ ಉಪ್ಪು/ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್ ಅಮಾನತು, ಏಕೆಂದರೆ ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್ ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಎಲ್ಲಾ ಕಿಣ್ವಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ.

9. ಕ್ಯಾಟಯಾನುಗಳು (Ca, Mg) ಈ ಅಯಾನುಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವಾಗ, 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 80C ನಲ್ಲಿ ಬಿಸಿ ಮಾಡುವಿಕೆಯು RNA ಸೀಳುವಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ RNA ಅನ್ನು ಬಿಸಿಮಾಡಬೇಕಾದರೆ, ಸಂರಕ್ಷಣಾ ದ್ರಾವಣವು ಚೆಲೇಟಿಂಗ್ ಏಜೆಂಟ್ (1mM ಸೋಡಿಯಂ ಸಿಟ್ರೇಟ್, pH 6.4) ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರಬೇಕು.

10. ನಂತರದ ಪ್ರಯೋಗಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸಿದ ಕಿಣ್ವಗಳು RNase ನಿಂದ ಕಲುಷಿತವಾಗಬಹುದು.

ಆರ್ಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಗೆ 10 ಸಲಹೆಗಳು

1: RNase ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ತಡೆಯಿರಿ.ಸಂಗ್ರಹಣೆಯ ನಂತರ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಫ್ರೀಜ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಲೈಸಿಸ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಕ್ಷಿಪ್ರ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯಿಂದ RNase ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.

2: ಹೆಚ್ಚಿನ ರೈಬೋಜೈಮ್ ಅಂಶದೊಂದಿಗೆ ಅಂಗಾಂಶಕ್ಕೆ ಸೂಕ್ತವಾದ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ವಿಧಾನವನ್ನು ಆರಿಸಿ, ಮತ್ತು ಅಡಿಪೋಸ್ ಅಂಗಾಂಶವು ಫೀನಾಲ್ ಹೊಂದಿರುವ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸುವುದು ಉತ್ತಮವಾಗಿದೆ.

3: ಮುನ್ಸೂಚನೆಯ ಗುಣಮಟ್ಟಕ್ಕೆ ಉತ್ತರದ ಅಗತ್ಯವಿದೆ, cDNA ಲೈಬ್ರರಿ ನಿರ್ಮಾಣಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಮಗ್ರತೆಯ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು RT-PCR ಮತ್ತು RPA (Ribonuclease protection assay) ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಮಗ್ರತೆಯ ಅಗತ್ಯವಿರುವುದಿಲ್ಲ.RT-PCR ಗೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಶುದ್ಧತೆಯ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ (ಕಿಣ್ವ ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಉಳಿಕೆಗಳು).

4: ಸಂಪೂರ್ಣ ಏಕರೂಪೀಕರಣವು ಇಳುವರಿಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು ಮತ್ತು ಅವನತಿಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಪ್ರಮುಖವಾಗಿದೆ.

5: RNA ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಪತ್ತೆಯ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಿ, 28S: 18S = 2: 1 ಸಂಪೂರ್ಣ ಚಿಹ್ನೆ, 1: 1 ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗೆ ಸಹ ಸ್ವೀಕಾರಾರ್ಹವಾಗಿದೆ.

6: ಆರ್‌ಟಿ-ಪಿಸಿಆರ್‌ಗಾಗಿ ಡಿಎನ್‌ಎ ತೆಗೆಯುವಿಕೆ, ಅರೇ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಡಿಎನ್‌ಎ ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಡಿನೇಸ್ ಐ ಅನ್ನು ಬಳಸುವುದು ಉತ್ತಮ.

7: ಬಾಹ್ಯ ಕಿಣ್ವಗಳ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ - ಕಿಣ್ವಗಳನ್ನು ಹೊರಗಿನಿಂದ ಆಮದು ಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ.

8: ಕಡಿಮೆ-ಸಾಂದ್ರತೆಯ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲವನ್ನು ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸುವಾಗ, ಸಹ-ಅವಕ್ಷೇಪ ಕಾರಕವನ್ನು ಸೇರಿಸಬೇಕು.ಆದರೆ ಕಿಣ್ವಗಳು ಮತ್ತು DNA ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಸಹ-ಅವಕ್ಷೇಪಕವನ್ನು ತಡೆಗಟ್ಟಲು.

9: ಆರ್ಎನ್ಎಯನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಕರಗಿಸಿ, ಅಗತ್ಯವಿದ್ದರೆ, 65 ಸಿ ನಲ್ಲಿ 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಬಿಸಿ ಮಾಡಿ.

ಸೂಕ್ತವಾದ ಶೇಖರಣಾ ವಿಧಾನ

ಇದನ್ನು -20C ನಲ್ಲಿ ಅಲ್ಪಾವಧಿಗೆ ಮತ್ತು -80C ನಲ್ಲಿ ದೀರ್ಘಕಾಲ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬಹುದು.ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಇಳುವರಿಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುವ ಮೊದಲ ಹಂತವೆಂದರೆ ವಿಭಿನ್ನ ಮಾದರಿಗಳ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ವಿಷಯವು ಬಹಳ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಎಂಬುದನ್ನು ಅರಿತುಕೊಳ್ಳುವುದು.ಯಕೃತ್ತು, ಮೇದೋಜೀರಕ ಗ್ರಂಥಿ, ಹೃದಯ, ಮಧ್ಯಮ ಸಮೃದ್ಧಿ (0.05-2ug/mg) ನಂತಹ ಅಧಿಕ ಸಮೃದ್ಧಿ (2-4ug/mg) ಮೆದುಳು, ಭ್ರೂಣ, ಮೂತ್ರಪಿಂಡ, ಶ್ವಾಸಕೋಶ, ಥೈಮಸ್, ಅಂಡಾಶಯ, ಕಡಿಮೆ ಸಮೃದ್ಧಿ (<0.05ug/mg) mg) ಉದಾಹರಣೆಗೆ ಮೂತ್ರಕೋಶ, ಮೂಳೆ, ಕೊಬ್ಬು.

1: RN ಅನ್ನು ಬಿಡುಗಡೆ ಮಾಡಲು ಕೋಶಗಳನ್ನು ಲೈಸ್ ಮಾಡಿ - RNA ಬಿಡುಗಡೆಯಾಗದಿದ್ದರೆ, ಇಳುವರಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ.ಎಲೆಕ್ಟ್ರಿಕ್ ಹೋಮೊಜೆನೈಸೇಶನ್ ಇತರ ಏಕರೂಪೀಕರಣ ವಿಧಾನಗಳಿಗಿಂತ ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ದ್ರವ ಸಾರಜನಕ ಮ್ಯಾಶಿಂಗ್, ಎಂಜೈಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಜೀರ್ಣಕ್ರಿಯೆ (ಲೈಸೋಜೈಮ್ / ಲೈಟಿಕೇಸ್) ನಂತಹ ಇತರ ವಿಧಾನಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಬೇಕಾಗಬಹುದು.

2: ಹೊರತೆಗೆಯುವ ವಿಧಾನದ ಆಪ್ಟಿಮೈಸೇಶನ್.ಫೀನಾಲ್ ಆಧಾರಿತ ವಿಧಾನಗಳೊಂದಿಗಿನ ದೊಡ್ಡ ಸಮಸ್ಯೆಗಳೆಂದರೆ ಅಪೂರ್ಣ ಶ್ರೇಣೀಕರಣ ಮತ್ತು ಭಾಗಶಃ ಆರ್ಎನ್ಎ ನಷ್ಟ (ಸೂಪರ್ನಾಟಂಟ್ ಅನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ).ಅಪೂರ್ಣ ಶ್ರೇಣೀಕರಣವು ಹೆಚ್ಚಿನ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅಂಶದ ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಇದನ್ನು ಬಳಸಿದ ಲೈಸೇಟ್ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುವ ಮೂಲಕ ಅಥವಾ ಮಾದರಿಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಪರಿಹರಿಸಬಹುದು.ಅಡಿಪೋಸ್ ಅಂಗಾಂಶಕ್ಕೆ ಕ್ಲೋರೊಫಾರ್ಮ್ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯ ಹಂತವನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು.ಆರ್ಎನ್ಎ ನಷ್ಟವನ್ನು ಬ್ಯಾಕ್-ಪಂಪಿಂಗ್ ಮೂಲಕ ಅಥವಾ ಸಾವಯವ ಪದರವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುವುದರ ಮೂಲಕ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದು.ಕಾಲಮ್ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ-ಆಧಾರಿತ ವಿಧಾನಗಳೊಂದಿಗಿನ ದೊಡ್ಡ ಸಮಸ್ಯೆ ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಮಾದರಿಯಾಗಿದೆ.

ಕ್ಲಾಸಿಕ್ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಸಲಹೆಗಳು

1. ಫೀನಾಲ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣ: 1: 1 ಫೀನಾಲ್ / ಕ್ಲೋರೋಫಾರ್ಮ್ನ ಸಮಾನ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು 1-2 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ತೀವ್ರವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ.2 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಹೆಚ್ಚಿನ ವೇಗದಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ.ಸೂಪರ್ನಾಟಂಟ್ ಅನ್ನು ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ತೆಗೆದುಹಾಕಿ (80-90%).ಮಧ್ಯದ ಪದರಕ್ಕೆ ಎಂದಿಗೂ ಹೋಗಬೇಡಿ.ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ಪರಿಹಾರದ ಸಮಾನ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಫೀನಾಲ್/ಕ್ಲೋರೋಫಾರ್ಮ್‌ಗೆ ಸೇರಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಸೂಪರ್‌ನಾಟಂಟ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು.ಇಳುವರಿಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಅವಕ್ಷೇಪಕ್ಕಾಗಿ ಎರಡು ಸೂಪರ್‌ನಾಟಂಟ್‌ಗಳನ್ನು ಒಟ್ಟಿಗೆ ಬೆರೆಸಬಹುದು.ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡುವಾಗ ತುಂಬಾ ಮೃದುವಾಗಿರಬೇಡಿ ಮತ್ತು ಎಲ್ಲಾ ಸೂಪರ್ನಾಟಂಟ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಬೇಡಿ.

2. 70-80% ಎಥೆನಾಲ್ನೊಂದಿಗೆ ತೊಳೆಯುವುದು: ತೊಳೆಯುವ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಉಳಿದಿರುವ ಉಪ್ಪನ್ನು ತೊಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲವನ್ನು ಅಮಾನತುಗೊಳಿಸಬೇಕು.ಅದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಎಥೆನಾಲ್ ಅನ್ನು ಸುರಿದ ತಕ್ಷಣ, ಕೆಲವು ಸೆಕೆಂಡುಗಳ ಕಾಲ ಹೆಚ್ಚಿನ ವೇಗದಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡಿ, ತದನಂತರ ಉಳಿದಿರುವ ಎಥೆನಾಲ್ ಅನ್ನು ಪೈಪೆಟ್ನೊಂದಿಗೆ ತೆಗೆದುಹಾಕಿ.5-10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ನಿಂತ ನಂತರ ಕರಗಿಸಿ.

11. ವಿಶೇಷ ಸಂಸ್ಥೆಗಳ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ

1. ನಾರಿನ ಅಂಗಾಂಶ: ಹೃದಯ/ಅಸ್ಥಿಪಂಜರದ ಸ್ನಾಯುಗಳಂತಹ ನಾರಿನ ಅಂಗಾಂಶದಿಂದ ಆರ್ಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಕೀಲಿಯು ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುವುದು.ಈ ಅಂಗಾಂಶಗಳು ಕಡಿಮೆ ಜೀವಕೋಶದ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಅಂಗಾಂಶದ ಪ್ರತಿ ಯೂನಿಟ್ ತೂಕದ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಪ್ರಮಾಣವು ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಸಾಧ್ಯವಾದಷ್ಟು ಆರಂಭಿಕ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಬಳಸುವುದು ಉತ್ತಮ.ಘನೀಕರಿಸುವ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಪುಡಿಮಾಡಲು ಮರೆಯದಿರಿ.

2. ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರೊಟೀನ್/ಕೊಬ್ಬಿನ ಅಂಶವಿರುವ ಅಂಗಾಂಶಗಳು: ಮೆದುಳು/ತರಕಾರಿ ಕೊಬ್ಬಿನ ಅಂಶ ಹೆಚ್ಚಾಗಿರುತ್ತದೆ.PCI ಹೊರತೆಗೆದ ನಂತರ, ಸೂಪರ್ನಾಟಂಟ್ ಬಿಳಿ ಫ್ಲೋಕುಲ್ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ.ಸೂಪರ್ನಾಟಂಟ್ ಅನ್ನು ಕ್ಲೋರೊಫಾರ್ಮ್ನೊಂದಿಗೆ ಮರು-ಹೊರತೆಗೆಯಬೇಕು.

3. ಹೆಚ್ಚಿನ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ/ರೈಬೋಜೈಮ್ ಅಂಶವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಅಂಗಾಂಶಗಳು: ಗುಲ್ಮ/ಥೈಮಸ್ ಹೆಚ್ಚಿನ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಮತ್ತು ರೈಬೋಜೈಮ್ ಅಂಶವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ.ಘನೀಕರಿಸುವ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ಗ್ರೈಂಡಿಂಗ್ ತ್ವರಿತ ಏಕರೂಪೀಕರಣದ ನಂತರ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ರೈಬೋಜೈಮ್ಗಳನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಬಹುದು.ಆದಾಗ್ಯೂ, ಲೈಸೇಟ್ ತುಂಬಾ ಸ್ನಿಗ್ಧತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದರೆ (ಹೆಚ್ಚಿನ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಅಂಶದಿಂದಾಗಿ), PCI ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಶ್ರೇಣೀಕರಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುವುದಿಲ್ಲ;ಹೆಚ್ಚು ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸುವುದರಿಂದ ಈ ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು ಪರಿಹರಿಸಬಹುದು.ಬಹು PCI ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಗಳು ಹೆಚ್ಚು ಉಳಿದಿರುವ DNA ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು.ಆಲ್ಕೋಹಾಲ್ ಸೇರಿಸಿದ ತಕ್ಷಣ ಬಿಳಿ ಅವಕ್ಷೇಪವು ರೂಪುಗೊಂಡರೆ, ಇದು ಡಿಎನ್ಎ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.ವಿಸರ್ಜನೆಯ ನಂತರ ಆಮ್ಲೀಯ PCI ನೊಂದಿಗೆ ಮರು-ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯು DNA ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು.

4. ಸಸ್ಯ ಅಂಗಾಂಶ: ಸಸ್ಯ ಅಂಗಾಂಶವು ಪ್ರಾಣಿಗಳ ಅಂಗಾಂಶಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಸಂಕೀರ್ಣವಾಗಿದೆ.ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ಸಸ್ಯಗಳು ದ್ರವರೂಪದ ಸಾರಜನಕ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ನೆಲಸುತ್ತವೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಕಿಣ್ವಗಳಿಂದ ಆರ್ಎನ್ಎ ಅವನತಿಯು ಅಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿದೆ.ಅವನತಿ ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು ಪರಿಹರಿಸದಿದ್ದರೆ, ಇದು ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಕಲ್ಮಶಗಳಿಂದ ಬಹುತೇಕ ಖಚಿತವಾಗಿ ಉಂಟಾಗುತ್ತದೆ.ಅನೇಕ ಸಸ್ಯಗಳಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಕಲ್ಮಶಗಳು ಶೇಷಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಶೇಷಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವೆಂದರೆ ಈ ಕಲ್ಮಶಗಳು ಆರ್ಎನ್ಎಯೊಂದಿಗೆ ಕೆಲವು ಹೋಲಿಕೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ: ನೀವು ಅವಕ್ಷೇಪಿಸುತ್ತೀರಿ ಮತ್ತು ನಾನು ಅವಕ್ಷೇಪಿಸುತ್ತೀರಿ, ಮತ್ತು ನೀವು ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುತ್ತೀರಿ ಮತ್ತು ನಾನು ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುತ್ತೇವೆ.ಈ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳು ಅವು ಬಲವಾದ ಕಿಣ್ವ ಪ್ರತಿರೋಧಕಗಳಾಗಿವೆ ಎಂದು ನಿರ್ಧರಿಸುತ್ತದೆ.

ಪ್ರಸ್ತುತ, ವಾಣಿಜ್ಯ RNA ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಕಾರಕಗಳನ್ನು ಸಣ್ಣ ಹೊಂದಾಣಿಕೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಬಹುತೇಕ ಎಲ್ಲಾ ಪ್ರಾಣಿ ಅಂಗಾಂಶಗಳಿಗೆ ಅಳವಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಬಹುದು, ಆದರೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಸ್ಯ ಅಂಗಾಂಶಗಳಿಗೆ ಸೂಕ್ತವಾದ ಕೆಲವು ವಾಣಿಜ್ಯ RNA ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಕಾರಕಗಳಿವೆ.ಅದೃಷ್ಟವಶಾತ್, Foregene ವಿಶೇಷ ಒದಗಿಸಬಹುದುಸಸ್ಯ ಆರ್ಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಕಿಟ್ಗಳು, ನಾವು ಹೊಂದಿದ್ದೇವೆಸಸ್ಯದ ಒಟ್ಟು ಆರ್ಎನ್ಎ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯ ಕಿಟ್, ಸಸ್ಯದ ಒಟ್ಟು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಕಿಟ್ ಪ್ಲಸ್.ಎರಡನೆಯದು ಹೆಚ್ಚಿನ ಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್ ಮತ್ತು ಪಾಲಿಫಿನಾಲ್ ಅಂಶವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಸಸ್ಯಗಳಿಗೆ ವಿಶೇಷವಾಗಿ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ.ಆರ್ಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಗೆ, ಲ್ಯಾಬ್ ಬಳಕೆದಾರರಿಂದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಉತ್ತಮವಾಗಿದೆ.

12. ಮಾದರಿಯ ಘನೀಕರಣ ಮತ್ತು ಕರಗುವಿಕೆಯ ಪರಿಣಾಮ ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟಿದ ಮಾದರಿಯು ದೊಡ್ಡದಾಗಿರಬಹುದು ಮತ್ತು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಗೆ ಬಳಸುವ ಮೊದಲು ಅದನ್ನು ಕತ್ತರಿಸಬೇಕಾಗುತ್ತದೆ.ಕತ್ತರಿಸುವ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಮಾದರಿಗಳು ಕರಗುತ್ತವೆ (ಬಹುಶಃ ಭಾಗಶಃ).ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಮೊದಲು ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟಿದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ತೂಕ ಮಾಡಬೇಕಾಗಬಹುದು ಮತ್ತು ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಕರಗುವಿಕೆಯು ಖಂಡಿತವಾಗಿಯೂ ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ.ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ, ದ್ರವ ಸಾರಜನಕ ಮಿಲ್ಲಿಂಗ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಮಾದರಿಯ ಕರಗುವಿಕೆಯು ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ;ಅಥವಾ ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟಿದ ಮಾದರಿಯನ್ನು ದ್ರವ ಸಾರಜನಕ ಮಿಲ್ಲಿಂಗ್ ಇಲ್ಲದೆ ನೇರವಾಗಿ ಲೈಸೇಟ್‌ಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸಂಪೂರ್ಣ ಏಕರೂಪೀಕರಣದ ಮೊದಲು ಕರಗುವಿಕೆಯು ಖಂಡಿತವಾಗಿಯೂ ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ.ತಾಜಾ ಅಂಗಾಂಶಗಳಿಗಿಂತ ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟಿದ ಅಂಗಾಂಶವು ಕರಗುವ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಆರ್ಎನ್ಎ ಅವನತಿಗೆ ಹೆಚ್ಚು ಒಳಗಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ಪ್ರಯೋಗಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ.ಸಂಭವನೀಯ ಕಾರಣ: ಫ್ರೀಜ್-ಲೇಪ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ಜೀವಕೋಶದೊಳಗಿನ ರಚನೆಗಳನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸುತ್ತದೆ, ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಕಿಣ್ವಗಳು RNA ಯೊಂದಿಗೆ ನೇರ ಸಂಪರ್ಕಕ್ಕೆ ಬರಲು ಸುಲಭವಾಗುತ್ತದೆ.

13. ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಗುಣಮಟ್ಟದ ತೀರ್ಪು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲು ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯ ಶುದ್ಧತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲು ಎ 260/ಎ280 ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಸಿದ್ಧಾಂತದಲ್ಲಿ, ಅಖಂಡ RNAಯು 28S:18S = 2.7:1 ರ ಅನುಪಾತವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಡೇಟಾವು 28S:18S = 2:1 ರ ಅನುಪಾತವನ್ನು ಒತ್ತಿಹೇಳುತ್ತದೆ.ವಾಸ್ತವವಾಗಿ ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಹೊರತುಪಡಿಸಿ ಇತರ ಮಾದರಿಗಳಿಂದ ಹೊರತೆಗೆಯಲಾದ ಯಾವುದೇ ಆರ್ಎನ್ಎ 2:1 ಅನುಪಾತದಲ್ಲಿಲ್ಲ (ಇದನ್ನು ಎಜಿಲೆಂಟ್ ಬಯೋಅನಾಲೈಜರ್ ಬಳಸಿ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ).

RNAಯ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ದ್ವಿತೀಯ ರಚನೆ, ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಸ್ಥಿತಿಗಳು, ಮಾದರಿ ಲೋಡ್, EB ಯಿಂದ ಶುದ್ಧತ್ವದ ಮಟ್ಟ, ಇತ್ಯಾದಿ ಸೇರಿದಂತೆ ಹಲವು ಅಂಶಗಳಿಂದ ಪ್ರಭಾವಿತವಾಗಿರುತ್ತದೆ. RNA ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಮತ್ತು DNA ಮಾರ್ಕರ್ ಅನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ ಬಳಸಲು ಸ್ಥಳೀಯ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿ.2kb ನಲ್ಲಿ 28S ಮತ್ತು 0.9kb ನಲ್ಲಿ 18S ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿದ್ದರೆ ಮತ್ತು 28S: 18S > 1, ಸಮಗ್ರತೆಯು ಹೆಚ್ಚಿನ ನಂತರದ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಅವಶ್ಯಕತೆಗಳನ್ನು ಪೂರೈಸುತ್ತದೆ.

A260/A280 ಒಂದು ಸೂಚಕವಾಗಿದ್ದು ಅದು ಬಹಳಷ್ಟು ಗೊಂದಲವನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಿದೆ.ಮೊದಲನೆಯದಾಗಿ, ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳಿಗೆ ಈ ಸೂಚಕದ ಮೂಲ ಅರ್ಥವನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟಪಡಿಸುವುದು ಅವಶ್ಯಕ: ಶುದ್ಧ ಆರ್ಎನ್ಎ, ಅದರ A260/280 = ಸುಮಾರು 2.0.ಶುದ್ಧ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ 'ಕಾರಣ' ಮತ್ತು A260/A280 = 2 'ಪರಿಣಾಮ'.ಈಗ ಎಲ್ಲರೂ A260/A280 ಅನ್ನು 'ಕಾರಣ'ವಾಗಿ ಬಳಸುತ್ತಿದ್ದಾರೆ, "A260/A280 = 2 ಆಗಿದ್ದರೆ, ನಂತರ RNA ಶುದ್ಧವಾಗಿದೆ" ಎಂದು ಭಾವಿಸುತ್ತಾರೆ, ಇದು ಸಹಜವಾಗಿ ಗೊಂದಲಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ.

ನಿಮಗೆ ಆಸಕ್ತಿಯಿದ್ದರೆ, ಫೀನಾಲ್, ಗ್ವಾನಿಡಿನ್ ಐಸೊಥಿಯೋಸೈನೇಟ್, PEG, ಇತ್ಯಾದಿಗಳಂತಹ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ಸ್ವಲ್ಪ ಕಾರಕವನ್ನು ನಿಮ್ಮ RNA ಮಾದರಿಗೆ ಸೇರಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ನಂತರ A260/A280 ಅನುಪಾತವನ್ನು ಅಳೆಯಬಹುದು.ವಾಸ್ತವವೆಂದರೆ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಗೆ ಬಳಸಲಾಗುವ ಅನೇಕ ಕಾರಕಗಳು, ಹಾಗೆಯೇ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿನ ಅನೇಕ ಕಲ್ಮಶಗಳು, ಸುಮಾರು A260 ಮತ್ತು A280 ಅನ್ನು ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ, ಇದು A260/A280 ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ.

ಪ್ರಸ್ತುತ ಅತ್ಯಂತ ಬೋಧಪ್ರದ ವಿಧಾನವೆಂದರೆ 200-300 nm ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ RNA ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸ್ಕ್ಯಾನ್ ಮಾಡುವುದು.ಶುದ್ಧ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ವಕ್ರರೇಖೆಯು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ: ವಕ್ರರೇಖೆಯು ನಯವಾಗಿರುತ್ತದೆ, A230 ಮತ್ತು A260 ಎರಡು ಒಳಹರಿವಿನ ಬಿಂದುಗಳಾಗಿವೆ, A300 0, A260/A280 = ಸುಮಾರು 2.0, ಮತ್ತು A260/A230 = ಸುಮಾರು 2.0.ಸ್ಕ್ಯಾನ್ ಡೇಟಾ ಲಭ್ಯವಿಲ್ಲದಿದ್ದರೆ, A260/A230 ಅನುಪಾತವನ್ನು ಸಹ ನಿರ್ಧರಿಸಬೇಕು, ಏಕೆಂದರೆ ಈ ಅನುಪಾತವು ಕಿಣ್ವಕ ಕ್ರಿಯೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಎಲ್ಲಾ ಕಲ್ಮಶಗಳನ್ನು ಸಾಗಿಸಲು ಹೆಚ್ಚು ಸಂವೇದನಾಶೀಲವಾಗಿರುತ್ತದೆ.ಸಾಧನದ ರೇಖೀಯ ಶ್ರೇಣಿಯನ್ನು ಗಣನೆಗೆ ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಿ (A260 ಗಾಗಿ 0.1-0.5).

ಎರಡು ಇತರ ಉಪಯುಕ್ತ ವಿದ್ಯಮಾನಗಳಿವೆ: A260/A280 ಅನ್ನು ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಅಳೆಯಿದಾಗ ಅನುಪಾತವು ಸುಮಾರು 0.3 ಕಡಿಮೆ ಇರುತ್ತದೆ;10 mM EDTA ಯಲ್ಲಿ ಅಳತೆ ಮಾಡಲಾದ ಅನುಪಾತವು 1 mM EDTA ಯಲ್ಲಿ ಅಳತೆ ಮಾಡುವುದಕ್ಕಿಂತ ಸುಮಾರು 0.2 ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ.

ಸಂಬಂಧಿತ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು:

ಚೀನಾ ಪ್ಲಾಂಟ್ ಒಟ್ಟು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಐಸೊಲೇಶನ್ ಕಿಟ್ ತಯಾರಕರು ಮತ್ತು ಪೂರೈಕೆದಾರರು |ಫೋರ್ಜೀನ್ (foreivd.com)

ಆರ್ಎನ್ಎ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯ ಸರಣಿ ಪೂರೈಕೆದಾರರು ಮತ್ತು ಕಾರ್ಖಾನೆ |ಚೀನಾ RNA ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯ ಸರಣಿ ತಯಾರಕರು (foreivd.com)

ಆರ್ಎನ್ಎ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯ ಸರಣಿ - ಫೋರ್ಜೀನ್ ಕಂ., ಲಿಮಿಟೆಡ್. (foreivd.com)