Escherichia Coli O157: H7 ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ಡಿಟೆಕ್ಷನ್ ಕಿಟ್ (PCR ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಪ್ರೋಬ್ ಮೆಥಡ್/ಲೈಯೋಫಿಲೈಸೇಶನ್)
ಕಿಟ್ ವಿವರಣೆ:
ಕ್ಯಾಟ್.ಸಂ.FP103
ಆಹಾರ, ಫೀಡ್, ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳು ಮತ್ತು ಪರಿಸರ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ E. coli O157:H7 ಅನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಮತ್ತು ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ಮಾಡಲು ಇದನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ವಿವರಣೆಗಳು
ಇದನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆಆಹಾರ, ಫೀಡ್, ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳು ಮತ್ತು ಪರಿಸರ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ E. coli O157:H7 ನ ತ್ವರಿತ ಪತ್ತೆ ಮತ್ತು ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್.
[ಪರೀಕ್ಷಾ ತತ್ವ]
ಪ್ರತಿದೀಪಕ PCR ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದ ತತ್ತ್ವದ ಪ್ರಕಾರ, ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು Taqman ಪ್ರೋಬ್‌ಗಳನ್ನು Escherichia coli O157: H7 ನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಜೀನ್‌ಗಾಗಿ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿದೀಪಕ PCR ಉಪಕರಣದಿಂದ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲಾಗಿದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ Escherichia coli O157: H7 DNA ಯ ಗುಣಾತ್ಮಕ ಪತ್ತೆಯನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು.
ಕಿಟ್ ವಿಷಯಗಳು
ಗಮನಿಸಿ: ROX ಚಾನಲ್ ತನಿಖೆಯನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ.
| Cವಿರೋಧಿಗಳು | ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ | Qಪ್ರಾಮುಖ್ಯತೆ |
| ಬಫರ್ ಎ | ಕೊಳವೆ | 1 |
| ಬಫರ್ ಬಿ | ಕೊಳವೆ | 1 |
| ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ | ಕೊಳವೆ | 1 |
| ನಕಾರಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ | ಕೊಳವೆ | 1 |
ನಿರೀಕ್ಷಿತ ಬಳಕೆ
ಇದನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಆಹಾರ, ಫೀಡ್, ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳು ಮತ್ತು ಪರಿಸರ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ E. coli O157:H7 ನ ತ್ವರಿತ ಪತ್ತೆ ಮತ್ತು ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್.
ಶೇಖರಣಾ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು ಮತ್ತು ಮುಕ್ತಾಯ ದಿನಾಂಕ
ಕತ್ತಲೆಯಲ್ಲಿ -20℃ ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ ಮತ್ತು ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಘನೀಕರಣ ಮತ್ತು ಕರಗುವಿಕೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ.
ಮಾನ್ಯತೆಯ ಅವಧಿಯು 12 ಆಗಿದೆತಿಂಗಳುಗಳು, ಮತ್ತು ಉತ್ಪಾದನಾ ದಿನಾಂಕವನ್ನು ಹೊರಗಿನ ಪ್ಯಾಕೇಜಿಂಗ್‌ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಉಪಕರಣಗಳು ಮತ್ತು ಉಪಭೋಗ್ಯ
ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಕ್ವಾಂಟಿಟೇಟಿವ್ PCR ಉಪಕರಣ, ಪೈಪೆಟ್ ಗನ್ ಮತ್ತು ಹೊಂದಾಣಿಕೆಯ ಸಲಹೆಗಳು, ಸುಳಿಯ ಶೇಕರ್, ಮಿನಿ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್.
ಬಳಕೆ
1. ಮಾದರಿ ಸಂಸ್ಕರಣೆ
1.1 ಮಾದರಿ ಪ್ರಕಾರ: ಈ ಕಿಟ್ ಆಹಾರ, ಫೀಡ್, ನೀರಿನ ಮಾದರಿಗಳು ಮತ್ತು Escherichia coli O157:H7 ನಿಂದ ಕಲುಷಿತಗೊಂಡಿರುವ ಶಂಕಿತ ಇತರ ಮಾದರಿಗಳಿಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ.ಆಳವಾದ-ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಮಾಂಸ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು, ಪಾನೀಯಗಳು ಮತ್ತು ವರ್ಣದ್ರವ್ಯಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಇತರ ಪದಾರ್ಥಗಳಿಗಾಗಿ, ಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಸಿಗ್ನಲ್ ಸಂಗ್ರಹದ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವುದನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಅವುಗಳನ್ನು ತೊಳೆಯಬೇಕು.
1.2 ಮಾದರಿ ಸಂಸ್ಕರಣೆ: "GB 4789.10-2016 ಫುಡ್ ಸೇಫ್ಟಿ ನ್ಯಾಶನಲ್ ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ಫುಡ್ ಮೈಕ್ರೋಬಯೋಲಾಜಿಕಲ್ ಎಕ್ಸಾಮಿನೇಷನ್ ಆಫ್ ಎಸ್ಚೆರಿಚಿಯಾ ಕೋಲಿ O157: H7 ಟೆಸ್ಟ್" ಅನ್ನು ನೋಡಿ ಮಾದರಿ ತಯಾರಿಕೆ, ಪುಷ್ಟೀಕರಣ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮತ್ತು ಎಸ್ಚೆರಿಚಿಯಾ ಕೋಲಿ O157: H7.
- Nಯುಕ್ಲಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆ
1.5 mL ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್‌ನಲ್ಲಿ 20 mL ಪುಷ್ಟೀಕರಣ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಿ, 200 μL ಮೈಕ್ರೋಬಿಯಲ್ ಲೈಸೇಟ್ (ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಕಿಟ್ ಅಗತ್ಯವಿದೆ), 30 ಸೆಕೆಂಡುಗಳ ಕಾಲ ಸುಳಿ, ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ ಮತ್ತು ಪಕ್ಕಕ್ಕೆ ಇರಿಸಿ.
ಟೀಕೆಗಳು: ಲೈಸೇಟ್‌ನಿಂದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಯು 10 ನಿಮಿಷಗಳಲ್ಲಿ ಪೂರ್ಣಗೊಳ್ಳಬೇಕು ಮತ್ತು ದೀರ್ಘಕಾಲದವರೆಗೆ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ.
3. ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಸಿಡ್ ವರ್ಧನೆ
3.1 ಬಳಕೆಗಾಗಿ ಫ್ಲೋರೊಸೆಂಟ್ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ PCR ಉಪಕರಣವನ್ನು ಆನ್ ಮಾಡಿ.
ಕಿಟ್‌ನಿಂದ ಬಫರ್ ಎ ಮತ್ತು ಬಫರ್ ಬಿ , ಅವುಗಳನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಕರಗಿಸಿ ಮತ್ತು ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡಿ.ಪ್ರತಿ PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ 18 μL ಬಫರ್ A ಮತ್ತು 2 μL ಬಫರ್ B ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ.ನಂತರ 5 mL ಪ್ರತಿ ಋಣಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣ, ಹೊರತೆಗೆಯಲಾದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಮತ್ತು ಧನಾತ್ಮಕ ನಿಯಂತ್ರಣವನ್ನು PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಸೇರಿಸಿ, ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳನ್ನು ಕ್ಯಾಪ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ.
3.3 ಪಿಸಿಆರ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಟ್ಯೂಬ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತಿದೀಪಕ PCR ಯಂತ್ರಕ್ಕೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ ಮತ್ತು ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ಮಾಡಲು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ: ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗೆ 25 mL ಅನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿ, ಪ್ರತಿ ಚಕ್ರಕ್ಕೆ 60 ° C ನಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿದೀಪಕ ಸಂಕೇತಗಳನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ ಮತ್ತು ಪತ್ತೆ ಚಾನಲ್‌ಗಾಗಿ FAM ಅನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿ.
| ಹಂತ | ಕಾರ್ಯಕ್ರಮ | ಚಕ್ರಗಳ ಸಂಖ್ಯೆ |
| 1 | 37℃ 5 ನಿಮಿಷ | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 ನಿಮಿಷ | 1 |
| 3 | 95°C 15ಸೆ | 4 0 |
| 60℃ 30 ಸೆ (ಪ್ರತಿದೀಪಕವನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ) |
ಸಮಸ್ಯೆಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿಗಳು
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
ಯಾವುದೇ ಆರ್ಎನ್ಎಯನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ ಅಥವಾ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಇಳುವರಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ
ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಚೇತರಿಕೆಯ ದಕ್ಷತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವ ಹಲವು ಅಂಶಗಳಿವೆ, ಅವುಗಳೆಂದರೆ: ಮಾದರಿ RNA ವಿಷಯ, ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ವಿಧಾನ, ಎಲುಷನ್ ಪರಿಮಾಣ, ಇತ್ಯಾದಿ.
ಸಾಮಾನ್ಯ ಕಾರಣಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ:
ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ 1.ಐಸ್ ಬಾತ್ ಅಥವಾ ಕಡಿಮೆ-ತಾಪಮಾನದ (4 ° C) ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ.
ಸಲಹೆ: ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶ (15-25 ° C) ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆ, ಎಂದಿಗೂ ಐಸ್ ಸ್ನಾನ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನದ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ.
2. ಅಸಮರ್ಪಕ ಮಾದರಿ ಸಂಗ್ರಹಣೆ ಅಥವಾ ತುಂಬಾ ಸಮಯದವರೆಗೆ ಮಾದರಿ ಸಂಗ್ರಹಣೆ.
ಸಲಹೆ: ಮಾದರಿಗಳನ್ನು -80 ° C ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ ಅಥವಾ ದ್ರವ ಸಾರಜನಕದಲ್ಲಿ ಫ್ರೀಜ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಫ್ರೀಜ್-ಲೇಪ ಬಳಕೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಿ;ಆರ್ಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯಲು ಹೊಸದಾಗಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿ.
3.ಸಾಕಷ್ಟು ಸ್ಯಾಂಪಲ್ ಲೈಸಿಸ್
ಶಿಫಾರಸು: ದಯವಿಟ್ಟು ಮಾದರಿ ಮತ್ತು ಕೆಲಸದ ಪರಿಹಾರವನ್ನು (ಲೀನಿಯರ್ ಅಕ್ರಿಲಾಮೈಡ್) ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ (15-25 ° C) 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ.
4. ಎಲುಯೆಂಟ್ ಅನ್ನು ತಪ್ಪಾಗಿ ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆ
ಶಿಫಾರಸು: ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್ನ ಪೊರೆಯ ಮಧ್ಯಕ್ಕೆ RNase-Free ddH2O ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆಯೇ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ
5.ಬಫರ್ ವಿಆರ್ಡಬ್ಲ್ಯೂ 2 ನಲ್ಲಿನ ಜಲರಹಿತ ಎಥೆನಾಲ್ನ ಅಸಮರ್ಪಕ ಪರಿಮಾಣ
ಸಲಹೆ: ದಯವಿಟ್ಟು ಸೂಚನೆಗಳನ್ನು ಅನುಸರಿಸಿ, ಬಫರ್ ವಿಆರ್ಡಬ್ಲ್ಯೂ 2 ಗೆ ಸರಿಯಾದ ಪ್ರಮಾಣದ ಅನ್‌ಹೈಡ್ರಸ್ ಎಥೆನಾಲ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಕಿಟ್ ಬಳಸುವ ಮೊದಲು ಅವುಗಳನ್ನು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ.
6.ಅಸಮರ್ಪಕ ಮಾದರಿ ಬಳಕೆ.
ಸಲಹೆ: ಪ್ರತಿ 500μl ಬಫರ್ viRL ಗೆ 200µl ಮಾದರಿ.ಅಧಿಕ ಮಾದರಿಯ ಪರಿಮಾಣವು ಆರ್ಎನ್ಎ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ದರವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
7.ಅಸಮರ್ಪಕ ಎಲುಷನ್ ವಾಲ್ಯೂಮ್ ಅಥವಾ ಅಪೂರ್ಣ ಎಲುಷನ್.
ಸಲಹೆ: ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್ನ ಎಲುವೆಂಟ್ ಪರಿಮಾಣವು 30-50μl ಆಗಿದೆ;ಎಲುಷನ್ ಪರಿಣಾಮವು ತೃಪ್ತಿಕರವಾಗಿಲ್ಲದಿದ್ದರೆ, ಪೂರ್ವ-ಬಿಸಿಮಾಡಿದ RNase-ಮುಕ್ತ ddH ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಲು ಸೂಚಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ2O ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಇರಿಸುವ ಸಮಯವನ್ನು ವಿಸ್ತರಿಸಿ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ 5-10 ನಿಮಿಷಗಳು
8.ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್ ಬಫರ್ viRW2 ನಲ್ಲಿ ತೊಳೆಯುವ ನಂತರ ಎಥೆನಾಲ್ ಶೇಷವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ.
ಸಲಹೆ: ಬಫರ್ viRW2 ಮತ್ತು ಖಾಲಿ-ಟ್ಯೂಬ್ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಗೇಶನ್‌ನಲ್ಲಿ 2 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ತೊಳೆಯುವ ನಂತರ ಎಥೆನಾಲ್ ಇನ್ನೂ ಉಳಿದಿದ್ದರೆ, ಉಳಿದ ಎಥೆನಾಲ್ ಅನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್ ಅನ್ನು ಖಾಲಿ-ಟ್ಯೂಬ್ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಗೇಶನ್ ನಂತರ 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಬಿಡಬಹುದು.
ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಆರ್ಎನ್ಎ ಅಣುಗಳ ಅವನತಿ
ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ RNA ಯ ಗುಣಮಟ್ಟವು ಮಾದರಿ ಸಂಗ್ರಹಣೆ, RNase ಮಾಲಿನ್ಯ ಮತ್ತು ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯಂತಹ ಅಂಶಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ.
ಸಾಮಾನ್ಯ ಕಾರಣಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ:
1. ಸಂಗ್ರಹಿಸಿದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸಮಯಕ್ಕೆ ಉಳಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ.
ಸಲಹೆ: ಸಂಗ್ರಹಣೆಯ ನಂತರ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಸಮಯಕ್ಕೆ ಬಳಸದಿದ್ದರೆ, ದಯವಿಟ್ಟು ಅದನ್ನು -80 ℃ ಅಥವಾ ದ್ರವ ಸಾರಜನಕದಲ್ಲಿ ತಕ್ಷಣವೇ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ.ಆರ್ಎನ್ಎ ಅಣುಗಳ ಹೊರತೆಗೆಯುವಿಕೆಗಾಗಿ, ಸಾಧ್ಯವಾದಾಗಲೆಲ್ಲಾ ಹೊಸದಾಗಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಲು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿ.
2. ಸಂಗ್ರಹಿಸಿದ ಮಾದರಿಗಳು ಘನೀಕರಿಸುವ ಮತ್ತು ಪದೇ ಪದೇ ಕರಗುತ್ತವೆ.
ಸಲಹೆ: ಮಾದರಿ ಸಂಗ್ರಹಣೆ ಮತ್ತು ಶೇಖರಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಘನೀಕರಣ ಮತ್ತು ಕರಗುವಿಕೆಯನ್ನು (ಒಂದಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಬಾರಿ) ತಪ್ಪಿಸಿ, ಇಲ್ಲದಿದ್ದರೆ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಇಳುವರಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ.
3.ಆರ್ನೇಸ್ ಅನ್ನು ಆಪರೇಟಿಂಗ್ ಕೋಣೆಯಲ್ಲಿ ಪರಿಚಯಿಸಲಾಯಿತು ಅಥವಾ ಬಿಸಾಡಬಹುದಾದ ಕೈಗವಸುಗಳು, ಮುಖವಾಡಗಳು ಇತ್ಯಾದಿಗಳನ್ನು ಧರಿಸಿರಲಿಲ್ಲ.
ಸಲಹೆ: ಆರ್ಎನ್ಎ ಅಣುಗಳ ಪ್ರಯೋಗವನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಆರ್ಎನ್ಎ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆ ಕೊಠಡಿಯಲ್ಲಿ ಉತ್ತಮವಾಗಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಯೋಗದ ಮೊದಲು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಕೋಷ್ಟಕವನ್ನು ಸ್ವಚ್ಛಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.RNase ಪರಿಚಯದಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ RNA ಅವನತಿಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಪ್ರಯೋಗದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಬಿಸಾಡಬಹುದಾದ ಕೈಗವಸುಗಳು ಮತ್ತು ಮುಖವಾಡಗಳನ್ನು ಧರಿಸಿ.
4. ಬಳಕೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ RNase ನಿಂದ ಕಾರಕವು ಕಲುಷಿತಗೊಂಡಿದೆ.
ಸಲಹೆ: ಸಂಬಂಧಿತ ಪ್ರಯೋಗಗಳಿಗಾಗಿ ಹೊಸ ವೈರಲ್ ಆರ್ಎನ್ಎ ಐಸೋಲೇಶನ್ ಕಿಟ್ ಅನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಿ.
5.ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳು, ಪೈಪೆಟ್ ಟಿಪ್ಸ್, ಇತ್ಯಾದಿಗಳ RNase ಮಾಲಿನ್ಯ. ಸಲಹೆ: ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗಳು, ಪೈಪೆಟ್ ಟಿಪ್ಸ್ ಮತ್ತು ಪೈಪೆಟ್‌ಗಳು ಎಲ್ಲಾ RNase-ಫ್ರೀ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ.
ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಆರ್ಎನ್ಎ ಅಣುಗಳು ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರಿತು
ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್‌ನಿಂದ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಆರ್ಎನ್ಎ ಅಣುಗಳು ಹೆಚ್ಚು ಉಪ್ಪು ಅಯಾನುಗಳು ಅಥವಾ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ಇದ್ದಲ್ಲಿ ಕೆಳಮಟ್ಟದ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತವೆ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ: ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್, ನಾರ್ದರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟ್, ಇತ್ಯಾದಿ.
1.ಎಲುಟೆಡ್ ಆರ್ಎನ್ಎ ಅಣುಗಳಲ್ಲಿ ಉಳಿದಿರುವ ಉಪ್ಪು ಅಯಾನುಗಳಿವೆ.
ಶಿಫಾರಸು: ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದ ಎಥೆನಾಲ್ನ ಸರಿಯಾದ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ಬಫರ್ viRW2 ಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆಯೆ ಎಂದು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಿ ಮತ್ತು ಆಪರೇಟಿಂಗ್ ಸೂಚನೆಗಳ ಮೇಲೆ ಸರಿಯಾದ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ವೇಗದ ಪ್ರಕಾರ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್ ಅನ್ನು ಎರಡು ಬಾರಿ ತೊಳೆಯಿರಿ; ಇನ್ನೂ ಉಪ್ಪು ಅಯಾನುಗಳು ಉಳಿದಿದ್ದರೆ, ನೀವು ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್ಗೆ ಬಫರ್ viRW2 ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಅದನ್ನು ಬಿಡಬಹುದು.ನಂತರ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ಉಪ್ಪು ಅಯಾನುಗಳ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡಿ
2. ಎಲುಟೆಡ್ ಆರ್ಎನ್ಎ ಅಣುಗಳಲ್ಲಿ ಉಳಿದ ಎಥೆನಾಲ್ ಇವೆ
ಸಲಹೆ: ಒಮ್ಮೆ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕಾಲಮ್‌ಗಳನ್ನು ಬಫರ್ viRW2 ಮೂಲಕ ತೊಳೆಯಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ದೃಢೀಕರಿಸಿದ ನಂತರ, ಆಪರೇಟಿಂಗ್ ಸೂಚನೆಗಳ ಮೇಲೆ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ವೇಗದ ಪ್ರಕಾರ ಖಾಲಿ-ಟ್ಯೂಬ್ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಿ.ಇನ್ನೂ ಎಥೆನಾಲ್ ಉಳಿದಿದ್ದರೆ, ಉಳಿದ ಎಥೆನಾಲ್ ಅನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಖಾಲಿ-ಟ್ಯೂಬ್ ಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಗೇಶನ್ ನಂತರ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಅದನ್ನು 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಬಿಡಬಹುದು.
ಸೂಚನಾ ಕೈಪಿಡಿಗಳು:
ವೈರಲ್ ಆರ್ಎನ್ಎ ಐಸೋಲೇಶನ್ ಕಿಟ್ ಸೂಚನಾ ಕೈಪಿಡಿ
