A260/A230 ನ ಕಡಿಮೆ ಅನುಪಾತವು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 230nm ನಲ್ಲಿ ಗರಿಷ್ಠ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ತರಂಗಾಂತರದೊಂದಿಗೆ ಕಲ್ಮಶಗಳಿಂದ ಉಂಟಾಗುತ್ತದೆ.ಈ ಕಲ್ಮಶಗಳು ಏನನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿವೆ ಎಂಬುದನ್ನು ನೋಡೋಣ:

• ಸಾಮಾನ್ಯ ಮಾಲಿನ್ಯಕಾರಕಗಳು	ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ತರಂಗಾಂತರ	ಅನುಪಾತ ಪರಿಣಾಮ
  ಪ್ರೋಟೀನ್	~230nm ಮತ್ತು 280nm	ಎ ಯ ಏಕಕಾಲಿಕ ಕಡಿತ260/A 280ಮತ್ತು ಎ260/A 280ಅನುಪಾತಗಳು
  ಗ್ವಾನಿಡಿನ್ ಉಪ್ಪು	220-240 nm	ಎ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ260/A 280ಅನುಪಾತ
  ಫೀನಾಲ್	~270nm	-
  ಟ್ರೈಝೋಲ್	~230nm ಮತ್ತು 270nm	ಎ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ260/A 280ಅನುಪಾತ
  EDTA	~230nm	ಎ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ260/A 280ಅನುಪಾತ
  ಎಥೆನಾಲ್	230-240 nm	ಎ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿ260/A 280ಅನುಪಾತ

 
 
 
ಸಾಮಾನ್ಯ ಮಾಲಿನ್ಯಕಾರಕಗಳ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ತರಂಗಾಂತರ ಮತ್ತು ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ ಮೌಲ್ಯ

Pರೋಟೀನ್ ಮಾಲಿನ್ಯ
ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ಅತ್ಯಂತ ಸಾಮಾನ್ಯ ಮಾಲಿನ್ಯವೆಂದು ಪರಿಗಣಿಸಬಹುದು.ಮೇಲಿನ ಜಲೀಯ ಹಂತ ಮತ್ತು ಕೆಳಭಾಗದ ನಡುವೆ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿದೆಸಾವಯವಹಂತಮಾಲಿನ್ಯವು ಅದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ A260/A280 ಮತ್ತು A260/A230 ಅನುಪಾತವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು A260/A230 ಅನುಪಾತವು A260/A280 ಅನುಪಾತಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿ ಬದಲಾಗುತ್ತದೆ.
ನಂತರದ ಅವಧಿಯಲ್ಲಿಹಿಮ್ಮುಖ ಪ್ರತಿಲೇಖನor qPCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು, ಪ್ರೋಟೀನ್ ಶೇಷಗಳು ಕಿಣ್ವದ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಬಹುದು ಅಥವಾ ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪ ಮಾಡಬಹುದು.ಪ್ರೋಟೀನ್ ಮಾಲಿನ್ಯವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಉತ್ತಮ ಮಾರ್ಗವೆಂದರೆ ಸೂಪರ್ನಾಟಂಟ್ ಅನ್ನು ಆಕಾಂಕ್ಷೆ ಮಾಡುವಾಗ "ಹೆಚ್ಚು ಕಡಿಮೆ, ಅನೇಕ ಬಾರಿ ಕಡಿಮೆ" ಎಂಬ ತತ್ವವನ್ನು ನೆನಪಿನಲ್ಲಿಟ್ಟುಕೊಳ್ಳುವುದು.

2. ಗ್ವಾನಿಡಿನಿಯಮ್ ಮಾಲಿನ್ಯ
ಹೈಡ್ರೋಕ್ಲೋರೈಡ್ (GuHCl) ಮತ್ತು ಗ್ವಾನಿಡಿನ್ ಥಿಯೋಸೈನೇಟ್ (GTC) ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಡಿನಾಟರಿಂಗ್ ಮಾಡುವ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ, ಇದು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಹೊರತೆಗೆಯುವ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶದ ಪೊರೆಗಳನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ನಾಶಪಡಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಡಿನಾಟರೇಶನ್ ಮತ್ತು ಮಳೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ.GuHCl ಮತ್ತು GTC ಯ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ತರಂಗಾಂತರವು 220-240 nm ನಡುವೆ ಇರುತ್ತದೆ, ಮತ್ತುಉಳಿದಿರುವ ಗ್ವಾನಿಡಿನಿಯಮ್ ಉಪ್ಪು A260/A230 ಅನುಪಾತವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.ಉಳಿದಿರುವ ಗ್ವಾನಿಡಿನಿಯಮ್ ಉಪ್ಪು ಅನುಪಾತವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ,ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಮೇಲಿನ ಪರಿಣಾಮವು ವಾಸ್ತವವಾಗಿ ಅತ್ಯಲ್ಪವಾಗಿದೆ.

3. ಟ್ರೈಝೋಲ್ ಮಾಲಿನ್ಯ
ಟ್ರೈಝೋಲ್ನ ಮುಖ್ಯ ಅಂಶವೆಂದರೆ ಫೀನಾಲ್.ಫೀನಾಲ್ನ ಮುಖ್ಯ ಕಾರ್ಯವೆಂದರೆ ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ಲೈಸ್ ಮಾಡುವುದು ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು ಮತ್ತು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಪದಾರ್ಥಗಳನ್ನು ಬಿಡುಗಡೆ ಮಾಡುವುದು.ಫೀನಾಲ್ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಬಹುದಾದರೂ, ಇದು RNase ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ತಡೆಯಲು ಸಾಧ್ಯವಿಲ್ಲ.ಆದ್ದರಿಂದ, 8-ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸಿಕ್ವಿನೋಲಿನ್, ಗ್ವಾನಿಡಿನ್ ಐಸೋಥಿಯೋಸೈನೇಟ್, β- ಮರ್ಕಾಪ್ಟೋಥೆನಾಲ್, ಇತ್ಯಾದಿಗಳನ್ನು ಅಂತರ್ವರ್ಧಕ ಮತ್ತು ಬಾಹ್ಯ RNase ಅನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಲು TRIzol ಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯುವಾಗ, ಟ್ರೈಝೋಲ್ ಕೋಶಗಳನ್ನು ತ್ವರಿತವಾಗಿ ಲೈಸ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶಗಳಿಂದ ಬಿಡುಗಡೆಯಾದ ನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಉಳಿದಿರುವ ಟ್ರೈಝೋಲ್ ಎ260/ಎ230 ಅನುಪಾತವನ್ನು ಗಣನೀಯವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
ಸಂಸ್ಕರಣಾ ವಿಧಾನ: ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡುವಾಗ, ಟ್ರೈಝೋಲ್ನಲ್ಲಿರುವ ಫೀನಾಲ್ 4 ° ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ನೀರಿನ ಹಂತದಲ್ಲಿ ಸುಲಭವಾಗಿ ಕರಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ಗಮನಿಸಬೇಕು.

4. ಎಥೆನಾಲ್ ಶೇಷ
ಡಿಎನ್‌ಎಗೆ ಬಂಧಿತವಾಗಿರುವ ಲವಣ ಅಯಾನುಗಳನ್ನು ಕರಗಿಸುವಾಗ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಅವಕ್ಷೇಪಿಸಲು ಎಥೆನಾಲ್ ಅನ್ನು ಅಂತಿಮ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಅತ್ಯಧಿಕ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ತರಂಗಾಂತರಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ಗರಿಷ್ಠಎಥೆನಾಲ್ ಕೂಡ 230-240 nm ನಲ್ಲಿದೆA260/A230 ಅನುಪಾತವನ್ನು ಸಹ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
ಎಥೆನಾಲ್ ಅವಶೇಷಗಳನ್ನು ತಪ್ಪಿಸುವ ವಿಧಾನವನ್ನು ಅಂತಿಮ ವಿಸರ್ಜನೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಎರಡು ಬಾರಿ ಪುನರಾವರ್ತಿಸಬಹುದುಹೊಗೆ ಹುಡ್ಎಲುಷನ್ಗಾಗಿ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸುವ ಮೊದಲು ಎಥೆನಾಲ್ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಆವಿಯಾಗಲು ಎರಡು ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ.
ಆದಾಗ್ಯೂ, ಅನುಪಾತವು ಆರ್ಎನ್ಎ ಗುಣಮಟ್ಟದ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಸೂಚ್ಯಂಕವಾಗಿದೆ ಎಂದು ತಿಳಿಯಬೇಕು.ಮೇಲೆ ತಿಳಿಸಿದ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಗಳನ್ನು ಕಟ್ಟುನಿಟ್ಟಾಗಿ ನಿಯಂತ್ರಿಸಿದರೆ, ಅನುಪಾತ ಮತ್ತು ಪ್ರಮಾಣಿತ ಶ್ರೇಣಿಯ ನಡುವಿನ ವಿಚಲನವು ಕೆಳಮಟ್ಟದ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಮೇಲೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವುದಿಲ್ಲ.
ಸಂಬಂಧಿತ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು:
ಅನಿಮಲ್ ಟೋಟಲ್ ಆರ್ಎನ್ಎ ಐಸೋಲೇಶನ್ ಕಿಟ್
ಸಸ್ಯದ ಒಟ್ಟು ಆರ್ಎನ್ಎ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯ ಕಿಟ್
ಸೆಲ್ ಒಟ್ಟು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯ ಕಿಟ್
ಸಸ್ಯದ ಒಟ್ಟು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಕಿಟ್ ಪ್ಲಸ್